分析唾液流率,缓冲能力和隔离龋齿的变形链球菌利用选择性MSKB媒体活跃和龋齿免费学校的孩子

文摘

背景:龋齿是一种多因素疾病,重要的病原学的因素包括变异链球菌和乳酸杆菌数量,唾液流率,缓冲能力和过去的龋齿的经验。也修改等因素类型的饮食、口腔卫生实践,使用的氟化物和其他预防措施。尽管巨大的研究已经完成所有变量影响龋齿,在龋齿的风险评估模型有更好的预测能力没有被验证在印度人口。因此,本研究的目的是评估是否唾液变异链球菌项结合唾液流量测量和缓冲效应可用于诊断和预测牙体的目的。材料与方法:研究在50学校9至12岁的儿童,被分为两组根据他们DMFT, def分数龋活跃和龋齿自由分别与25个学科。收集唾液样本处理来分析唾液流率,缓冲能力和唾液变异链球菌指望轻的可以卡那霉素杆菌肽(MSKB)选择性生长介质。观察结果:统计上的显著差异的定量和定性比较唾液流率,缓冲能力和日志的唾液变异链球菌CFU计数龋齿活跃和龋齿自由组p值为0.00001 (p < 0.05)。结论:选择性生长介质变形,MSKB是一个很好的诊断中变形链球菌的生长。唾液变量流率和缓冲能力可以作为一种有价值的诊断工具来评估龋齿经验和预测龋齿的风险。

关键字

龋齿、乳酸杆菌、唾液,唾液pH值,变形链球菌MSKB媒体

介绍

龋齿是一种不可逆转的微生物疾病的牙齿的钙化组织,特点是去矿化作用的无机部分和破坏牙齿的有机物质,这常常会导致空化。在口腔疾病龋齿是最常见的慢性疾病人类的。它影响人的两性在所有种族,所有社会经济阶层和年龄。当孩子到达上学年龄,他们有一个腐烂的病变的发病率增加由于饮食习惯的改变包括精制碳水化合物和甜味剂(1]。龋齿是一种多因素促发的疾病和重要的病原学的因素包括变形链球菌(变异链球菌)和乳酸杆菌数量,唾液流率,缓冲能力和过去的龋齿经验(2]。也修改等因素类型的饮食、口腔卫生行为,使用的氟化物和其他预防措施(3,4]。龋齿的相关因素发展极其相关疾病过程中。的微生物生龋齿的容量不确定龋齿的存在。有必要适当的基板和主机允许植入生理条件和生存的微生物为了方便龋齿的发展。

在印度,儿童占快速增长的人口的40%。龋齿的患病率从33.7% - 90%不等的孩子,以惊人的速度增加5),当中最常见的人类疾病。变异链球菌和乳酸杆菌都进行了广泛的研究和显示的病因学中扮演重要角色龋齿(6]。变异链球菌已与起始密切相关,而乳酸菌已经与龋的病变的进展(7]。引起酸化的和耐酸微生物的殖民化变异链球菌被认为是龋齿的主要原因(8]。变异链球菌水平唾液已被证明是一种预测龋活性,因此一些测试来估计基于变形链球菌水平开发龋齿的风险。常见的在所有这些测试是使用生长培养基补充与蔗糖和杆菌肽选择性的复苏变异链球菌从总唾液。唾液组成的新媒体MSKB琼脂基地、山梨糖醇、硫酸卡那霉素、杆菌肽开发更多的选择性生长介质,似乎更适合用于龋齿诊断检测比传统的MSB媒介。变形的新MSKB媒介更有选择性,因为它消除了假阳性结果目视判读非变形引起的变形链球菌(9]。

唾液流量的变量,缓冲能力抗菌活性被认为是有能力减少的发生率牙科龋齿。尽管巨大的研究已经完成所有变量影响龋齿,在龋齿的风险评估模型有更好的预测能力没有被验证在印度人口(10]。因此,需要结合的诊断测试目标风险高龋组。因此,本研究的目的是评估是否唾项变异链球菌结合唾液流量测量和缓冲效应可用于诊断和预测牙体的目的。

目的和目标

评估和比较唾液的关系变异链球菌统计,唾液流率和缓冲能力龋齿活跃和龋齿免费学校9 - 12岁的儿童并确定的疗效MSKB作为孤立的选择性培养基变异链球菌。

材料和方法

机构伦理委员会批准了之前展开研究。这项研究是在进行50学校9至12岁的儿童。9 - 12年的年龄段是选择研究,原因如下:

9 - 12年的指数作为世界卫生组织推荐的年龄组。

是全球监测时代的国际比较和监测疾病的趋势。

这是一个非常年龄或年龄对龋齿的风险评估是风险筛查在学校(11]。

唾液的比较研究,这是一个变量的龋齿经验比较研究对象(龋齿活跃和龋齿免费),龋齿体验组是由含有同等数量的科目在每组(n = 25)。每个孩子的龋齿状况被使用DMFT得分,def指数和分为两组根据DMFT, def成绩例如DMFT, def > 0龋活跃和DMFT def = 0龋齿免费。然后安排在两组病例;组1:龋齿活跃(n = 25)和组2:龋齿免费(n = 25)。通知书面同意之前记录从所有受试者唾液样本的集合。孩子们严重生病,有困难的嘴,抗生素在过去一个月,那些戴着矫正装置被排除在研究之外。这项研究进行了使用特定的预先测试过的形式发票两部分组成。

第一部分由学生信息关于年龄、性别和临床口腔检查,第二部分由DMFT def指数和唾液分析。

唾液样本收集10点-11点之间控制昼夜变化。参与孩子被指示不要吃或喝任何东西至少两小时前唾液样本的收集。孩子被要求用水彻底冲洗嘴前10分钟的唾液,以避免污染的食物碎片。孩子们明确燕子的唾液以任何残余联合国——刺激唾液的嘴。托收的刺激唾液,孩子们被要求咀嚼片无菌咀嚼石蜡颗粒(0.5 x0.5厘米)和指示让唾液收集口没有吞下它的地板上至少1分钟。唾液被撤回的帮助下无菌注射器。这个过程持续了5分钟,刺激唾液收集。所有的孩子的唾液样本是由一个编码标识数量样本期间收集和处理。测量刺激唾液的流速后,样品是由聚苯乙烯管包含thioglycolate肉汤传输媒体(嗨媒体)缓冲能力和实验室进行进一步分析变异链球菌计数。

刺激唾液的流速是由以下公式(12]:

表达的唾液流率毫升/分钟,得分如下:

得分0:> 0.7毫升/分钟;分数1:0.3 - 0.7毫升/分钟,得分2:< 0.3毫升/分钟。

缓冲能力的评估是根据描述的方法进行爱立信(12,13)修改小卷。0.5毫升唾液被添加到1.5毫升的5摩尔/ 1盐酸。混合物是大力动摇然后离心机一分钟允许站10分钟,最后的上层清液的pH值是衡量使用嗨pH值指标文件;它有一个主要的pH值范围3.5 - 6.0和6.5 - 9.0,相应的分类。评分标准对唾液pH值如下:

得分0:pH > 6.0,得分1:pH值4.5 - 5.5,得分2:pH值< 4.0

微生物分析,唾液样本均质手动使用搅拌器搅拌。几百μl唾液与1毫升无菌蛋白胨水稀释获得1:10稀释的唾液。100μl稀释唾液进一步加入1毫升无菌蛋白胨水来获得一个稀释1:10 0。这个过程再次重复获得1:1000的稀释。这种稀释的唾液是用于微生物分析。的变异链球菌培养在缓和的人士中卡那霉素杆菌肽(MSKB)琼脂这个有机体的选择性培养基。

每公升MSKB准备根据制造商的指示先高压灭菌法分别90年通用女士基础在800毫升的去离子水和200年通用在200毫升山梨糖醇糖去离子水。结合后,冷却到500 C, 1毫升1%亚碲酸钾2.5毫升40 U /毫升的杆菌肽和2毫升500μg /毫升卡那霉素硫酸盐被添加到产生0.1 U /毫升杆菌肽和1μg /毫升硫酸卡那霉素。准备媒体涌入无菌一次性文化板块和冷藏直到接种(9]。用接种环(2毫米内径)5微升1:1000稀释样品都是在严格的无菌条件下MSKB琼脂。MSKB琼脂板是孵化72小时在370°C,厌氧使用蜡烛罐。72小时的潜伏期后,殖民地的变异链球菌出现在文化盘子小,粗糙,提高和附着。殖民地所以确定计算使用放大镜和计数的变异链球菌被表示为集落形成单位/毫升唾液的数量。5μl唾液样本被培养,菌落的数量从这种文化获得乘以1/5 x 103和纠正稀释系数计算菌落的数量为1毫升唾液[14]。

集落形成单位的数量计算放大透镜的帮助下,取得了如下(15得分0:可以忽略不计,得分1:< 104,得分2:104 - 105,得分3:> 105。

革兰氏染色进行形态学鉴定的革兰氏阳性Streptocoocci。的识别变异链球菌证实了使用嗨喉炎的症状识别生化测试套件(Himedia REF KB005A)。是标准化的,比色识别系统利用十二常规生化检查。测试是基于原则的pH值变化和底物的利用率。孤立的链球菌变形链球菌殖民地是无菌接种环和接种5毫升脑心浸液肉汤和孵化370°C 4小时直到培养液浊度达到0.1 OD在620海里。校准使用注射器把肉汤和接种HiStrep识别地带。孵化,生物体发生代谢变化表示颜色变化的媒体,可见自发或之后添加试剂。

验证我们的结果,我们采购的标准菌株变形链球菌MTCC MTCC 890(参考号码43392,昌迪加尔)。殖民地被无菌接种环和接种5毫升脑心浸液肉汤和孵化370 C为4小时。校准使用注射器把肉汤和接种HiStrep识别地带(Himedia KB005A)。

统计分析:收集到的数据是评估使用学生t '和卡方检验。P值< 0.05被认为是具有统计学意义(P < 0.05)。

结果

有7例(28%)男孩和18(72%)的女孩在龋活跃;14(56%)和11(44%)男孩女孩在龋齿自由组分别。学生的学习任务价值DMFT和def分别为9.23和7.69。数据的学习小组是统计学意义,p值为0.00001 (p < 0.05)(表1)。

表1。性别明智的分布和龋齿DMFT和def分数的比较活跃和龋齿自由组织。

定量分析唾液流率和缓冲能力和日志变形链球菌CFU计数:

统计上的显著差异观察唾液流率比较,缓冲能力和日志变形链球菌CFU计数在唾液龋齿活跃和龋齿自由组p值为0.00001 (p < 0.05)(表2)。

表2。定量分析唾液流率、缓冲能力和日志变形链球菌CFU计数在龋齿活跃和龋齿自由组织。

* p < 0.05

定性分析唾液流率和缓冲能力

受试者没有龋齿显示相当高的流量相比,龋齿活动主题(p < 0.05)。的唾液流率> 0.7毫升/分钟被发现在19例(76%)受试者的龋齿活跃和25例(100%)受试者的龋齿自由组分别。的唾液流率0.3 - 0.7毫升/分钟被发现在6例(24%)受试者的龋齿活性基团但没有发现龋齿自由主题。两组的受试者在低唾液流率< 0.3毫升/分钟。两组的数据统计学意义,p值为0.00903 (p < 0.05)。在龋齿活跃和龋齿自由集团pH > 6.0的缓冲能力被发现在4(16%)和24例(96%)受试者分别。pH值4.5 - 5.5的缓冲能力被发现在11(44%)和1(4%)分别在龋齿活跃和龋齿自由组织。pH值< 4.0的缓冲能力被发现在10例(40%)受试者龋活跃的群体。所有受试者pH值4.0在龋齿自由组的缓冲能力。两组的数据统计上显著的p值为0.00001 (p < 0.05)(表3)。

表3。定性分析唾液流率、缓冲能力和日志变形链球菌CFU计数在龋齿活跃和龋齿自由组织

微生物分析

受试者在龋活跃群显示相当高变形链球菌数量相比,受试者在龋齿自由组。龋齿活跃群体,所有的受试者得分0,而在龋齿自由组有2例(8%)受试者没有得分。龋齿活跃和自由组,得分1被发现3例(11%)受试者分别和12例(48%)受试者。分数2 10例(40%)受试者中发现龋齿活跃和9例(30%)受试者分别在龋齿自由组。龋齿活跃和龋齿自由组,得分3被发现在12(48%)和2(8%)分别科目。两组的数据是统计上显著的p值为0.0022 (p < 0.05)(表3)变形链球菌是革兰氏阳性球菌深蓝色和紫色出现在革兰氏染色。个人球菌是球形或椭圆形,直径0.5 - 1.0μm,排列成链。(图1)的增长变异链球菌MSKB文化媒体被看作是蓝色,小,粗糙,提高和附着殖民地(图2和图3)。

生物化学分析

即HiStrep TM识别地带(Himedia KB005A)——用于生化分析显示以下结果

二世。Voges Proskauer测试:阳性反应(粉红色红色)

三世。七叶灵水解测试:阳性反应(黑)

四、PYR:积极反应(樱桃红)

诉ONPG:负面反应(无色)

VI。精氨酸利用率:阳性反应(紫/深紫色)

七世。葡萄糖:负面反应(粉红色红/红)

八世。乳糖:负面反应(红/粉红色)

第九。阿拉伯糖:阳性反应(黄色)

x蔗糖:阳性反应(黄色)

习山梨糖醇:阳性反应(黄色)

十二。甘露醇:阳性反应(黄色)

十三。棉子糖阳性反应(黄色)

验证

标准菌株的生化检测结果变形链球菌MTCC MTCC 890(参考号码43392,昌迪加尔)是类似于我们的研究样本的结果。

讨论

众所周知,良好的口腔卫生是良好的一般健康不可或缺的组成部分。虽然享受良好的口腔卫生包括的不仅仅是健康的牙齿,很多孩子没有足够的口语和一般健康的活跃和不受控制的龋齿。龋齿是一种疾病过程折磨世界人口的一大部分。龋齿的病因学和发病机理是多!许多主机、代理和发展的环境因素发挥作用龋齿(15,16]。龋齿是一个重大的公共卫生问题,由于高患病率在世界所有地区。龋齿的风险的评估是很重要的,因为它提供了一个机会来实现预防措施在人口暴露17]。人类龋齿的预测风险的概念已经存在了许多年。龋齿等可能涉及风险预测评估的具体因果相关风险因素,还可能涉及到预测与龋齿,但不是有因果联系相关危险因素。龋齿危险因素可能会发现在微生物群(牙菌斑),饮食(碳水化合物)和主机(牙齿)。所有三个龋齿发展是不可或缺的。唾液中可能添加的潜在的强大影响龋齿过程(18]。在所有的因素中,唾液是重要的因素,影响牙齿龋齿的发展是在不断的接触和沐浴的唾液雷竞技网页版16]。唾液也因此成为一个重要的研究领域在牙科和口腔生物学。

本研究试图评估和比较唾液流率之间的关系,和缓冲能力隔离的变形链球菌使用缓和的人士中卡那霉素杆菌肽(MSKB)介质从龋活跃和9 - 12岁儿童龋齿免费学校确定的疗效MSKB作为孤立的选择性培养基变形链球菌。

在静止条件下没有外源性刺激,有缓慢的唾液流保持口腔湿润和润滑粘膜。如果流时,腮腺,颌下,舌下和次要的粘液腺(mmg)贡献了约25%,60%,7到8%,分别为7 - 8%全唾液但当流刺激,腮腺贡献至少增加10% (19]。保护特性刺激包括唾液间隙,增加唾液的缓冲力和饱和度对牙齿的矿物质。这些好处最大化当唾液刺激后可发酵碳水化合物的消耗,减少斑块pH值的下降导致去矿化作用和通过增加补充矿质的潜力(20.]。因此如果唾液是有用的分析唾液腺地位而刺激唾液是有用的功能储备研究[21]。所以在我们的研究中,石蜡刺激唾液作为样本。

有几种方法收集唾液等排水方法,吐痰方法,抽吸法和拭子法。根据道斯(19),抽吸法是最可再生的;因此这种唾液收集的方法是使用在我们的研究中。唾液流量测量作为筛选方法在识别人口较低的唾液流相关通常但不总是龋齿磁化率和活动(22]。一般流量越高,更高的缓冲能力,更快的清除和较小的是微生物攻击(23]。

Tenovuo [22)报道,唾液流率是最重要的一个参数,同时考虑可能与龋齿活动和协会是一个非常重要的阈值限制的个人。唾液流率低和龋齿患病率支持唾液流率之间的关系和龋齿24]。在我们的研究中,统计上的显著差异在石蜡刺激唾液流量观察龋齿活跃和龋齿之间自由组。龋齿自由组明显高于刺激唾液流率与龋活性基团。我们的研究结果与所做的研究结果相似,质量等。25),代理等。26),Gopinath et al。27),Al-Zahawi et al。28),Aminabadi et al。29日),Fiyaz et al。30.)和Srinivasulu et al。31日]。相比无显著差异在唾液流率之间的联系和龋齿的经验是报道Preethi et al。13),Parvinem et al。32和亲眼见识等。33]。

口腔是经常接触组件的酸度不同于正常(6.5 - -7.5)的唾液,这些组件可能也会对牙齿造成伤害或粘膜表面。在唾液缓冲代理,但是试图把pH值回到正常范围内尽可能快。在休息时唾液主要缓冲剂是无机磷酸盐和刺激唾液碳酸/碳酸氢系统。以非常低的pH值(4 - 4.5)唾液蛋白也显示一些缓冲行动22]。

四种最常见的方法用于估计唾液的缓冲能力存在像爱立信的方法修改小卷,Bratthall和海格的方法,Dentobuff方法提出的1989年爱立信和Bratthall和电测量的方法22]。Ericson和Bratthall进行的一项研究显示,所有的四个方法相关。简单和更少的技术敏感,爱立信的方法修改小卷是用于我们的研究估计唾液缓冲能力。

在人口水平唾液流率和缓冲能力正相关但个体很多例外存在。低流量结合低或中度缓冲容量明显表明贫穷唾抵抗微生物的攻击。这些患者中微生物的间隙是缓慢而残留在口腔唾液传播作为薄膜表面,从0.5 - -1.0毫升。可发酵碳水化合物溶解在这种小体积的唾液不会迅速中和由于低缓冲容量但糖的味道经常一起选的调味剂,刺激唾液腺反应在几秒内增加唾液流量。唾液的体积会增加,直到一只燕子发起和吞咽从口腔清理一些糖。之间有显著的正相关关系龋齿患病率和剩余吞咽唾液流后已经报道,如果缓冲能力差那么酸性攻击将会延长。口腔经常暴露于组件的唾液pH值不同于正常的pH值(6.5 - -7.5)。这些组件可能也会对牙齿造成伤害(侵蚀)或粘膜表面。然而,在唾液缓冲代理试图把pH值尽可能快地回到正常范围(22]。

在我们的研究中我们观察到的一个统计上的显著差异,石蜡刺激唾液的缓冲能力在龋活跃和龋齿自由组织。受试者没有龋齿显示显著高缓冲能力相比高龋齿的活动。我们研究的结果符合研究由波斯语et al。17),Malekipour et al。34),Gudkina et al。35),Sharma et al。36),Motamayel FA et al。37),Kuriakose年代et al。38),Shetty et al。39)和Bhayat et al。40]。在所有这些研究中,在龋齿自由龋齿患病率明显高于龋活跃群体。然而我们的结果与研究结果由Preethi BP et al。13]。这样做的原因可能是微生物区系等其他相关因素,饮食和保留的食物可能会主导的缓冲能力启动龋齿是一种已知的多因子疾病。

变形链球菌展览的生龋齿的特征如高潜在acidogenesis和酸宽容。主要的兴趣变形链球菌龋齿预测源于这样一个事实,龋齿在日冕以及根表面导电条件在人类与高浓度的这种生物在唾液和/或斑块(41]。由于积极的数值项协会变形链球菌与龋齿及其联系与碳水化合物的消耗,最近主要的焦点已经转移到变形链球菌在唾液样本计数。因此,变形链球菌计数可能不仅是龋齿预测也作为碳水化合物的消耗,是另一个指标龋齿危险因素。

在我们的研究中,变形链球菌培养在唾液样本使用缓和的人士中卡那霉素杆菌肽琼脂,即选择性培养基的增长变异链球菌。

我们观察到的一个统计上的显著差异变形链球菌受试者的龋齿活跃和龋齿自由组织。受试者在龋活跃群显示相当高变形链球菌数量相比,受试者在龋齿自由组。龋齿的活性基团,这些受试者唾液可以忽略不计变异链球菌数在龋齿自由组织,有2例(8%)受试者已经零唾变异链球菌计数。我们按照对冲基金所做的研究结果页等。5),Hebbal M et al。6Gamboa F et al。(8),冈田克也et al。42),对冲基金等。43),西蒙et al。44),Miravet et al。45),通用电气等。46),Thaweboon et al。47),Leal et al。48)和Pannu et al。49]。但是波斯语等所做的研究。17)和Granath et al。41]显示龋齿经验和无显著关系变异链球菌。在这项研究中由Granath et al。41],作者属性结果的原因可能偏态分布对象DMFT / def类细菌类低于高等细菌类。

组成的一个新的媒介,MSKB唾液可锻铁琼脂基地,硫酸卡那霉素、杆菌肽开发的复苏更有选择性变形链球菌。初步研究表明,传统媒体例如MSB TSY20B和GSTB不够选择性,使计算的变形不借助显微镜地貌成因的分化。新的选择性培养基,MSKB已经优化减少non-mutans的增长,从而减少假阳性结果时用于龋齿诊断测试(9,15]。矛盾的结果指出了日圆et al。50)观察到的选择性MSKB和MSB是最好的比GSTB TSY20B但MSB的回收率是更好的MSKB紧随其后,GSTB和TSY20B说MSB是最合适的中等生龋齿的检测变形链球菌根据其特点在分化,可靠性和回收率。进一步的大样本容量比较研究与其他变量如饮食、类型的唾液、口腔卫生习惯通过使用不同的选择媒体的增长变形链球菌从唾液样本在龋活跃组织提倡我们的研究。

结论

变形链球菌选择性生长介质,MSKB诊断中是一个很好的增长变形链球菌。唾液变量流率和缓冲能力是一种有价值的诊断工具来评估龋齿经验和预测龋齿的风险。

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