一个简短的笔记亲和色谱法

描述

亲和色谱法是分离的生物分子混合物的技术依赖于一个高度特定大分子结合生物分子间的相互作用和另一种物质。绑定交互的类型取决于感兴趣的生物分子例如抗原和抗体,酶和底物,受体和配体或蛋白质和核酸。绑定交互是常用来隔离不同的生物分子相比其他色谱方法亲和色谱法优越由于其分辨率高选择性和分离。

固定相包括支持介质衬底(配体)的分子共价结合暴露目标所需的活性组绑定。随着原油的混合物质通过色谱柱的物质为固定底物结合位点结合固定相,而所有其他物质洗提列的孔隙体积。其他物质已经筛选了后,可以筛选了绑定目标分子包括配体在流动相竞争或改变pH值,离子强度或极性条件。柱层析法固体培养基的包装到一个列初始混合物流经列允许沉降洗涤缓冲运行通过列和洗脱缓冲然后应用于列和收集可以实现固相绑定。这些程序通常在大气压力。绑定也可以完成一批处理如添加初始混合物的固相,混合、分离固相液相,洗涤,re-centrifuging增加洗脱缓冲,re-centrifuging和删除洗提。

有时使用混合方法的绑定完成批量但与目标分子结合固相是包装到一个列和清洗和筛选了列。亲和色谱法配体都来自有机和无机来源。血清蛋白质,凝集素和抗体生物来源的例子。低能的行为、金属螯合物和三嗪染料是无机来源的例子。第三种方法吸收膨胀床也被开发结合上述两种方法的好处。固相颗粒与液相泵放置在一列从底部和顶部退出。粒子的重力确保固相液相不退出列。解决利益关联列的粒子可以通过改变筛选了盐浓度、pH值、π,电荷和离子强度直接或通过一个梯度。以前,多个列串联设置了。相比单一列设置树脂材料的优点是可以完全加载,因为不具约束力的产品是直接传递给后续列用新鲜列材料。 Periodic Counter- Current Chromatography (PCC) refers to these chromatographic processes. As a result, the resin costs per unit of product produced can be drastically reduced. Because one column can always be eluted and regenerated while the other column is loaded two columns are already enough to take full advantage of the advantages. Additional columns can provide more elution and regeneration time flexibility but at the expense of additional equipment and resin costs.

有许多亲和力媒体可用于广泛的应用程序。简而言之,他们是(普遍)激活/功能化材料,作为功能性垫片,支持矩阵和消除有毒试剂的需求。各种各样的血清蛋白质,蛋白质、多肽、酶以及rRNA和dsDNA用于氨基酸媒体。抗生物素蛋白生物素媒体中使用生物素及其衍生物的净化。碳水化合物结合最常与糖蛋白或其他含碳水化合物的物质碳水化合物与凝集素有关,糖蛋白或任何其他碳水化合物代谢蛋白质。非特异性染色配体媒体模仿生物基质和蛋白质。谷胱甘肽可用于单独GST-tagged重组蛋白。肝素是一种普遍的亲和配体是特别有用的分离血浆凝固蛋白质和核酸酶和脂酶。

最常见的,疏水作用媒体用于目标自由羧基组和蛋白质。Immunoaffinity媒体使用高特异性的抗原和抗体分离固定金属亲和色谱法使用金属离子之间的相互作用和蛋白质(通常是专门标记)分离和核苷酸/辅酶,分离脱氢酶,激酶和转氨酶。亲和纯化的抗体血清是另一个应用程序的过程。如果血清包含抗体特异性抗原(例如,如果它来自有机体对抗原的免疫问题)可用于抗原的亲和纯化。Immunoaffinity色谱法是另一个名字。当有机体对GST-fusion蛋白产生免疫抗体融合蛋白以及消费税可能抗体标记。蛋白质共价耦合到一个坚实的支持,如琼脂糖和作为亲和配体免疫血清的抗体纯化。