研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
菜单e-ISSN: 2320 - 0812
e-ISSN: 2320 - 0812
1制药分析化学部门、学院制药、埃及的英国大学(输送量大),埃及开罗
2制药和药物化学部门、制药和药物产业研究部门,国家研究中心(NRC), Dokki, 12622年,埃及吉萨
收到日期:26/10/2016;接受日期:27/10/2016;发表日期:12/11/2016
访问更多的相关文章研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
这次调查描述了液相色谱保留行为分离的阶段模式sitagliptin使用两个卤代静止阶段即pentabromobenzyl (PBr)和pentafluorophenyl (PFP)列以及相关的分离机制。
优化的分离是通过使用一个组成的流动相乙腈:水:三乙胺:醋酸(80:20:0.2:0.1;v / v),在流量1.0毫升/分钟,温度25°C。检测波长为268 nm。散装sitagliptin和定量分析制药平板电脑配方是本专栏以来PBr列上执行和验证筛选了分析物在研究比PFP列保留时间短。
此外,本研究导致更好的理解这些新开发的作用机制参与卤代静止阶段有关研究分析物和流动相/列参数。发现这两列显示π芳香-π芳香,π芳香-π脂肪族,π芳香-π阳离子相互作用,除了氢键的亲民党的列。
卤代静止阶段,Pentabromobenzyl相列,列Perfluorophenyl阶段,Sitagliptin,保留机制,药物分析。
在液体色谱法(LC),许多因素影响分离和选择性。在这些因素中,它可以提到以下几点:固定相,流动相,分析物的性质和实验变量如pH值、流速和温度(1]。值得一提的是,固定代表最重要的一个影响信用证的分离。
这可能的原因众多数量的列商用市场。尽管如此,仍有改进连续平稳发展阶段分离(2,3]。新开发的静止阶段之一是卤代静止阶段。本文两个卤代静止阶段研究即pentafluorophenyl列“Fluophase PFP”名义销售和pentabromobenzyl列“Cosmosil PBr”名义销售(图1)。
图1:结构的两个固定阶段接受调查研究命名:Fluophase PFP (A)和Cosmosil PBr (B)。
第一项研究在文学来描述flurorinated固定相的色谱特征是在1981年报道的(4,5]。最近,这个氟化列成为广泛使用的替代选择传统的C18反相LC。这是由于高选择性,尤其是对卤代和非卤代化合物6]。氟化阶段的特征是它的疏水性和有极性(7]。它的保留机制包括许多互动的力量如偶极-偶极子,π-π交互,H-bonding和离子交换4]。一些报告比较了不同氟化固定相的分离行为(s)常规使用C18和其他苯列(8- - - - - -16]或比较不同氟化静止阶段(6,17]。此外,其他调查试图解释perfluorophenyl固定相的保留机理,通过分析不同化合物(18,19]。
Pentabromobenzyl-bonded硅称为Cosmosil PBr只有最近推出了市场。这是研究感兴趣的色谱分离的sitagliptin这两种卤代平稳阶段。我们所知,这是第一个发表在文学处理这个话题。
Sitagliptin [(2 r) 1 - (2, 4, 5-trifluorophenyl) 4-oxo-4 - [3 - (trifluoromethyl) 5、6-dihydro - (1、2、4) -triazolo [4, 3] pyrazin-7 yl(8小时)]- butan-2-amine]是一种抗糖尿病药。改善血糖控制糖尿病2型糖尿病患者通过增加α和β细胞对葡萄糖的敏感性。Sitagliptin是dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4)抑制剂,导致预防肠促胰岛素glucagon-like肽和肠抑胃肽。因此,它导致改善血糖控制(20.- - - - - -22]。很少有报纸报道的分析使用不同的技术,如LC-UV sitagliptin [23),但是24),核磁共振(25),光谱光度测量的(26]。值得一提的是,这些方法已被用于分析sitagliptin的卤代静止阶段在学习在这个工作(图2)。
图2:Sitagliptin结构(A)和(B)研究条件下的电离形式(ACD /实验室®)。
这项工作的目的是分析sitagliptin PBr和亲民列。随后,说明比较的机制参与的分离sitagliptin两列。这种比较的基础上,将建立一个分析方法验证的药物正在研究使用列提供了最好的结果。
设备
高效液相色谱系统是利用热费希尔UHPLC Dionex终极3000(德国germer完成)。它由泵(ISO - 3100 SD), autosampler (WPS 3000 SL),列恒温器(苑- 3000 SD)和二极管阵列检测器(爸爸- 3000 RS)(德国germer完成)。该软件用于数据采集Chromeleon 6.8 (germer完成,德国)。
在这项研究中使用的列是Cosmosil PBr(250毫米×4.6毫米,5μm粒度),购自Nacalai Tesque,(日本京都)和Fluophase PFP(250毫米×4.6毫米,5μm粒度),购自热科学、德国。
材料和试剂
甲醇(甲醇)(高效液相色谱级),乙腈(ACN)(高效液相色谱级),三乙胺(茶)和冰醋酸(AC)从Sigma-Aldrich购买,德国。
Sitagliptin由默克公司提供夏普和Dohme有限公司(埃及开罗)。Januvia 100毫克(默克公司大幅& Dohme Ltd .) Cramlington,英国)从当地市场购买。
方法
标准储备溶液(1毫克/毫升)是由溶解在100毫升甲醇100毫克。试验药品的平板电脑(Januvia),十片称重和磨细粉。相当于50毫克;从磨粉;准确称重和溶解到50毫升甲醇。其次是声波降解法容量瓶的30分钟,以确保完整的解散。然后解决方案是使用0.2μm注射器过滤器过滤。所有的解决方案都让光通过覆盖铝箔纸和储存在冰箱里。
所有的实验;两列;进行了使用权力平等主义的洗脱。最优条件是通过使用组成的流动相乙腈:水:三乙胺(茶):醋酸(AC) (80:20:0.2:0.1;v / v),在流量1.0毫升/分钟,温度25°C。紫外检测器调整在波长268纳米。流动相是使用0.45μm膜过滤器过滤,然后允许留在超声波浴30分钟脱气。注射量在所有运行;两列;是5μL。
验证方法的执行根据我的指导方针(27]。参数在调查中包括线性、检测极限(LOD),量化的限制(定量限),精密(国米和当天),准确性和鲁棒性。
对线性,校准曲线是由策划相对应的峰面积与浓度(毫克/毫升)。九个校准标准由系列稀释sitagliptin覆盖范围为0.4毫克/毫升1.2毫克/毫升。每个浓度注射3次。这个范围涵盖目标浓度的40%到120%,1.0毫克/毫升。结果评估通过计算回归系数(r的平方2)。
LOD从校准曲线计算使用以下方程:
LOD = 3.3(σ/ S)
校准曲线的定量限计算使用以下方程:
定量限= 10(σ/ S)
“σ”是响应的标准偏差和S校准曲线的斜率(27]。
精确描述的程度分析方法的可重复性。在这部作品中,精确的方法被评估的国际米兰,盘中精度。两人都表示通过计算%相对标准偏差(%相对标准偏差)[28]。盘中的精度是由分析显示3不同浓度(0.8毫克/毫升,1.0毫克/毫升,1.2毫克/毫升)三次在同一天(n = 9)而inter-day精度进行三种不同天。
精度是由飙升sitagliptin制药平板配方(声称含有0.479毫克/毫升活性成分)与已知标准0.30毫克/毫升,0.50毫克/毫升和0.70毫克/毫升,所以最终浓度为0.779毫克/毫升,0.979毫克/毫升和1.179毫克/毫升,分别。每个样本注入三次。结果表示为百分数回收率(%恢复)和% RSD = (29日]。
鲁棒性是评价方法的能力仍未受影响的由小型实验参数的变化(27]。
优化的色谱条件
Pentabromobenzyl (PBr)列
起初,条件调查甲醇:水:茶:AC (60:40:0.1:0.1;v / v)流量0.5 mL / min和温度20°C, sitagliptin筛选了峰值的17.607分钟(30.]。然而,峰值相对广泛。其次是增加流量为1毫升/分钟,导致减少在保留时间(tR是8.747分钟)和峰值的缩小。
当的百分比有机阶段提高到80%,PBr列显示一个典型的反相行为和tR下降6.077分钟。当温度增加到25°C引起的轻微下降,tR和增强峰的形状,tR所示为6.007分钟(图3)[31日]。
图3:色谱的sitagliptin PBr列条件下:流动相甲醇:水:茶:AC (80:40:0.1:0.1;v / v);流量1.0 mL / min, T = 25°C和UV 268海里。
研究三元的洗脱液的影响分析使用PBr列、三种不同成分的有机相进行了测试使用两种不同的有机溶剂即甲醇和乙腈。
不同%的有机相进行调查:1)100%的甲醇,b)甲醇:ACN (1:1 v / v)和ACN c) 100%, tR是6.007分钟,分别为5.253分和4.670分钟。图4显示,100% ACN条件。观察,增加ACN的%了tR下降,这是由于较强的洗脱液ACN强度相对于甲醇。
图4:色谱的sitagliptin PBr列上使用100% ACN作为有机溶剂。
此外,茶百分比和AC百分比对分离的影响也进行了研究。%的交流时增加了0.2%,这导致tR稍稍增加4.793分钟。而增加茶百分比为0.2%,导致了tR下降3.737分钟(图5一个)。
因此,最优条件分析,sitagliptin PBr列上有:流动相组成的乙腈:水:茶:AC (80:20:0.2:0.1;v / v),在流量1.0毫升/分钟,温度25°C。建议交互参与sitagliptin分析,对PBr列,π芳香-π芳香和π芳香-π脂肪族(9)和分散力(瞬时dipole-induced偶极子的力量),也被称为伦敦色散力。这是一个弱的分子间作用力,结果偶极子暂时从随机的不对称诱导电子在两个相邻的原子。
的pKa sitagliptin测量使用ACD /实验室®和分别为7.20±0.1,8.60±0.4。工作的色谱条件下,氨基sitagliptin将电离,在图2 b这将导致theπ芳香-π阳离子的相互作用。
Pentafluorophenyl (PFP)列
最优条件PBr列被转移到亲两列。流动相组成ACN:水:茶:AC (80:20:0.2:0.1;v / v),在流量1.0 mL / min和温度25°C。
不同的茶和交流了%。tR sitagliptin 11.363分钟时0.1%的茶:0.1% AC被添加到移动阶段。当AC交流提高的百分比(0.2%),保留时间tR略增加11.740分钟。而,加倍茶的%(0.2%),导致在tR显著下降5.347分钟(图5 b)。
图5:色谱最佳条件下的sitagliptin命名:乙腈:水:茶:AC (80:20:0.2:0.1;v / v),流量1.0 mL / min和T 25°C,对PBr列(a)和亲民列(B)。
增加茶或AC的百分比的影响几乎相似,两列。%交流的增加导致轻微增加tR和增加%茶了,相对,大大降低tR。感兴趣的提到的影响增加%茶在减少tR亲民党的列上高于PBr列上。值得一提的是,茶的尾矿影响峰值下降。
在相同的色谱条件下;sitagliptin筛选了tR PBr列上不如亲两列。这可能是导致两方面的影响。
1。强烈的氢键的存在的PFP sitagliptin之间提供更多的互动和pentafluorophenyl列导致保留时间的增加,而这种类型的相互作用很弱甚至不存在的情况下的pentabromobenzyl列。
2。PFPπ-π氟原子之间的相互作用,在sitagliptin比π-πPBr溴原子之间的相互作用和氟原子sitagliptin由于氟原子的电负性比溴。
tR以来sitagliptin PBr列上不到亲两列上,在研究条件下,验证分析方法是分析开发利用PBr sitagliptin列。
方法验证
sitagliptin的校准曲线线性浓度范围的0.4毫克/毫升1.2毫克/毫升。校准曲线的回归方程是y = x - 61.799 16987。回归系数(r2)是0.9991指示好方法的线性范围。值得一提,斜率的标准差是2.05和截距为2.12。
定量限和LOD分别0.082毫克/毫升和0.027毫克/毫升标准药物解决方案。inter-day精度、调查准备三个浓度:0.8毫克/毫升,1.0毫克/毫升和1.2毫克/毫升;那么每个注射三次,%相对标准偏差为0.589,1.069和0.263,分别。前面提到的三个浓度连续注入/ 3天盘中精度进行评估。%相对标准偏差分别为0.635、1.053和0.710,分别为(表1)。
| 浓度(毫克/毫升) | Inter-Day精度 | 盘中精度 | ||
|---|---|---|---|---|
| 峰面积* | %相对标准偏差 | 峰面积* | %相对标准偏差 | |
| 0.8 | 12593.64 | 0.589 | 12414.13 | 0.635 |
| 1 | 15592.16 | 1.069 | 15644.57 | 1.053 |
| 1。2 | 19458.57 | 0.263 | 19128.2 | 0.71 |
表1:Inter-day和PF列上盘中sitagliptin精度。
准确性,%复苏,范围从98.33%到98.76%,%相对标准偏差范围在0.219至0.580之间。方法的鲁棒性评估的相对标准偏差值,通过故意引入小变化以下参数:温度、波长,% ACN, %茶和% AC和结果:
•温度25°C % RSD为1.96%±3°C。
•波长268 nm±3 nm % RSD为2.57%。
•%和% RSD为3.35%乙腈80%±1%。
•%茶2%±0.01% % RSD为0.58%。
•% AC1%±0.01% % RSD为0.87%。
上述结果显示该方法开发的分析sitagliptin PBr列高度健壮(表2)。
| 理论浓度(毫克/毫升) | *实际浓度(毫克/毫升) | %相对标准偏差 | %复苏* | %相对标准偏差 |
|---|---|---|---|---|
| 0.779 | 0.771 | 0.368 | 98.33 | 0.385 |
| 0.979 | 0.972 | 0.335 | 98.68 | 0.219 |
| 1.179 | 1.17 | 0.476 | 98.76 | 0.58 |
应用药物制剂
十Januvia®平板电脑在每片含有100毫克sitagliptin加权和细粉。相当于50毫克的磨粉准确称重和溶解到50毫升甲醇然后用30分钟紧随其后使用0.2μm注射器过滤器过滤。滤液(5μL)注射在上述PBr列上最佳色谱条件。平板电脑的辅料不干扰分析(图6)。
图6:色谱的Januvia®PBr列上1毫克/毫升,在最优条件下:流动相ACN:水:茶:AC (80:20:0.2:0.1;v / v);流量1.0 mL / min, T = 25°C和紫外线= 268海里。
之间的比较研究两个卤代列即PFP PBr调查。贡献的交互分析芳香-ππ芳香,π芳香-π脂肪族,π芳香-π阳离子两列以及伦敦色散力(瞬时dipole-induced偶极子的力量)。
结果显示,在研究条件下,sitagliptin保留亲民党的列上。这是归因于两个效果:1)之间存在很强的氢键的氟亲民党的固定相,sitagliptin和2)这一事实比溴氟原子的电负性更强,因此,项目之间的π-π相互作用和sitagliptin将强于PBr和sitagliptin之间。
验证方法的分析sitagliptin散装和制药平板制定PBr列上成立。最优条件是流动相由乙腈:水:茶:AC (80:20:0.2:0.1;v / v),在流量1.0毫升/分钟,温度25°C和波长调整在268海里。分析了在不到6分钟。
