研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
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T Sudha1*,来自克利须那神1,VR RaviKumar2
收到日期:14/10/2013;接受日期:19/11/2013;发表日期:22/11/2013
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一个简单的和稳定显示液相色谱测定方法了测定盐酸二甲双胍药物纯度的物质,药物产品散装样品和药物剂型在它的杂质和降解产物的存在。的流动相使用由缓冲:乙腈(挺% v / v)与pH值3.6(调整为0.006米磷酸)和流量1.0 ml / min权力平等主义的模式。分离是由紫外检测器波长218 nm使用Inertsil ODS 3 v(250毫米X 4.6毫米id、5μ)列。这种新方法验证按照USP要求试验测定新方法,包括精度、精度、特异性和线性。当前的方法展示了良好的线性范围的50 - 200%的盐酸二甲双胍。方法的准确性被发现从97.11到98.36%。该方法的精度反映在复制被发现的相对标准偏差为0.27%。杂质测定相同的验证方法也根据USP需求进行定量测定的杂质包括准确度、精密度、线性、选择性和量化的极限。
开发、反向阶段LC的盐酸二甲双胍、杂质、稳定指示。
盐酸二甲双胍化学称为Imididicarbonimidic二酰胺、n n -二甲基盐酸mono。二甲双胍杂质相关化合物(RCA),相关化合物B (RCB)和相关化合物C (RCC)化学称为1 -氰基胍(RCA)、1 -甲基盐酸biguanidine (RCB)和N, N二甲基(1、3、5)三嗪2,4,6三胺(RCC)。盐酸二甲双胍是一种biguanidine和治疗非胰岛素依赖型糖尿病患者糖尿病的降糖药(使人们)。其作用机理不同于其他类口服antihyperglymic代理。它降低血糖水平通过减少肝葡萄糖生产,减少肠道吸收的葡萄糖,和改善胰岛素敏感性通过增加外围葡萄糖摄取和利用(1]。USP和BP描述非水滴定法作为盐酸二甲双胍的方法分析和另一个单独的高效液相色谱法杂质的分析方法(2,3]。然而稳定性指示分析测试方法的盐酸二甲双胍及其杂质(RCA, RCB, RCC)是必要的。许多高效液相色谱法同时测定等方法Glimipride,盐酸吡格列酮和二甲双胍反相高效液相色谱法方法平板电脑配方(4),同时测定盐酸二甲双胍、格列齐特和吡格列酮的反相高效液相色谱法在平板配方5开发和验证。其他几个方法高效液相色谱法和光度法测定盐酸二甲双胍(6,7,8,9,10,11,12也被报道。然而所有这些方法,并不是用于稳定指示测定盐酸二甲双胍和其潜在的杂质。分析方法的开发和验证的盐酸二甲双胍及其相关化合物(1 -氰基胍)在平板配方被报道(13]。在这种方法中只有一个杂质进行了分析。开发和验证的同时测定盐酸二甲双胍和杂质的平板配方(14据报道。然而他们用亲水交互液相色谱技术需要一个专栏,分析师和专家在这个领域的不可用在一些实验室。当前工作的目标是开发一个简单的RP hplc法,稳定性指示分析方法中盐酸二甲双胍及其相关化合物平板配方。
验证当前的两种测定方法进行了盐酸二甲双胍在平板配方(化验)和定量测定的三个杂质(RCA, RCB和碾压混凝土)。盐酸二甲双胍的验证方法分析根据分析测定相当于USP包括精度、精密特异性、线性和范围,验证方法的RCA, RCB, RCC根据需求进行定量测定的USP杂质包括准确度、精度、特异性、线性、范围和定量限。
化学物质
乙腈高效液相色谱从Rankem获得年级,庚烷磺酸钠和氯化钠从默克公司(印度孟买)。相关的化合物从法令药品盐酸二甲双胍和二甲双胍,Kelambakam,钦奈
装置
高效液相色谱系统(2489年水)泵,autosampler,列,烤箱和紫外检测器。使用授权软件。色谱分析是一个Inertsil ODS-3V(5毫米)(长度250毫米,6毫米内径)列。列是保持在300摄氏度的温度。
股票的解决方案的准备
杂质股票的解决方案是由溶解每1毫克的相关化合物(A, B, C)在100毫升的稀释剂来获得一个解决方案有一个每个相关化合物的浓度(0.5毫克/毫升)。
盐酸二甲双胍的解决方案及其相关化合物是由添加5毫升20毫升的杂质原液稀释剂。制定样品的盐酸二甲双胍(平板电脑)是由溶解量的平板电脑相当于125毫克100毫升盐酸二甲双胍的稀释剂。部分样品溶液在3500转离心10分钟5毫升的上层液体被转移到50毫升容量瓶和添加稀释剂到马克(125毫克/毫升)为了检测杂质和degradents可能出现在盐酸二甲双胍片的样品。
为试验样品溶液制备如下。5片的格列本脲/二甲双胍HCL准确称重找出平均体重和粉。平板电脑粉相当于250毫克盐酸二甲双胍是转移到50毫升容量瓶和稀释剂的体积。部分样品溶液在3500转离心10分钟。5毫升的上层的液体转移到100毫升容量瓶和由体积稀释剂2。
方法验证
精度
验证了该方法的精度方法精度和系统精度。系统精度检查通过使用一个标准的适用性的解决方案。标准的适用性的解决方案是准备和注入。峰面积响应六个复制注射记录标准的解决方案。方法精度检查注射6个人准备盐酸二甲双胍格列本脲和二甲双胍(1.25毫克/ 250毫克片剂)样本中掺入的三个杂质。记录色谱图。% RSD为地区三个杂质计算和系统适用性进行了计算。
检测极限并限制的量化
标准和杂质股票的解决方案被稀释的体积来确定检测和量化的极限的极限。从注射和LOD确定定量限准备解决方案,使用下面的公式。
LOD = 3.3 x剩余标准差/斜率
定量限= 10 x剩余标准差/斜率
线性
线性测试解决方案的分析方法是准备从二甲双胍原液的八个定量限浓度水平,400%的测定分析物浓度(0.095,0.119,0.143,0.167,0.191,0.239,0.359和0.479μg /毫升)。峰面积与浓度数据采用最小二乘法回归分析。线性测试解决方案相关物质方法被稀释股票准备解决方案所需的浓度。准备的解决方案在7个浓度水平从200%的定量限规范水平(定量限、30、50、80、100、150和200%)。
精度
精度分析方法评估使用三个浓度水平的50一式三份,100年,200%的样本(二甲双胍格列本脲和盐酸二甲双胍片)。加标回收率和实验对样品来确定有关物质方法的准确性。研究进行了一式三份使用四个浓度水平定量限,100和200%。复苏对二甲双胍及其杂质的百分比计算。
鲁棒性
的鲁棒性度量方法能力不受影响小,深思熟虑的方法参数的变化,并提供可靠性在正常使用的方法。确定开发方法的鲁棒性,实验条件被故意改变和系统适用性参数对二甲双胍及其杂质计算。流动相的流速为1.0毫升/分钟。研究流量对分辨率的影响,改变了流0.1单元从0.9 to1.1ml /分钟。列温度对分辨率的影响,研究了在35°C和25°C,而不是30°C。乙腈百分比的影响强度的解析研究了不同乙腈2 + 2%。pH缓冲的分辨率的影响,研究了通过改变从-0.2 + 0.2。
溶液的稳定性
二甲双胍溶液稳定性的分析方法是由样品的测试解决方案和参考标准在严格限制在室温下容量瓶48小时。相同的示例解决方案化验12小时间隔到研究期间。二甲双胍溶液稳定性及其杂质在有关物质方法是由离开飙升示例解决方案在严格限制在室温下容量瓶48小时。杂质含量A, B和C决心每12小时间隔研究期间。
强度
强度是衡量测试结果的再现性在正常操作条件的变化,如分析师分析,系统、列列和每一天。方法精度强度(再现性或中间精密度)的分析方法是由注射六个人制备二甲双胍(125μg /毫升)水平的参考标准。中间精密度的测定方法评价不同的分析师。中间杂质方法的精度取决于注射6个人制备格列本脲和二甲双胍(1.25毫克/ 250毫克片剂)上升1.25μg /毫升的已知杂质通过使用不同的分析师和不同的一天。% RSD为计算。
特异性(强制降解研究)
特异性的能力意味着方法分析物的反应在其潜在杂质的存在。发达反相液相色谱方法的特异性进行二甲双胍存在的杂质即,B和c的压力进行了研究格列本脲和二甲双胍平板电脑提供一个指示该方法的规范。退化与紫外线的应力状态,企图酸(盐酸1 n),基地(1 n氢氧化钠),氧化(3%过氧化氢)和热(105°C)来评估该方法分离的能力从它的降解产物二甲双胍。光和热研究,研究周期是3天而酸,碱和氧化3小时。峰纯度测试进行了二甲双胍峰用PDA探测器在压力示例。
滤波器的研究
滤波器研究确定过滤器使用的适用性和确定的滤液被丢弃之前收集样品溶液进行分析。准确性样本100%的解决方案是用于筛选研究。这个样例被分成六个部分。一分的准备样本离心机(3500 rpm 10分钟),从离心管注入得到上清液和分析。离心机的样本被用作控制滤波器的研究。第二部分样本0.45μ尼龙过滤器过滤丢弃第一1毫升,2毫升,3毫升和5毫升的滤液。精度100%样本已被视为0.45μPVDF过滤器。
方法开发
Xterra RP18(150毫米X 4.6毫米,5μ)列测试使用缓冲区的混合物:乙腈作为流动相。(不同的体积分数)缓冲pH值4.58调整为0.006米磷酸。使用这些不同的流动相,但是,峰尾矿被发现二甲双胍峰、基线干扰峰,峰的形状是不好的。然而,缓冲的混合物(pH值3.65调整为0.006磷酸)与乙腈的比例90:10%v / v和Inertsil C8(250毫米X 4.6毫米id、5μ)列使用。因此,USP板数被发现3500和只有一个相关的化合物峰(RC-A)被发现在3.06分钟。接下来,增加运行时间为40.0分钟,上升与已知杂质(RCB,碾压混凝土)。二甲双胍相关化合物C峰值被发现20.042分钟和相关化合物B峰值失踪了。代替Inertsil C8,它们对称C18柱,相同的流动相流速1.0毫升/分钟。盐酸二甲双胍和相关化合物B之间的分辨率被发现非常少。然后Inertsil ODS 3 v(250毫米X 4.6毫米id、5μ)列,使用相同的流动相和流量。 The USP plate count for metformin HCL was found to be 11442 and USP resolution between metformin HCl and metformin related compound B was found to be 2.81 minutes. After this optimization this method was employed for the separation of and its related compounds (RCA, RCB & RCC) a good separation with adequate resolution was obtained图1。
图1:优化色谱对二甲双胍及其杂质
方法验证
该方法验证按USFDA指南(15]。
方法开发后,电流测试方法的验证盐酸二甲双胍按照USP要求进行试验测定(类别1为活性成分的定量分析方法完成了医药产品包括准确度、精度、特异性、线性和范围
精度
有关物质方法的精度验证了方法精度和系统精度。% RSD为地区的杂质,b C在有关物质方法精度研究被发现是1.94,2.97和3.63%。%为系统中的分析结果精度,研究发现0.27%的盐酸二甲双胍。%相对标准偏差值已知和未知杂质6个样品准备工作不应超过10.0%。这表示好方法的精度。系统适用性参数值被发现的限制。中给出的值表1。
表1:数据系统精度
线性
线性标定图的分析方法得到的范围从50 - 200%,相关系数是0.9991。结果显示比之间存在良好的相关性分析物的峰面积和浓度。线性校准阴谋有关物质方法得到的校准范围从定量限为200%。发现相关系数(r2) 0.9994, 0.9923和0.9924,RCA分别RCB和碾压混凝土。线性回归数据显示,该方法线性浓度范围的定量限为200%。所示的分析报告表2。
表2:线性回归的盐酸二甲双胍及其相关化合物的数据
极限检测和量化的极限
确定检测极限,限制的量化和精确定量限的值二甲双胍及其杂质所示表3。LOD和定量限值如图所示表明二甲双胍的方法是敏感的测定有关物质。
表3:LOD和定量限数据对盐酸二甲双胍及其杂质
精度
二甲双胍的百分比复苏药物产品范围从97.11到98.36%。恢复比例二甲双胍和格列本脲片样品中杂质的变化从81.30到12.30%。杂质和盐酸二甲双胍的%恢复值所示表4。因此该方法是可以接受的准确性。
表4:评价的准确性研究
鲁棒性
在所有故意不同色谱条件(流速、柱温度、流动相比例的有机溶剂和pH值)之间的分辨率对化合物都是大于2.0和峰面积的相对标准响应从五个复制的标准解决方案不应超过5.0%。基于上述讨论,得出该方法被故意小流量的变化影响,柱温、流动相比例和缓冲的pH值。
溶液的稳定性
标准的解决方案的结果在48小时内不同比例不到10.0%相比,最初的标准浓度,因此%浓度差的验收标准应不超过10.0%。因此可以使用标准的解决方案到48小时后准备如果是储存在室温下。上升的结果示例解决方案到48小时不同比例不到20.0%。相比,初始的验收标准,因此%的杂质差不应超过20.0%。溶液稳定性实验数据证实,标准溶液、样品溶液的48小时内稳定。
强度
相对标准偏差(RSD)的峰面积响应从五个复制注射标准解决方案被发现是0.19为分析师——分析师-我和0.90。二甲双胍之间的USP决议相关的化合物B和盐酸二甲双胍被发现不少于1.5系统适用性的解决方案。分析师——analyst-I(3.28和3.05)。杂质的%相对标准偏差值是1.94,2.97和3.63的杂质,B和C分别(analyst-I)和杂质的%相对标准偏差值是1.42,6.37和3.53杂质A, B和C(分析师- II)分别为杂质(%相对标准偏差值不应超过10.0%)。平均杂质的比率值获得两个分析师被发现在0.80到1.20的验收标准对所有的杂质。因此该方法被发现的。
强制降解研究的结果
二甲双胍示例解决方案被发现在基础和显著降低过氧化应激状态。轻度退化在酸应力条件。它被发现在光解和热应力的条件下是稳定的。在强制降解,观察无二次峰值退化引起的样品干扰二甲双胍的洗脱峰。峰纯度分析使用光电二极管阵列检测器显示二甲双胍同质性。所有已知杂质不干扰二甲双胍的峰值。研究验证,表明该方法具体与稳定。所示的分析报告表4。
滤波器的研究
测定和杂质过滤的样品中发现的比例与试验和离心机的部分样品中的杂质,没有显著性差异分析和不同卷过滤杂质之间的比例。因此,0.45μPVDF和尼龙过滤器适用于验证和丢弃4毫升的样品溶液作为滤液,如上所述的方法,是一个合适的体积丢弃之前收集通过高效液相色谱法进行分析。
一个简单、准确和精度稳定性指示分析的高效液相色谱分析方法的开发和验证的盐酸二甲双胍的平板配方。当前的方法分离盐酸二甲双胍和相关化合物的能力(RCA, RCB, RCC)。低LOD和相关化合物定量限使用这种方法使这个杂质的检测和量化在低浓度。