验证研究黄曲霉毒素在实际样品的花生和干水果在城市城市效果

文摘

花生是一种受欢迎的种子油可在印度。花生和花生产品视为食品在所有年龄组的人口,尤其是在城市地区。人们更愿意买花生食品当零食吃。花生是证明是一个很好的衬底的增长Aspergiillus sp.和黄曲霉毒素的产生。黄曲霉毒素的致畸、诱变和致癌的真菌毒素被证明是包含在食品和饲料中。现在工作进行了初步研究,以确定的黄曲霉毒素污染水平商用烤和油炸花生、杏仁、cashewnuts和pistacheos收集那格浦尔的商业市场。该技术用于分析效果。30个样本的花生和干水果效果分析的那样,24个样本阳性黄曲霉毒素B1代表80.0%浓度范围为1.45 - 12.0μg /公斤。质量控制和验证也进行。检测范围分别为0.84和2.70 (MDL,定量限)。 The samples contain aflatoxin within the permissible limits.

关键字

黄曲霉毒素B1,效果,干水果,花生

介绍

发病率近年来食品污染越来越频繁的抚养问题对人类健康和经济后果。黄曲霉毒素(AF)是自然产生的次级代谢物的真菌物种属于曲霉属真菌的菌株a . flavus和a .寄生等模具。至少20个不同形式的房颤存在。四个最常见的形式的alflatoxin在植物性食物中,以最高到最低的毒性,B1, G1、B2和G2。房颤B1是主要的AF形式和其他三种形式都很少见到没有某种程度的B1污染。

AF-producing真菌可能污染水果、坚果或者玉米种植,存储和/或处理条件下,有利于真菌生长。炎热潮湿的气候和害虫的压力导致瘀伤或削减商品将有利于AFproducing真菌的生长,在田间或存储。长期存储和/或存储或运输过程中污染也伴随着更高的AF水平的另一个因素影响的AF干果专门类型的干燥方法。有很多的变化和/或组合干燥工序使用的食品行业根据所需的成品的特点,成本,和设备的可用性。典型的常规干燥过程中温度不超过120°C,所以太低导致明显的黄曲霉毒素降解。水果是日晒法最常用的干燥方法。

花生(花生hypogaea l .),也被称为花生,后是最重要的豆科bean(菜豆l .)生长在印度。并在全国广泛使用。有大幅增加花生生产粮食和经济作物,因为意识的增加他们的价值的蛋白质来源内容)(23 - 25%,脂肪(40 - 50%)、石油(40 - 52%内容),10 - 20 %碳水化合物根据不同[1]。与动物蛋白的成本不断增加、花生正成为一个更重要的蛋白质来源。一千克花生富含食物能源和提供大约2公斤的牛肉,一样的能量值4升的牛奶,或36中型鸡蛋。花生种子也是维生素E的营养来源,烟酸,falacin,钙、磷、镁、锌、铁、核黄素、硫胺素和钾。花生是生吃,烤,变白,花生酱,粉碎和混合与传统菜酱或binyebwa,熟粘贴。

调查中的黄曲霉毒素含量和干果坚果产品进行因为黄曲霉毒素暴露和人类健康的影响的广泛消费这些产品在印度市场。频繁的监测中污染物的含量从而进行评估干水果和花生在那格浦尔城市的商业市场。印度的食品标准和安全机构(FSSA)负责执行安全生产法律、法规,出售,概述的食品和食品成分和内容在2011年食品和药品法案和法规。它还建立了健康食品中污染物残留的标准。公差是建立一套风险管理工具,通常只对食物大大有助于总膳食暴露。黄曲霉毒素的耐受度范围从0到50μg /公斤根据食品安全法案》。在印度,容许限30μg /公斤已经规定在食品安全和标准(污染物、毒素和残留)规例》2011年,所有食物意味着对人类消费[2]。

总结了各种限制国际机构建立的黄曲霉毒素表1。

材料和方法

花生和干水果样本随机收集的那格浦尔城市的不同的市场。样品被收集在消毒聚乙烯袋避免进一步污染并存储在冰箱在5°C到进一步的研究。

化学药品和试剂

黄曲霉毒素B1标准从Hi-Media购买,孟买。股票的解决方案在高效液相色谱检测黄曲霉毒素年级甲醇和在黑暗中保持在-20°C。

工作解决方案之前准备立即用高效液相色谱级甲醇稀释股票的解决方案。溶剂用于高效液相色谱法的效果是年级当所有其他试剂使用可用的最高级别分析。5点校准曲线,一式三份注入,工作范围的5到25μg /公斤黄曲霉毒素B1。

提取花生的黄曲霉毒素和干水果

黄曲霉毒素的检测和估计的花生和干水果样品城市市场,溶剂萃取的分析过程和随后的效果的分析工作。5 - 6 g的每一个干细粉碎样品摄于100毫升锥形烧瓶含有甲醇和水的混合物(60:40v / v)和动摇对水平旋转瓶4分钟和允许站10分钟。此后,混合物过滤,滤液20毫升,20毫升的10%氯化钠溶液混合和20毫升石油醚和动摇了2分钟。较低的水层动摇了50毫升的二氯甲烷1分钟和允许分开。二氯甲烷阶段与5 g硫酸钠干燥,过滤,蒸发干燥。甲苯的残渣溶解在0.5 ml:乙腈(98:2)混合物和存储在黑暗中黄曲霉毒素的定性和定量分析。所有的程序都在暗光因为黄曲霉毒素进行光降解。

黄曲霉毒素的定性和定量评估

定性评估的黄曲霉毒素是由高性能薄层色谱分离法。效果分析设备(CAMAG Linomat 5)与171005年CAMAG薄层色谱扫描仪,CAMAG可视化工具171113和运营winCATs软件。第一发展商会充满了乙醚高达5厘米。板被放置在室和溶剂被允许迁移的50 mm的距离。随后板干,认为在366海里。二次开发,将黄曲霉毒素,室中充满和饱和的氯仿:丙酮:水(140:20:0.3)和板插入。溶剂迁移到80毫米。板干燥,紫外线照射下在366海里。板扫描在366 nm和黄曲霉毒素浓度计算。

结果与讨论

约30的坚果和干水果样品组成的花生、腰果、杏仁和pistacheos收集当地市场的那格浦尔城市。这些样品对黄曲霉素含量进行分析。分析的结果进行了总结表2。10的花生样品分析8例(80.0%)阳性黄曲霉毒素B1。腰果,7阳性(70%),杏仁和pistaceous 80%检测黄曲霉毒素B1。

黄曲霉毒素污染是由于无处不在的产毒素的患病率黄曲霉自然污染物在那格浦尔样本。黄曲霉,尽管作为一个弱植物病原体缺乏能够穿透坚果的外壳,它可以通过相当坚硬的甲壳进入到可食用的内核。黄曲霉,此外,丰富的热带环境中,一个特定的偏好坚果作为衬底。因此,黄曲霉毒素经常与高碳水化合物和高脂肪食品和饲料像花生及其衍生产品,杏仁,开心果。虽然这些坚果和干水果污染水平的限制范围内30μg FSSAI设定的/公斤。

质量控制

为了在实验室进行黄曲霉毒素分析,有必要开发一个飙升样本的内部质量控制程序进行分析。正在进行数据质量检查与建立绩效标准来满足方法的性能特征。效果方法需要验证的所有程序(步骤)所采取的方法。这需要评估线性、恢复(真实或偏见的测量)和精度。

量化的组件存在于样品的吸光度在紫外线或排放在荧光板,使用扫描测密度术。扫描仪还有多波长扫描等设施,fluorence识别化合物光谱扫描和记录。光谱数据优势,单色光在190 - 800纳米的范围可以调到分离的最大吸光度/荧光化合物。扫描测密度术适用于识别相比之下的每个样本追踪资料的模拟曲线结合多波扫描。紫外光谱分离组件的记录和用于识别。荧光测量在366海里。图1总结了图像情节获得标准和样品的花生在同一个盘子里。

可以看出图像是薄层色谱的一个附加特性,因为真正的色谱图,作为其他色谱技术获得,也可以通过微评估。个人的不同颜色区域的图像上看到作为一个额外的维度。基于扫描的数据,可以在一个波长比较样本。图2说明了扫描的三维图黄曲霉毒素的366海里。

五个标准浓度范围做ug / kg是随着样本在同一板校准曲线。一个线性校准曲线与相关系数(r²0.998获得见的)图3。

精度评估的复苏在空白和样品相应的黄曲霉毒素工作标准溶液的体积。共有7个样品,一个在每一天,与浓度的上升2.0 ug / kg。样本比处理效果进行分析。每天分析的结果进行了总结表3。

经济复苏在87年-120%的样品中发现了。盘中精度百分比是表示为相对标准偏差为每个黄曲霉毒素分析。获得的RSD为13.3%。

方法检测极限(MDL)也确定了黄曲霉毒素分析在这种研究[3]。它提供了一个有用的机制,说明了分析方法的能力。MDLs黄曲霉毒素的计算如下:

样本标准差乘以正确的学生的t值的统计表格。

本研究七复制,因此六自由度被认为是。这是3.143。MDL计算如下:

MDL = (s) (t值)= 0.27 * 3.143 = 0.84μg /公斤。

同样,作为随后确定定量限10倍的标准差恢复黄曲霉毒素。定量的极限也计算为:

定量限= 10 x (s) = 10 x 0.27 = 2.70μg /公斤

MDL和定量限从而计算出黄曲霉毒素B1在研究和总结了下表3。

也尝试估计相关的不确定性分析方法采用自底向上的方法。所有数据出现在本研究符合NABL 17025要求。实现在我们的实验室作为常规方法和实验室认可。每一步的不确定性估计识别哪些是有关全球不确定性分析中所说的因果关系的技术图4。

不确定性评估过程进行了总结图5。

与每个步骤相关的标准的不确定性量化的评估分析物浓度的校准曲线,计算样本提取的复苏。在获得标准的不确定性(u (x)),表示为一个标准偏差,并结合标准不确定度测定。在某些情况下,它是可行的使用相对不确定性,它代表的不确定性的价值规范化。它是获得标准的不确定性之间的商u (x)和x的值:

估计的不确定性是按照过程进行了总结图5。

合并后的标准不确定度u (f)计算

c是一个灵敏度系数关联到每一个变量,给出了函数的偏导数:c (x) =∂f /∂x。

上面的解释不同方面估计相结合的不确定性已经应用于黄曲霉毒素分析。随后扩展不确定度是决定开发一个区间内被测变量的值可能说谎。因此2倍是用于获取95%的置信水平。

发达的方法验证,以确保方法的可行性在常规分析中的应用。参数如特异性、线性定量限制,精度、准确性和鲁棒性测定。在特异性分析代表单个化合物的色谱和干扰分析物的混合物进行了研究。证明了线性和工作范围的分析标准对于不同浓度的三倍。这项研究是由每一次用连续稀释。线性证明了策划对浓度和曲线拟合图反应没有强迫为零。斜率和相关系数计算。检出限七复制的强化样本运行及其执行决定。评估的量化和检测极限的极限是由估计的准则分析检出限。精密、七复制强化样本矩阵和他们的决定执行。精度分析基于七复制即重复性研究。 Intermediate precision obtained on different days (Reproducibility) and relative standard deviation (RSD) is determined. Robustness of analytical method was established by changing the experimental conditions such as temperature.

引用

1. 野蛮人,他,基南系统花生仁的成分和营养价值。在J.Smart(编辑)。花生作物:改进的科学依据。查普曼和大厅,伦敦,1994年。
2. FSSI、食品安全和标准(污染物、毒素和残留)规定,2011年。不。2-15015/30/2010,新德里。印度食品安全和标准的权威。卫生和家庭福利部,2011年。
3. 分析检测的限制。指导和实验室指南确定方法检测极限,报告出版- ts - 056 - 96年,威斯康辛州的自然资源,实验室认证项目,1996年4月