肼嗪的分析方法综述。

摘要

肼苯哒嗪它属于肼苯酞类药物，是一种有效的血管扩张剂，与合适的β阻断药物合用治疗高血压。肼嗪不仅是一种外周血管扩张剂，也是一种有效的不可逆的氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)抑制剂。它以品牌名称Apresoline®由诺华公司销售，并于1953年获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准。本文对各种药学期刊上发表的文献进行了广泛的综述，并对目前开发和应用于海拉嗪测定的仪器分析方法进行了综述。这篇综述包括电位滴定，比色法，HPLC-UV，高效液相色谱法采用电化学检测、HPLC-MS/MS、GC-ECD、GC-FID、GC-NSD。本方法在中药中肼嗪含量测定中的应用制药配方并对生物样品进行了讨论。

关键字

肼嗪，分析方法

介绍

肼嗪(1-肼基酞嗪)(图1)是一种直接作用的平滑肌松弛剂，主要在动脉和小动脉中作为血管扩张剂用于治疗高血压。血管扩张剂的作用是降低外周阻力，从而降低血压和减少后负荷。在心脏瓣膜置换术后及慢性顽固性心力衰竭的治疗中也有临床应用。1，2]。广泛与β阻断药(平衡反射性心动过速)和利尿剂(减少钠潴留)合用治疗原发性高血压。HDZ增加环鸟苷单磷酸(cGMP)水平，增加蛋白激酶G (PKG)的活性。活性PKG向肌球蛋白轻链激酶(MLCK)添加抑制磷酸，MLCK是一种参与平滑肌跨桥循环(即收缩)激活的蛋白质。这导致血管松弛[3.，4]。过量或习惯性服用肼嗪可引起中毒症状，如头痛、关节或肌肉疼痛、脚踝肿胀、恶心、出汗、心动过速、心律失常和心绞痛沉淀[5]。该物质最初以阿普resoline的品牌名称销售^®1953年由诺华公司(Novartis)开发，并获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准。市面上销售的LEF配方如下表没有。1(6，7]。

分析方法的开发和验证是优化药物分析的基础制药行业并保证商品化产品的质量。(8方法开发需要开发定量方法来确定生物基质中药物和必要时代谢物的浓度。这些方法用于支持药物开发中的若干活动，包括配方研究、GLP、毒理学、临床药理学和临床研究。(9方法验证是为了证明用于药物和/或代谢物定量测量的特定方法是可靠的，并且可重复用于预期用途。将验证后的方法应用于具有已知样本和预定义接受标准的研究样本。所得值用于计算预期最终结果的药代动力学参数[10]。

各种各样的分析方法已被报道用于测定药物制剂和生物液体中的HDZ。它包括电位滴定法、比色法、气相色谱法-氮气选择性检测器(GC-NSD)，气相色谱-火焰电离检测器(GC-FID)，高效液相色谱-紫外可见光谱(HPLC-UV)，高效液相色谱-电化学检测和液相色谱-电子喷雾电离串联质谱法(LC-ESI-MS / MS)。HPLC法和GC法分别采用不同的内标、不同尺寸的反相柱和不同的流动相组成进行定量。本文综述了药物和生物基质中HDZ的测定方法。

肼嗪的多种分析方法

HDZ是一种高活性的酞嗪，能与内源性α-酮酸(如丙酮酸)迅速形成腙。为了确定未变化的肼，分析物必须在样品收集后立即衍生成稳定的形式。

官方的方法

2010年印度药典和2009年英国药典包括电位测定法滴定法用于HDZ定量。将0.1 g药物溶解在水和盐酸的混合物中。然后用0.05滴定米碘酸钾和用甘汞参比电极和铂指示电极测定终点电位的方法[11，12]。

美国药典30国家处方25包括HPLC - UV法用于HDZ的定量。色谱柱为4 mm × 25 cm，填料为10微米L10，色谱柱为1.44 g十二烷基硫酸钠，0.75 g四丁基溴化铵，溶液为770 ml水，溶液为230 ml乙腈(pH-3)，流速为1 ml/min，紫外检测波长为230 nm [13]。

分光光度法测定

斯图尔特等．1983年报道了一种测定HDZ的比色法药物剂型根据与9-甲氧基吖啶的相互作用，在455nm处测定了溶液的显黄度。在这里，显色受吖啶试剂用量和加热或室温放置时间的影响。为了获得最大吸光度，溶液在50±10C下加热至少5分钟或静置环境温度结果表明，HDZ含量在0.1 ~ 12 μg/ml范围内，相关系数为0.9993。本方法的精密度和准确度也较好，RSD分别为0.15 ~ 3.29%和98.8% ~ 101.2% [14]。

产生等．1993年描述了用与2-羟基-1-萘醛乙醇溶液相互作用的比色法测定二肼的方法，建立了不溶于水的黄色产物1,4-双[(2-羟基-1-萘基)亚甲基肼肼在420 nm处测定。该方法可用于其他药物(利血平、氢氯噻嗪、奥普那洛尔、黄嘌呤、芦桃苷、氯噻酮、比他塞平)混合物中二肼嗪的含量测定。该工艺在50°C下稳定。在250℃下加热1小时得到了最精确的结果。结果参数见表没有。2(15]。

色谱方法

气相色谱法(GC)

杰克等．1975年用气相色谱法测定血浆中HDZ。衍生化反应采用亚硝酸，用有机溶剂萃取形成稳定的化合物，以1-肼-4-甲基酞嗪为内标进行定量测定。采用Chromosorb W-HP(80-100目)，填充3% OV-223，在2200℃柱箱温度下，以氮气为载气，流速为30 ml/min，电子捕获检测器检测。在10 ~ 200 ng/ml [16]。

史密斯等．1977描述了一种气相色谱法定量片剂制剂中HDZ的方法，该方法基于与2,4-戊二酮相互作用生成1-(3,5-二甲基吡唑)酞嗪，并使用火焰电离检测器以4-甲基肼为IS进行测定。以无氧氮气为载气，流速为55 ml/min，在柱温为2000℃的u型玻璃管上，填充10% SE-30 (6ft × 4mm I.D.)进行分离。在这里，HDZ和IS的加样回收率分别为98.1和98.5% [17]。

德根等．1979年建立了血浆中不变HDZ的气相色谱特异测定方法。以2,4-戊二酮和4-甲基HDZ为IS进行衍生化反应，用氮选择性检测器测定。色谱条件包括Chromosorb W-HP玻璃柱(2 m x 2 mm id)，以3% OV-17为固定相，柱温为2300C，载气为氦气，流速为35ml/min。在9.5 ~ 240 ng/ml范围内，HDZ衍生物和IS的保留时间分别在3.4和4.6时呈线性关系[18]。

安吉洛等．1980年提出了以4-甲基HDZ为IS同时定量HDZ及其乙酰化代谢物3-甲基-s-三唑[3,4-α]酞嗪(MTP)的气相色谱方法。HDZ和IS经甲酸衍生化转化为甲酰化衍生物，用甲苯提取，用氮选择性检测器检测。色谱在Chromosorb W玻璃柱上进行，柱内填充1% SP 1000，以氦气为载气，流速为30 ml/min。HDZ和MTP的检出下限分别为0.13和0.27 μmol/l，线性范围为1 ~ 15μmol/l。在这里，还发现，添加抗坏血酸后，血清样品在-20℃下稳定至少7个月[19]。

高效液相色谱法

摩尔等．1985年报道了利用HDZ与对羟基苯甲醛或对茴香醛衍生化产物作为IS的高效液相色谱法。色谱柱为μBondapak Phenyl柱(30cm × 3.9 mm, 10 μm)，柱温350C，等压模式下，甲醇:2%醋酸溶液(60:40,v/v)，流速1ml/min，紫外检测器检测，波长295 nm。方法验证参数列于表没有。3.．这里还发现，如果在甲醇中从剂型中提取HDZ，并在2小时内用水稀释，则不会发生明显的降解。此方法适用于需要分析多个样本的情况[20.]。

黄等．1987年建立了反相高效液相色谱电化学检测法提取分析血浆中HDZ的方法。用水杨醛在室温下衍生化HDZ和4-甲基HDZ (IS)，用庚烷、二氯甲烷和异戊醇的混合物提取。色谱柱为Supercoil LC-18-DB (5um)，温度为28°C，使用66%甲醇，0.055 A4柠檬酸/ 0.02流动相为磷酸二钠(pH 2.5)，流速为1.5 ml/min。两种衍生物均通过电化学检测器检测，屏幕氧化模式为:调节电池电位为+0.20 V，检测器1(库仑电极)为+0.25 V，检测器2(安培电极)为+0.60 V。方法验证参数列于表没有。4．该方法用于常规患者监测或游离(未代谢)HDZ的药代动力学研究[21]。

阴间的诸等．1990年描述了以甲基红为IS测定人血浆中HDZ及其代谢物的高效液相色谱方法。该方法与2-羟基-1-萘醛在pH为1.2的条件下进行柱前衍生化，提取到二氯甲烷中，用紫外检测器在406 nm处检测。色谱柱为ODS-2，填充球形球(250 × 4,3 μm)，以乙腈:磷酸三乙胺缓冲液(80:20,v/v - pH 3)为洗脱液，流速为0.7 ml/min。方法结果参数列于表没有。5(22]。

刘等．2011年介绍了一种采用MS/MS检测的高效液相色谱法定量BALB/C小鼠血浆和脑组织中HDZ的方法。以2,4-戊二酮在500℃下衍生1 h，进行固相萃取一步，纯化浓缩HDZ衍生物。色谱分离采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱，柱室温度为300C，等容模式下，以0.01 mol/l甲醇:乙酸铵(60:40,v/v)为溶剂，流速为0.2 ml/min，电喷雾正电离模式下，以m/z 225.2→129.5为检测多反应监测过渡。方法结果参数列于表没有。6．(23］

结论

综述了药物制剂和生物液中肼嗪的分光光度和色谱分析方法的专属性、灵敏度和准确性。但是，还需要开发其他的方法，如荧光光谱法和高效液相色谱法，也可以通过合适的稳定性指示方法开展降解动力学研究。

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