不定拍摄再生芝麻(胡麻属indicum l .)(胡麻科)通过deembryonated子叶的外植体

文摘

引种射在芝麻再生,通过de-embryonated子叶的外植体,尝试使用六个不同的基因型;两人陆地种族(Kankapura当地- KNL和泰米尔纳德邦当地TNL),三个品种被释放(DS-1 DSS-9和WII)和繁殖(rt - 273)。三个媒体成分(½女士基底媒体补充20μM TDZ + 2.5μM IAA,有或没有25μM BAP和完整的基底女士媒体补充只有25μM BAP)使用的最高拍摄再生(100%)与8.15和7.37拍摄数字/子叶rt - 273年实现的组合(½女士20μM TDZ + 2.5μM IAA + 25μM软面包卷或没有BAP)其次是DS-1与6.15和3.89(100%和95.55%),KNL(88.88%和7.55)和TNL(分别为88.88%和5.73)在½女士20μM TDZ + 2.5μM IAA + 25μM软面包卷。女士25μM BAP独自未能诱导再生。

关键字

不定拍摄再生,de-embryonated子叶,女士媒体,芝麻,胡麻属indicum。

介绍

芝麻(胡麻属indicuml .),胡麻科家族中的一员,是一个重要的和最古老的人类已知的油料作物种子和古代传说是不可或缺的一部分,也在东非和印度早期起源(纳亚尔和论著,1970;Bediginan Harlon, 1986)。实际上,它也在印度种植(乔希,1961)主要食用油和特权“油料作物种子的皇后”(维斯,1971)。传统育种方法是费时和有时不可能(萨达纳舞,1998)。组织培养技术的发展前景提供了一个巨大的芝麻改进。从下胚轴和子叶的射再生外植体由几个工人也有报道,但在非常低的频率(Rao Vaidyanath, 1997;Taskin和作风,1997;金正日,2001;Kariyallappa, 2003;Shashidharaet al .,2008;是et al .,2006;搜索引擎优化et al .,2007;2009年和Manju Bangaramma,et al .,2010)。事实上,与几个失败,高频再生是通过下胚轴(Bangaramma Lokesha, 2010)。但是,一个可靠的和可再生的再生协议,在当地重要的品种,仍然是一个瓶颈在芝麻。有趣的是,拍摄组织培养的再生是一个至关重要的一步遗传转化和转移相关的基因生物和非生物压力。创建;使用体外细胞系选择链格孢属芝麻枯萎病真菌耐药性已经尝试(Kariyallappa 2003;Praveen, 2006;Lokesha和奈克,2011),成功地诱导可取的somoclonal变异。然而,再生是不可能欠缺乏可靠的协议。体细胞胚胎也从hypocotyl-derived诱导愈伤组织,但没有实现植物再生(玛丽和Jayabalan, 1997;Bangaramma, 2009; Bangaramma and Lokesha, 2011). Somatic embryogenesis from hypocotyls segments (Mary and Jayabalan, 1997) and cotyledon and root and sub-apical hypocotyls segments from younger seedlings (Zeevaart and Creelman, 1988) of胡麻属indicuml .据报道。然而,徐et al。(1997)报道,植物体细胞胚转化率从很低(少于12 - 13%)。

第一次再生能力高de-embryonated子叶外植体通过外源拍摄形成报道了Seo et al。(2007)在全球芝麻,尽管它已经显示在其他油料作物种子。是采用Rahimansab从印度和Shafeay et al。(2011)(2011)从埃及和表明,外源形成,高频率,是可能的。不同年龄的影响de-embryonated子叶(0、2、4和6天)在芝麻再生能力被Rahimansab报道(2011)和Lokesha et al .(2012),他们认为年龄de-embryonated子叶和再生能力呈负相关;0天的de-embryonated子叶最适合于2,4,6天子叶。在目前的调查,是尝试使用零天的子叶,作为被Rahimansab(2011),扩展到6个品种,是当地重要的和可以提高遗传改良过程和可能的开放的新途径在芝麻遗传改良作物(穷人的作物)在本地和全球。

材料和方法

植物材料:

6个基因型/芝麻品种(胡麻属indicuml .)这两个种族(TNL和KNL),三个品种被释放(DS-1选择从当地长白猪UAS Dharwad DSS-9 UAS Dharwad公布的变异品种,从古吉拉特邦和W II),一个是育种从拉贾斯坦邦(rt - 273)。基因型在这项研究中以不同的字符(表1)。

表面消毒:

健康和统一的种子在水和浸泡一夜之间被不断运行的自来水洗15分钟无菌蒸馏水紧随其后。种子为2分钟,然后用70%的酒精消毒surface-sterilized 0.1% (w / v)水溶液氯化汞的5分钟下层流气流内阁。种子随后被洗了四到五次,无菌双蒸馏水将氯化汞的痕迹。

外植体的制备:

双目立体显微镜的帮助下,胚胎从种子通过去除种皮切除其次是副翼层纵向附加给单独的两个完整的子叶削减胚轴(de-embryonated子叶)所建议的Seo et al。(2007)和适应Rahimansab (2011)。这些外植体接种培养基,对子叶和胚轴(再生图1)。

植物生长调节剂对再生的影响能力和多个射击感应:

De-embryonated子叶外植体接种于培养瓶包含三个组合即。½女士基底媒体补充20μM TDZ + 2.5μM IAA,有或没有25μM BAP和基底女士媒体25μM软面包卷。五个子叶接种在每个瓶子和复制每个浓度三次。所有的瓶子都在黑暗的孵化前24小时他们转移到光(1000勒克斯)和维护为拍摄再生六周。文化空间是维持在26日±2°C与温和相对湿度80 - 85% (Shashidhara 2005和Lokeshaet al .,2007)。

结果与讨论

拍摄再生(100%)与8.15和7.37拍摄数量每实现子叶rt - 273 (图2)随后DS-1与6.15和3.89芽(100%和95.55%)的组合(½女士20μM TDZ + 2.5μM IAA + 25μM BAP (表2)或没有软面包卷(表3)。KNL与7.55和7.22芽(88.88%和84.44%)和TNL记录与5.73和4.84芽(88.88%)较高的再生而DSS-9记录温和派再生(73.3%和71.11%和2.60意味着每子叶拍摄数字)。W-II记录至少再生(42.00%和37.77%,1.35和1.11的意思是每子叶拍摄数字)。全媒体女士25μM BAP未能产生任何跨品种芽然而,只有6.66%和2.22%再生一个射击只注意到在DSS-9和KNL分别。不可否认的是,½女士媒体20μM TDZ + 2.5μM IAA有或没有BAP几乎相同的意思是拍摄再生(~ 80%)具有类似的意思是拍摄数量或多或少相同的频谱的变化(图3;表2和3)(“t”测试是NS)。

De-embryonated子叶、单身或切片,在油料作物种子用于诱导芽(更准确地说花生)欠高再生能力对芝麻(搜索引擎优化et al .,2007;Lokeshaet al .,2012年,Shafeayet al .,2011)。大量的芽产生通过子叶的外植体;Rahimansab(2011)观察到的几乎每子叶8.50芽芝麻。事实上,在目前的调查,拍摄数量或多或少相同的Rahimansab (2011)。三个基因型(DS-1 rt - 273和WII)使用Rahimansab(2011)在目前的调查是很常见的。但W-II最高再生能力根据Rahimansab(2011),而它已经至少在目前的调查。这可能是因为W-II种子源的变化是多种多样,从古吉拉特邦市场包装形式。

基因型,生长调节剂和外植体类型已被证明是至关重要的因素对体细胞胚胎发生和器官发生在农作物(Venkatachalum开枪et al .,1999)。一些报道表明,外植体的时代是拍摄再生能力的一个重要因素。可以实现拍摄从0天(再生et al .,2006;搜索引擎优化et al .,2007年,Rahimansab,(2011), 2 - 4天et al .,2006年和Rahimansab, 2011), 6 - 10天(乔治et al .,1987;2011年和Lokesha Rahimansab,et al .,2012)和1 - 2周(Seoet al .,2007)旧的子叶。而从子叶再生从发芽种子获得大幅下降(et al .,2006;搜索引擎优化et al .,2007年和Rahimansab, 2011)和零天的子叶(从成熟的种子)发现最适合与2相比,4,6天老子叶芝麻(Rahimansab, 2011)。有趣的是,零天的子叶被使用在目前调查的经验考虑Rahimansab (2011)。基因型的变化拍摄再生反应早些时候报道了工人(Kariyallappa, 2003;Shashidhar, 2005;是et al .,2006;搜索引擎优化et al .,2007;Bangaramma, 2009;Rahimansab, 2011;Shashidharaet al .,2011年,Shafeayet al .,2011),可能与内源性归因于基因组成的植物生长激素和细胞分裂素水平关心的胚胎阶段发展(拉,2002)。

媒体组合是改编自et al。(2006);Rahimansab(2011)和Lokesha et al。(2012)添加25μM BAP½女士20μM TDZ + 2.5μM IAA结合并没有改变这一趋势在不同基因型的再生能力;它有积极改善KNL, DSS-9 W-II DS-1。虽然它有一个负面影响这些发现之前按照工人(井斜et al .,1994;Baskaran Jayabalan, 2005年和2006年;是et al .,2006)。软面包卷被认为是一个有效的细胞分裂素刺激感应拍摄结合在不同浓度植物生长激素。细胞分裂素(BAP和TDZ)当单独使用低劣,但表现出良好的反应再生结合时(Shashidhara开枪et al .,2011)。

没有再生(0%)在大多数品种尝试(rt - 273、TNL DS-1和W II)观察25μM BAP仅用于满员时基媒体女士。但两个基因型(DSS-9和KNL可以产生一个拍摄拍摄再生频率很低(分别为6.66%和2.22)。Shafeay et al。(2011)也观察到类似的结果,或者他们可以观察愈伤组织从de-embryonated射原始形成子叶女士媒体补充与不同级别的软面包卷(0.00、2.00和4.00 mg / l)。细胞分裂素单独引起外植体的褐变和随后的死亡et al .,2006),在目前的调查还发现当de-embryonated子叶接种女士满员媒体包含25μM BAP单独生长激素(图4)。使用TDZ的芝麻是非常稀疏的(组织文化et al .,2006;搜索引擎优化et al .,2007;Shashidharaet al .,2011 Rahimansab, 2011)尽管它被发现是一个更好的细胞分裂素。拍摄再生可能取决于内生增长的水平监管机构和TDZ调节内源生长素水平(没吃et al .,1995年,哈钦森和Saxena, 1996)。

BAP减少每个外植体的拍摄数量虽然TDZ确保健康的文化与软面包卷,经常引起褐变。TDZ和IAA优于软面包卷已观察到et al。(2006)。更换TDZ BAP显著降低再生频率。

胚轴的损失可能是致命的,而从种子浸泡后可除去子叶至关重要和娴熟的一步。然而保留胚轴显然没有看到或提到的早些时候工人(Seoet al .,2007;Shafeayet al .,2011年,Lokeshaet al .,2012)。在目前调查胚轴保留是强制性的。

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