研究与评论:制药学与纳雷竞技苹果下载米技术杂志
菜单e-ISSN: 2347-7857 p-ISSN: 2347-7849
e-ISSN: 2347-7857 p-ISSN: 2347-7849
Vangallu Spandana*, Siddartha
药物分析系，马拉雷迪药学院，Maisammaguda, Dhulapally，海德拉巴，泰伦加纳邦，印度
收到:2021年11月19日，稿件编号:日本- 21 - 47898;编辑分配:2021年11月22日，预QC号日本- 21 - 47898 (PQ);综述:06-Dec-2021, QC号日本- 21 - 47898;修改后:2022年3月09日稿件编号:日本- 21 - 47898 (R);发表:2022年3月16日，DOI: 10.4172/2347-7857.10.2.001。
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建立了一种简便、准确、精密度高的同时测定阿泽尼匹定和替米沙坦片剂含量的方法。色谱图通过标准对称C18 (4.6 x 150 mm, 5 mm)运行。含缓冲液0.01 N KH的流动相2PO:以45:55% v/v的比例抽取乙腈，以1ml /min的流速泵入柱中。优化波长为290 nm。阿泽尼匹定和替米沙坦的滞留时间分别为2.131 min和2.593 min。阿泽尼匹定和替米沙坦的RSD分别为0.8和0.6。阿泽尼匹定和替米沙坦的回收率分别为99.59%和99.94%。阿泽尼匹定与替米沙坦的回归方程得到的LOD、LOQ值分别为0.86、2.60和0.09、0.29。阿齐尼地平的回归方程为y=12533 x +10387，替米沙坦的回归方程为y=9061 x +183.8。该方法简便、经济，可用于工业中定期的质量控制试验。
Azelnidipine;替米沙坦;rp -
阿氮地平是一种与氨基苯磺酰胺类天然混合物有一席之地的化合物。这些是含有苯磺酰胺部分的天然混合物，与苯环相连的胺集合(图1替米沙坦以Norvir的名义出售，是一种抗逆转录病毒处方药，与其他药物一起用于治疗艾滋病毒/艾滋病。这种混合疗法被称为动态抗逆转录病毒疗法。通常低部分与其他蛋白酶抑制剂一起使用(图2)．
图1:阿氮地平的化学结构。
图2:替米沙坦的化学结构。
本研究旨在建立一种简单、准确、快速的反相高效液相色谱分析方法，该方法可用于同时测定阿齐尼地平和替米沙坦的含量，因为这两种药物都只有单独的方法报道。这两种药物的合用在任何药典中都不是官方的，因此没有官方的方法可以同时估计这两种药物的合用剂型。对阿齐尼地平和替米沙坦的文献调查显示，有几种方法可以单独检测这些药物，但只有一种方法可以同时使用RP-HPLC进行估计[1］．
客观的
以下是本工作的目标。建立一种同时测定阿齐尼地平和替米沙坦的稳定性指示高效液相色谱方法，并根据ICH指南建立验证方法。应用该方法同时测定制剂中阿齐尼地平和替米沙坦的含量[2］．
化学品和试剂
阿齐尼地平和替米沙坦纯药物(API)来自Rankem，阿齐尼地平和替米沙坦片剂(durart-r)、蒸馏水、乙腈、磷酸盐缓冲液、甲醇、二氢钾正磷酸盐缓冲液和正磷酸从孟买Rankem购买。
仪器和色谱条件
电子天平丹佛，PH计-BVK企业，印度，超声波仪-BVK企业，WATERS HPLC 2695系统配备双泵，光电二极管阵列检测器和集成Empower 2软件的自动采样器(图3)．使用Lab India紫外双束分光光度计和UV-win 5软件测量阿齐尼地平和替米沙坦的吸光度[3.］．
图3:阿齐尼地平和替米沙坦的校正曲线。
流动相新鲜制备，经过滤、超声处理后使用，流速为1 ml/min，检测波长为290 nm，注入量为10 μL。稀释剂为乙腈和水按50:50的比例配制。
标准溶液和样品溶液的制备
精确称量阿齐尼地平20 mg，替米沙坦2.5 mg，并转移到50 ml和100 ml的个体容量瓶和3/4th将稀释剂加入烧瓶中超声10分钟。用稀释剂配制烧瓶，标记为标准原液(阿泽尼地平400 μg/ml，替米沙坦50 μg/ml)。从每个原液中抽出1ml，放入10ml的容量瓶中，加入稀释液。(阿齐尼地平40 μg/ml，替米沙坦5 μg/ml)[4］．
原液样品
称量20片，计算出每片的平均重量，然后将相当于一片的重量转移到100ml的容量瓶中。加入稀释剂25 ml，超声50 min，再与稀释剂组成体积，过滤(阿齐尼地平4000 μg/ml，替米沙坦500 μg/ml)。离心20 min，收集上清液，用0.45 μm过滤器(Millipore, Milford, PVDF)过滤，从样品原液中取2 ml移液，倒入10 ml容量瓶中，加入稀释液。(阿齐尼地平40 μg/ml，替米沙坦5 μg/ml) [5］．
过程
分别向色谱系统中注入标准液和样液10 μL，测定阿齐尼地平和替米沙坦的峰面积，计算%测定值。
该方法的所有分析验证参数均根据ICH指南确定。得到的验证参数显示在表1．
| 参数 | Azelnidipine | 替米沙坦 |
|---|---|---|
| 线性(μg / ml) | 60μg / ml | 12.25 - -7.5µg / ml |
| 斜率(m) | 12533 | 9061 |
| 拦截(c) | 10387 | 183.8 |
| 回归方程(Y=mx+c) | Y = 12533x + 10387 | Y = 9061x + 183.8 |
| 回归系数 | 0.999 | 0.999 |
| 系统精度%RSD | 0.7 | 0.8 |
| 方法精度%RSD | 0.8 | 0.6 |
| LOD | 0.86 | 0.09 |
| 定量限 | 2.6 | 0.29 |
| 保留时间(min) | 2.131 | 2.593 |
表1:分析验证参数(系统适用性和线性)。
线性
通过绘制阿齐尼地平和替米沙坦浓度对应的响应因子，构建了校正曲线。阿齐尼地平和替米沙坦的峰面积与各自浓度在10 ~ 60 μg/mL和1.25 ~ 7.5 μg/mL范围内呈线性关系，相关系数(r2) 0.999。用线性回归分析评价方法的线性度。阿泽尼地平和替米沙坦的斜率和截距计算(表2) [6］．
| %的水平 | 添加量(μg/mL) | 回收量(μg/mL) | %的复苏 | 平均回收率 | %的水平 | 添加量(μg/mL) | 回收量(μg/mL) | %的复苏 | 平均回收率 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 50％ | 20. | 19.88 | 99.42 | 99.59% | 50％ | 2.5 | 2.48 | 99.15 | 99.94% |
| 20. | 19.85 | 99.24 | 2.5 | 2.5 | 99.94 | ||||
| 20. | 19.92 | 99.62 | 2.5 | 2.5 | 99.92 | ||||
| 100％ | 40 | 40.26 | 100.64 | 100％ | 5 | 5.04 | 100.86 | ||
| 40 | 39.84 | 99.59 | 5 | 5.04 | 100.73 | ||||
| 40 | 39.9 | 99.75 | 5 | 5.04 | 100.74 | ||||
| 150% | 60 | 59.73 | 99.54 | 150% | 7.5 | 7.45 | 99.4 | ||
| 60 | 59.5 | 99.16 | 7.5 | 7.45 | 99.38 | ||||
| 60 | 59.59 | 99.32 | 7.5 | 7.45 | 99.36 |
表2:阿齐尼地平、替米沙坦准确度表。
精度
采用标准添加法制备了三个等级的准确度样品。每一级均给予三次注射，阿齐尼地平和替米沙坦的平均回收率分别为101.14%和99.49%。给出了所得结果。
灵敏度
检测限(LOD)确定为给出响应的最低浓度，定量限(LOQ)确定为所提出的RP-HPLC方法精度分析的最低浓度[7］．阿齐尼地平的检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.86 μg/ml和2.60 μg/ml，替米沙坦的检出限(0.09 μg/ml)和0.29 μg/ml。LOD和LOQ表明，该方法对阿齐尼地平和替米沙坦的含量敏感表3．
| 药物 | 样品重量(mg) | Inter-day精度 | 系统精度 | 可重复性 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| SD | %相对标准偏差 | SD | %相对标准偏差 | SD | %相对标准偏差 | ||
| Azelnidipine | 20. | 2916 | 0.7 | 3564.3 | 0.7 | 4195.2 | 0.8 |
| 替米沙坦 | 2.5 | 2916 | 0.7 | 285 | 0.7 | 244.3 | 0.6 |
表3:阿泽尼地平和替米沙坦的精密度。
系统适用性测试
通过完全分离阿齐尼地平和替米沙坦来确定该方法的特异性，如图所示图4保留时间，分辨率和尾砂系数等参数。阿齐尼地平和替米沙坦峰的尾砂因子小于2%，分辨率令人满意[8］．阿泽尼地平和替米沙坦平均保留时间分别为2.358 min和3.099 min，共5个重复。阿齐尼地平和替米沙坦的峰轮廓清晰，基线分离清晰。对活性阿齐尼地平和替米沙坦、安慰剂样品(除活性阿齐尼地平和替米沙坦外的所有成分)在应激和非应激条件下也进行了分析[9］．经过分析，发现安慰剂和活性样品中没有峰的干扰。因此，所建立的方法是专门用于该产品的分析。
图4:阿齐尼地平和替米沙坦的色谱优化。
精度
从一个装有工作标准溶液的容量瓶中注射六次。对同一分析人员在不同的日子对已上市配方的六种样品制剂进行了中等精度的研究。该方法的稳健性取决于流量、温度和流动相比的微小变化[10］．从较低的相对标准偏差值可以明显看出，这些变化对药物含量没有不利影响，这表明该方法坚固可靠。文中给出了该方法对片剂配方的测定结果表4．
| 分子 | LOD | 定量限 |
|---|---|---|
| Azelnidipine | 0.86 | 2.6 |
| 替米沙坦 | 0.09 | 0.29 |
表4:阿齐尼地平、替米沙坦敏感表。
稳定
为了证明标准溶液和样品溶液在分析过程中的稳定性，两种溶液都在室温下分析了24小时。结果表明，阿齐尼地平和替米沙坦两种溶液的保留时间和峰面积基本相同(% r.s.d < 2.0)，在测定时间内均无明显降解，说明两种溶液稳定时间至少为24 h，足以完成整个分析过程。进一步的强制降解研究表明所开发的方法的稳定性。降解研究的结果在表5和表6．
| S.no | 条件 | 阿泽尼地平的RSD % | 替米沙坦RSD % |
|---|---|---|---|
| 1 | 流量(-)0.9 ml/min | 0.8 | 0.7 |
| 2 | 流量(+)1.1 ml/min | 0.7 | 0.8 |
| 3. | 流动相(-)44:56溶剂 | 0.8 | 1 |
| 4 | 流动相(+)46:54溶剂 | 0.9 | 1 |
表5:阿泽尼地平和替米沙坦的稳健性数据。
| 药物 | 标签强度(mg) | %化验 |
|---|---|---|
| Azelnidipine | 400 | 99.96% |
| 替米沙坦 | 50 | 100.45% |
表6:药物剂型测定结果。
试验样品
将阿齐尼地平和替米沙坦的含量(分别为40和5 mcg)收集在50 ml容量瓶中。然后加入乙腈20 ml，超声25 min，配制成标记，得1110 μg/ml和500 μg/ml。离心20 min，收集上清液，用0.45 μm过滤器(Millipore, Milford, PVDF)过滤。从样品原液中移出2ml，放入10ml容量瓶中，加入稀释液。(阿齐尼地平40 μg/ml，替米沙坦5 μg/ml) (表7和表8)．
| 退化类型 | Azelnidipine | ||
|---|---|---|---|
| %退化 | 纯度角 | 纯洁的阈值 | |
| 酸 | 3.19 | 0.21 | 0.402 |
| 基地 | 4.49 | 0.11 | 0.402 |
| 过氧化 | 2.66 | 0.21 | 0.402 |
| 热 | 2 | 0.126 | 0.421 |
| 紫外线 | 2.28 | 0.208 | 0.419 |
| 水 | 6.27 | 0.218 | 0.423 |
表7:阿泽尼地平的降解研究。
| 退化类型 | 替米沙坦 | ||
|---|---|---|---|
| %退化 | 纯度角 | 纯洁的阈值 | |
| 酸 | 4.23 | 1.267 | 1.661 |
| 基地 | 2.27 | 1.662 | 2.136 |
| 过氧化 | 2.88 | 1.501 | 1.862 |
| 热 | 4.68 | 1.244 | 1.657 |
| 紫外线 | 3.27 | 1.326 | 1.639 |
| 水 | 3.24 | 1.465 | 1.742 |
表8:替米沙坦的降解研究
酸降解样品
加入1ml阿齐尼地平替米沙坦原液，1ml 2n盐酸，在60°C回流30分钟。将所得溶液稀释至40 μg/ml和5 μg/ml溶液，并将10 μl溶液注入体系中，记录色谱图，以评估样品的稳定性。给出了典型的酸降解色谱图图5．
图5:阿齐尼地平和替米沙坦的酸色谱。
碱降解样品
加入1 ml阿齐尼地平和替米沙坦原液，1 ml 2 N氢氧化钠，在60°C下回流30分钟。将所得溶液稀释至40 μg/ml和5 μg/ml溶液，并将10 μl注入体系中，记录色谱图，以评价样品的稳定性。给出了典型的酸降解色谱图图6．
图6:工作样品溶液的基础色谱图。
氧化降解样品
分别加入阿齐尼地平、替米沙坦原液1 ml, 20%过氧化氢(H2O2) 1 ml [11］．在60°C下保存30分钟。HPLC研究中，将所得溶液稀释至40 μg/ml和5 μg/ml溶液，并将10 μl注入体系中，记录色谱图，以评估样品的稳定性。给出了氧化降解的典型色谱图图7．
图7:阿齐尼地平和替米沙坦的过氧化物色谱图。
中性降解研究
中性条件下的压力测试通过在60ºC的水中回流药物1小时进行研究。HPLC实验中，将得到的溶液稀释至40 μg/ml，并将5 μg/ml溶液和10 μl溶液注入体系中，记录色谱图，以评估样品的稳定性。给出了氧化降解的典型色谱图图8．
图8:阿齐尼地平和替米沙坦的热色谱图。
照片能力研究
通过将250 μg/ml和625 μg/ml溶液置于紫外光下，将烧杯置于紫外光室中1天或在光稳定室中放置200瓦时/m2，研究了药物的光化学稳定性[12］．HPLC实验中，将得到的溶液稀释为40 μg/ml和5 μg/ml溶液，并将10 μl注入体系中，记录色谱图，以评估样品的稳定性。给出了热降解的典型色谱图图9．
图9:阿齐尼地平和替米沙坦的紫外降解色谱图。
通过改变流动相、进样量、流速等参数进行优化，建立了适合的色谱方法。本方法采用标准对称C18色谱柱(4.6 × 150 mm, 5 μm)分别测定阿齐尼地平和替米沙坦。流动相为缓冲液0.01 N KH2阿宝4:乙腈(45:55% v/v)分别为阿泽尼地平和替米沙坦，阿泽尼地平和替米沙坦的滞留更依赖于流动相。两峰的分离也与缓冲液和流动相的比例有关。达若那韦和替米沙坦在可接受的保留时间内洗脱，分离度较好。已经开发了几种测定阿齐尼地平和替米沙坦药物剂型和生物液中阿齐尼地平和替米沙坦的测定方法，但本方法是最经济和准确的，因此本方法对于测定阿齐尼地平和替米沙坦的散装和药物剂型非常有用。该方法按照ICH-Q进行验证2(R1)准则，在选择性、准确性和稳定性方面均满足法规要求。综合所得数据，可以肯定该方法快速、简便，适用于阿泽尼地平和替米沙坦的准确测定
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