研究和评论:研究的生物雷竞技苹果下载学》杂志上
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ISSN: 2322 - 0066
阿发在Kariper1*,图阿ba Demirc2,Dilek Bahard2,Ceylan Hepokure2,ArmaACanerd3,Muge Gulcihan Onald3,塞尔玛GokahmetoAluf4,优素福Tutarg5
收到:30 - 2022年5月,手稿。工作- 22 - 65406;编辑分配:02 - jun - 2022, PreQC不。工作- 22 - 65406 (PQ);综述:截止2022年6月16,QC不。工作- 22 - 65406;修改后:截止2022年6月23日,手稿不。工作- 22 - 65406 (R);发表:01 - 2022年7月,DOI: 10.4172 / 2322 - 0066.10.6.001。
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在这项研究中,我们测试了一种化学混合物导致肝炎病毒在过量生长。我们获得这个化学混合物通过瓦解白蛋白和转化酶酶分别在超临界环境中,使用酸性甲醇作为溶剂。然后我们用这种混合物作为乙型肝炎病毒的媒介。化学混合物导致乙肝病毒120分钟后用80 - 100倍。研究的真正令人惊讶的结果发生后进行细菌测试相同的化学混合物,它对肿瘤细胞的影响也被研究。但是没有效果观察癌症细胞,也没有细菌。换句话说,我们开发了一个特定的肝炎病毒的媒介。通过这种方式,我们决定,这种方法可以减少PCR的检测极限装置1国际单位/毫升可以开发。本研究将在发展中一个重要的里程碑疫苗病毒。
乙型肝炎;媒介;超临界;疫苗
乙型肝炎是一种病毒引起的肝脏炎症。这种病毒是通过血液和体液传播和性接触。雷竞技网页版由病毒引起的疾病,叫它的名字是分为两类,即急性和慢性。急性乙型肝炎病毒感染是一个短期的疾病,发生在第一个接触病毒后6个月。的症状简要:发热、乏力、厌食、恶心和/或呕吐,(b)黄疸(黄色皮肤或眼睛的颜色、尿色深、灰土色大凳子),(c)肌肉,关节,和胃疼。慢性乙型肝炎病毒感染,另一方面,可能会导致不良后果,比如肝损伤(肝硬化),肝癌和死亡如果病毒不能摧毁了超过6个月从它进入人体。可以看到,肝炎病毒是最耐药和危险的病毒之一1,2]。
该病毒的早期检测和诊断也是特别重要的。当然,使用最广泛的方法是PCR方法,即实时聚合酶链反应。它经常用于核酸的决心。PCR是一种方法,可以在短时间内产生量化的结果通过测量荧光信号,同时增加核酸的扩散。由于温度循环和荧光可以读取相同的设备,它是一个方法,它提供了更实用和更快的比传统的电泳结果。可以进行物种的繁殖和繁殖物种的定量和定性决定设备。然而,设备和方法的应用程序中使用的材料是非常昂贵的。应该创建一个协议对每个分析(3]。
合适的病毒受体物种的暴露在细胞表面和病毒入口参数定义,除此之外,主机和组织特异性病毒的易感性和经常限制病毒物种的细胞系。这个问题以乙肝病毒。克服这些障碍和促进有效的转移和乙肝病毒的复制到非易感细胞将允许包括那些关于早期复制事件,如代在细胞核内的DNA hepadnaviral [4]。
甚至每个分析师的梦想是检测单个病毒在人体内。目前,许多研究实验室PCR和LOD是30 - 108国际单位/毫升的乙型肝炎病毒(“LOD =最低数量的分析物(测量)能被探测到的样本概率(声明),尽管可能没有一个精确的量化值”)。根据世卫组织,乙型肝炎DNA负载作为“国际单位/毫升”,这被称为转换系数拷贝/毫升。根据国家卫生研究院,100000拷贝/毫升是“临床意义”级别。25 - 108国际单位/毫升之间线性分析是合理的。然而,结果低于100国际单位/毫升仍然不是很健康。
同时,疫苗开发研究进行了较弱的病毒。本研究将在发展中一个重要的里程碑疫苗病毒。目前,乙肝疫苗是强制性的在世界上许多国家。乙型肝炎病毒疫苗获得利用DNA重组技术,通过净化后的病毒表面抗原酵母表达和丰富的生产。这些疫苗应该包含10-40µg /毫升表面抗原。这种疫苗也产生双抗原包括灭活甲型肝炎病毒。如果疫苗在预防肝炎接触,与主动肝炎疫苗和被动免疫乙肝免疫球蛋白被发现高(雷竞技网页版5]。因此,为了生产疫苗,它必须在酵母在大量生产阶段,这是一个费时的过程。出于这个原因,我们生产增加的化学混合物的意义非常认真。
因此,在这项研究中,我们试图开发一种媒介促进乙肝耐药病毒等的检测研究的细节如下。
白蛋白和转化酶酶从西格玛奥德里奇。购买0.4 g的白蛋白溶解在30毫升的甲醇,400µL集中你好酸添加和混合。那么解决方案被转移到核反应堆。在反应堆,白蛋白解体在超临界点(65年在224°C和atm)。反应后,得到的产品是过滤。过滤后的液体在真空干燥箱干燥。约0.04 g的固体被溶解在50毫升的纯在超声波浴水。不溶性部分再次过滤,滤液用。同样的程序重复转化酶酶(图1)。
图1:准备样品。
穆勒辛顿汤(MHB)从默克公司购买(默克公司、德国)。的微生物大肠杆菌(写明ATCC 25922),粪肠球菌(写明ATCC 29212),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 29213),黄曲霉(写明ATCC 9170)和黑曲霉(写明ATCC 6275)得到的微生物实验室的文化收藏Cumhuriyet大学研究医院和氨苄青霉素磁盘是OxoidTM(热费希尔科学、美国)6]。
肝炎测试
20毫升的HBV DNA阳性血清(107国际单位/毫升)(西格玛奥德里奇)添加到980µl每个样本。样本准备一式三份,90年,120年,在室温下180分钟。20毫升的HBV DNA阳性血清(107国际单位/毫升)接种到980µL PBS的控制,这也准备一式三份,90年,120年,在室温下180分钟。HBV DNA水平的样本和控制测量的实时PCR方法(Qiasymphony试剂盒,德国)。分析HBV DNA检测的灵敏度和线性范围是10.2国际单位/毫升,分别为-2.1和31.6×107国际单位/毫升。每个实验进行了三次,一式三份。
确定最低抑制浓度(MIC)
找到的最低浓度的药物,杀死了至少99.99%的初始数量的微生物(MIC),宏汤方法使用轻微的修改。25μL (1×108cfu /毫升)的每一个微生物文化,如上所述,准备与3毫升MHB和混合稀释了不同量的提取(5毫升;2、5毫升;1、25毫升);混合物被孵化30、60和90分钟37°C和细菌和霉菌30°C,分别。孵化后,最低浓度的提取没有设置为麦克风微生物生长。氨苄青霉素是用作积极控制。确定氟康唑麦克风使用光谱光度测量的动力学分析,每个药物浓度的增长百分比计算使用以下方程:增长% = ((OD405井含有无毒的药物/ OD405)×100)后去除背景ODs (ODs microorganism-free井)。
最高的OD (ODmax),时间意味着最大OD, ODs(δOD = ODfinal-ODinitial)的变化对每个好,和抑制百分比值计算使用微型板块数据收集和分析软件(Bio-Tek仪器)。麦克风曲线和麦克风曲线插入每个有机体获得使用这些值[7]。
生殖细胞的
在细胞培养的研究中,必须提供合适的条件和必要的媒介为细胞生存和繁殖在体外环境。mda - mb - 231(乳腺腺癌)细胞复制在DMEM培养基中含有谷酰胺,10%的边后卫,青霉素+链霉素1%,5%股份有限公司2,在37°C,在T-25和t - 75的玻璃瓶,孵化器。
细胞种植在24-well盘子,24小时后观察入住率70%。准备药物浓度是应用于细胞。72小时后,介质从井中删除。细胞溶菌作用的解决方案是补充道。然后细胞井被声波降解法解体。他们把96年-孔板和Hoechts 33258的解决方案是补充道。测量是用多平台的读者。根据DNA分析进行了标准测量和DNA quantity-graphs绘制。
HBV DNA在上层的蛋白酶K消化处理(2.5µg /毫升100毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸,液pH值7.5,12.5毫米EDTA, pH值8.0,150毫米氯化钠,和1% SDS)为4 h 65°C。
GC / MS分析
裂解产品的成分分析是由GC / MS QP2010气相色谱质谱仪(日本岛津公司)。分析是基于方法集在前面的文学。在GC的部分;柱温箱温度设置为100°C,注入温度为275°C,采样时间为0.5分钟。在女士的部分;离子源温度设置为280°C,界面温度为280°C,溶剂减少时间为2.55分钟。这些参数测量与文献[8,9]。
与其他测试,0.04 g的蔗糖酶和白蛋白乳沟产品拍摄和50溶解在甲醇超声波浴。解决方案是根据滤纸过滤。滤液用于GC / MS分析。图2 a和2 b和表1 a和1 b显示GC / MS色谱白蛋白和转化酶。
图2:白蛋白的GC / MS色谱。
图2 b:蔗糖酶的GC / MS色谱。
我们可以看到图2 a和2 b和表1 a和1 b化学物质有95%更匹配的列表给出了从乳沟的GC / MS库产品。这两种物质被发现分解成羧酸酯和直链酰胺。考虑转化酶,白蛋白的结构,他们将给这些产品经过一系列的循环机制在高温酸性环境中放入反应。
| 峰# | 时间仓促。 | 开始Tm | Tm结束 | m / z | 区域 | 面积% | 高度 | 高度% | 一个/小时 | 马克 | 的名字 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 9.382 | 9.25 | 9.59 | 抽搐 | 950981年 | 1.98 | 110604年 | 0.8 | 8.6 | - - - - - - | 癸酸甲酯 |
| 2 | 15.001 | 14.93 | 15.08 | 抽搐 | 428911年 | 0.89 | 81370年 | 0.59 | 5.27 | - - - - - - | 甲基tetradecanoate |
| 3 | 17.222 | 17.105 | 17.45 | 抽搐 | 5690081 | 11.82 | 1686300 | 12.19 | 3.37 | - - - - - - | 棕榈酸甲酯 |
| 4 | 19.008 | 18.905 | 19.185 | 抽搐 | 7845654 | 16.3 | 2156156 | 15.58 | 3.64 | V | 9-Octadecenoic酸(Z) -甲基酯 |
| 5 | 19.225 | 19.185 | 19.32 | 抽搐 | 1591260 | 3.31 | 657116年 | 4.75 | 2.42 | V | Mrthyl硬脂酸 |
| 6 | 19.618 | 19.53 | 19.66 | 抽搐 | 1022830 | 2.13 | 375508年 | 2.71 | 2.72 | V | (E) 9-octadecenoic酸乙酯 |
| 7 | 19.812 | 19.735 | 19.915 | 抽搐 | 2158752 | 4.49 | 662857年 | 4.79 | 3.26 | V | 硬脂酸酰胺 |
| 8 | 21.714 | 21.555 | 21.87 | 抽搐 | 2.30 E + 07 | 48.19 | 7211381 | 52.12 | 3.22 | - - - - - - | 9-Octadecanamide (Z) - |
| 9 | 21.977 | 21.87 | 22.195 | 抽搐 | 5243585 | 10.89 | 894918年 | 6.47 | 5.86 | V | 硬脂酸酰胺 |
表1。GC / MS白蛋白的结果。
| 峰# | 时间仓促。 | 开始Tm | Tm结束 | m / z | 区域 | 面积% | 高度 | 高度% | 一个/小时 | 马克 | 的名字 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 9.331 | 9.115 | 9.66 | 抽搐 | 1542470 | 4.29 | 137486年 | 1.51 | 11.22 | SV | 癸酸甲酯 |
| 2 | 14.964 | 14.89 | 15.08 | 抽搐 | 623126年 | 1.73 | 104781年 | 1.15 | 5.95 | - - - - - - | 十四酸甲酯(CAS) |
| 3 | 16.966 | 16.885 | 17.095 | 抽搐 | 208761年 | 0.58 | 37649年 | 0.41 | 5.54 | V | 9-Hexadecanoic酸甲酯、(z) - |
| 4 | 17.172 | 17.11 | 17.57 | 抽搐 | 4637109 | 12.89 | 1207644 | 13.25 | 3.82 | - - - - - - | 棕榈酸甲酯 |
| 5 | 18.957 | 18.86 | 19.06 | 抽搐 | 4011680 | 11.16 | 1142972 | 12.54 | 3.51 | V | 9-Ocadecenoic酸、甲酯、(E) - |
| 6 | 19.177 | 19.13 | 19.31 | 抽搐 | 1143497 | 3.18 | 424609年 | 4.66 | 2.69 | V | 硬脂酸甲酯 |
| 7 | 19.758 | 19.7 | 19.935 | 抽搐 | 1243637 | 3.46 | 448789年 | 4.92 | 2.77 | - - - - - - | 硬脂酸酰胺 |
| 8 | 21.65 | 21.55 | 23.49 | 抽搐 | 2.10 E + 07 | 58.36 | 5187696 | 56.9 | 3.74 | SV | 9-Octadecanamide (Z) - |
| 9 | 21.911 | 21.86 | 22.06 | 抽搐 | 1565388 | 4.35 | 424474年 | 4.66 | 3.69 | T | 硬脂酸酰胺 |
表1 b。GC / MS转化酶的结果。
细菌测试
稀释都由比较的管的光密度微生物负载并没有减少。微生物引入媒介将抑制化学物质(氨苄青霉素),如主要抗生素剂对照组(不能称为抗菌/抗真菌,除非它显示了一个抑制超过10%)(10]。抗菌剂预计将减少环境中的微生物的负担在一段时间后,可以以许多不同的方式,可以检查结果的准确性。结果,使用样本不作为抗菌和抗真菌剂,图3。
图3:表示抑制试验。请注意。
病毒是非常小的,不要代谢,因此,他们没有能力自行繁殖。它们进入细胞通过武力和使用它们来产生新的病毒。然后他们在病人的身体保持增殖迅速破坏宿主细胞。抗生素对他们没有影响。另一方面,细菌是一个活生生的小生物,由一个细胞组成。他们可以在任何环境下生存,如空气,水,土壤等和繁殖很快。抗生素预防细菌的生长(11]。与治疗“肺炎”,这是一种细菌性疾病,可以使用抗生素治疗,抗病毒因子应该首选治疗“病毒性肝炎”,这是一种由病毒引起的疾病(12]。
癌症的测试
在这项研究中,活细胞接受100%的控制。没有变化是观察到细胞的DNA含量与控制(13]。获得的流体从白蛋白杀死更多的细胞比其他任何物质,而一切物质杀死癌细胞的100%左右,图4。没有显示获得的化学混合物对肿瘤细胞的影响。因为这个混合物无论是对肿瘤细胞有毒性作用,也不支持癌细胞的扩散。据悉,它不影响细胞死亡机制分子来说,不会引起线粒体通路的变化。
图4:高等教育机构的首选。
肝炎测试
获得的乳沟产品溶解于纯水在超声波浴和滤纸过滤。滤液用于肝炎测试。正如所见的图5对照组9340 - 6790 - 12200国际单位/毫升90-120-180 minute-cultivations乙型肝炎病毒检测,分别在554000 - 714000 - 667000国际单位/毫升乙型肝炎病毒检测与转化酶酶裂解产品准备;换句话说,中含铅病毒100倍增长,尤其是在120分钟。白蛋白的乳沟产品酶,421000 - 459000 - 334000国际单位/毫升90-120-180 minute-cultivations乙型肝炎病毒检测,分别,这意味着它60 - 70倍病毒引起的增长尤其在120分钟。通常情况下,当蔗糖酶和白蛋白酶是没有把它们用作营养培养基在超临界环境中,它们会引起比对照组5 - 10倍的增长,而他们的产品,这是瓦解在超临界环境中,造成乙肝病毒增长近100倍。这个有趣的结果是因为病毒的核酸需要繁殖。病毒自己不能繁殖,他们需要其他细胞。他们需要核苷酸在被连接到一个细胞。
图5:高等教育机构的首选。
甘氨酸/谷氨酰胺与单个碳或胺需要核酸的形成。浓度(0.003 - -0.004 g / 50毫升)的氨基酸形成蛋白质解体当暴露于高压力和甲醇对应于平均0.5 - 1毫米。在一个10倍甲醇侧链的碳会导致电离,增加蛋白质的瓦解,但当面对高压是影响长度。最终,这些裂解产品获得超临界介质,提供了病毒核酸合成的好媒介(图5)。
在当前研究中使用了两种不同的蛋白质:白蛋白和转化酶。温和的酸性条件甲醇(pH值:5)以及高压力和温度打破了蛋白质分解成更小的残留物。乳沟模式是相似的,这表明,蛋白质序列的解体是独立的。流程创建核苷酸合成的重要前体,蛋白质外衣,单一的碳代谢。众所周知,乙型肝炎病毒的复制所需的RNA合成核苷酸。病毒也需要蛋白质残留病毒基因组的外套。复制病毒的生命周期至关重要。甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸盐、甲酸是重要的新创途径。所有生物体似乎几乎相同新创由于嘧啶和嘌呤生物合成途径。自由基地不得的中间体新创通路,但他们形成一些救助途径的中间体。新创途径分享各种嘌呤和嘧啶的合成前体。每个通道类型有一个氨基酸的重要前体,即嘌呤有甘氨酸和嘧啶有天冬氨酸。最重要的氨基酸来源组织谷氨酰胺,这是在五个不同的步骤使用新创通路。嘌呤途径利用天冬氨酸氨基源的两个步骤。Phosphoribosyl焦磷酸(PRPP)最重要的是,在这些途径核糖结构被保留在产品核苷酸(14]。
核苷酸合成确定复制率和可能停止合成落后。因此,乳沟的蛋白质供应救助途径和前体的中间体新创合成。提供单一carbon-formate通过流程增强核苷酸和蛋白质外衣组件的内容。
这个过程有效地加速复制因为乳沟模式产生适当的前兆和中间体为乙肝病毒复制。此外,添加这汤在适当的浓度(0.003 g / 50毫升)加速病毒复制周期。优化过程的不同病毒可能是临床研究的主题。
在这项研究中,我们已经解体转化酶和白蛋白酶在超临界环境和我们发布的产品通过GC / MS分析。我们没有发现任何严重的分歧进行癌症和细菌裂解产品的测试。但乙肝病毒测试的结果相当令人惊讶。我们意识到我们生产的一种媒介,导致病毒繁殖几乎100倍在120分钟。这样一个媒介可以帮助生产的藻类生物反应器,生产一些微生物有机体,在某些致病物种的决心和快速生成的标准。与产品获得作为本研究的结果,乙型肝炎病毒的媒介发展。同时,可以检测到非常低的乙型肝炎病毒在人体内由于校准创建这个媒介。同时,疫苗开发研究进行了较弱的病毒。本研究将在发展中一个重要的里程碑疫苗病毒。目前,研究已经启动的浓缩或增加DNA的有效性来自未来的母亲的孩子。 In our next study, other characteristics of the product produced by this method will be published..
作者宣称没有利益冲突。
本文的数据是可用的。
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