西罗莫司的分析方法测定:审查。

文摘

西罗莫司是一种大环内酯物内酯固体发酵得到的模具,链霉菌属hygroscopicus。西罗莫司是一种强有力的免疫抑制剂用于防止器官移植排斥肾移植中特别有用。西罗莫司批准,1999年由美国食品药物管理局(FDA)对肾移植和也称为雷帕霉素®(拉伯)。各种分析方法已报告在生物体液SRL的决心。西罗莫司的方法测量生物流体包括各种色谱方法,像RP-HPLC-UV LC-ESI-MS / MS和RP-HPLC-PDA还包括各种酶方法基本和MEIA IMx分析仪。这些方法的应用在生物样品测定西罗莫司(人或狗血)也在本文中讨论。

关键字

西罗莫司(SRL)、环孢霉素(CsA)

介绍

西罗莫司(SRL)是一个已经三烯大环内酯物与半缩酮内酯蒙面a, b - dicarboxamide和发酵产生的链霉菌属hygroscopicus。它是一种新型的抗排斥药物的免疫抑制活性体外和体内也有抗增殖活动;这是特别有用在肾移植。1)防止激活T细胞和B细胞的抑制他们对白介素2的反应(2)和其他T细胞生长因子受体如环孢霉素(CsA)和他克莫司(TAC)。SRL需要形成一个复杂的immunophilin (cystolic蛋白质结合免疫抑制药物),即颗绑定Protein-12 (FKBP-12)。然而,SRL-FKBP-12复杂并不影响钙调磷酸酶活性和抑制蛋白激酶,指定哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR),这是一个关键酶在细胞周期进程。抑制mTOR G1→S期细胞循环发展的过渡(2,3]。

SRL是有效的与其他免疫抑制剂单独或结合管理,如CsA。生存研究实验室的生物活动强化CsA的免疫抑制效应(4]。1999年9月中旬,SRL批准,由美国食品和药物管理局(FDA)对肾移植用于结合CsA和类固醇和也被称为雷帕霉素^®(拉伯)。可用的配方中位数都加入了销售表没有。1(5]。

分析方法的开发和验证的基本优化分析药物的重要性制药行业和保证质量的商业化产品6]。各种分析方法已报告在生物体液SRL的决心。它包括反相-高效液相色谱-紫外光谱(RP-HPLC-UV),液相色谱-串联质谱(质/ MS),液相色谱-电子喷雾电离串联质谱(LC-ESI-MS / MS)反相-高效液相色谱-二极管阵列检测器照片(RP-HPLC-PDA),无线电受体分析(基本)和微粒子酶免疫测定(MEIA)串联质谱仪(MS / MS)和IMx分析仪。之间的高效液相色谱方法不同的内部标准,反相列不同粒径、不同的内部直径和不同流动相成分已被用于量化的目的。本综述的目的是总结这些验证技术在生物测定SRL矩阵。

西罗莫司的各种分析方法开发

生物样本

生物材料使用了人体血液或狗血。样品制备通常是由固相萃取(SPE)或液液萃取(米歇尔)。SRL的方法测量生物流体包括各种色谱方法,像RP-HPLC-UV质/女士,LC-ESI-MS / andRP-HPLC-PDA女士,还包括各种酶方法基本和MEIA MS / MS分析仪和IMx分析仪。

色谱方法

泰勒等。1998公布了高效液相色谱- ESI - MS / MS检测方法分析SRL的血液。样本由预处理与乙腈:15米米硫酸锌(70:30,v / v)使用32-o-desmethoxysirolimus作为内部标准(是)和C18固相萃取。进行了色谱分离Novapak C₁₈列(150×32.1毫米身份证,4μm particle size), at 50°C temperature using mobile phase consisting of methanol: 50 m米乙酸铵缓冲(pH值5.1)(80:20% v / v)在0.2毫升/分钟的流量。检测是三重四仪器使用选择反应监测质量转换931.8→864.6 m / z和901.8→834.4 m / z SRL,分别。方法验证参数列表表没有。2(7]。

基什内尔等。1999年开发和验证一个半自动HPLC-ESI-MS试验同时量化SRL和CsA的血液。半自动样品制备包括手动除蛋白与甲醇的混合物和硫酸锌和自动列开关在线高效液相色谱提取站岗列(30×4毫米,10μm)充满C18Nucleosil^®100通过使用水(pH值7.0)作为流动相流速0.35毫升/分钟。色谱法,分析海泼斯尔合金^®ODS柱(250×2毫米,5μm)作为固定相在35°C温度andmethanol:水(挺,v / v)作为流动相流速0.2 ml / min wereused。检测是由质量分析仪通过测量钠离子加合物SRL [M + Na) + (m / z936.6)和CsA (m / z1224.9)停留时间为0.5。方法的结果参数列表表没有。3。SRL和CsA稳定血液中至少4个月-200 c和98%意味着8]。

停止DW等。2000描述了RP - HPLC-UV SRL水平估计方法在人类利用desmethoxyrapamycin作为是全血样品。进行色谱分离ultra-sphere C18键合硅胶柱(25厘米×4.6毫米,5μm),加热在50°C组成的流动相乙腈:去离子水(65:35,v / v) 1.5毫升/分钟的流量通过紫外探测器在278海里。结果参数列入表没有。4。样本稳定3个冻融循环时储存在-20°C和≥2天当存储在环境温度(9]。

Maleki等。2000年建立了一个RP-HPLC-UV方法使用desmethoxysirolimus作为SRL的治疗药物监测人体全血。在这种方法中,样本由提取l-chlorobutane和色谱分离是一个C₁₈列(4.6毫米x 15厘米,3点)用流动相组成的甲醇,乙腈:水(68:2:30,v / v / v)和1.0毫升/分钟的流量温度60°C和紫外探测器在探测到278海里。验证参数列表表没有。5(10]。

均等。2002年提出RP-HPLC-UV SRL的分析方法在使用32-o-desmethoxyrapamycin作为全血。在这里,样品是由硫酸锌,然后用丙酮提取纯化紧随其后固相萃取。色谱分离是一个列挤满了超球体C₈3毫米(7534.6毫米)和加热50°C用蒸馏水的混合物:甲醇:乙腈(34:30:36,v / v / v) 1毫升/分钟的流量和紫外探测器在探测到278海里。方法的结果参数列表表没有。6(11]。

钟鸟马等。2004年建立RP-HPLC-PDA方法TDM SRL的肾的血液样本,心脏和肝移植。,SRL Desmethoxyrapamycin(是)被沉淀的组合净化血液样本矩阵与硫酸锌和单个步骤与丙酮和1-chlorobutane液液萃取。分离进行了50°C C₁₈列(150×2.1毫米,5μm),在权力平等主义的模式使用流动相组成的蒸馏水:甲醇:乙腈(26:50:24,v / v / v),在0.25毫升/分钟的流量和紫外二极管阵列探测器探测到278海里。方法验证参数列表表没有。7(12]。

李等。2010年提出质/ MS方法测定SRL的狗血通过使用他克莫司(TAC)作为。这里,SRL的浓度在血液样本量化后36 h狗收到3毫克/公斤SRL的剂量。色谱法的实现是一个神童Phenyl-3列(2.0毫米×50毫米,5μm),在权力平等主义的模式使用组成的流动相乙腈:甲醇:碳酸氢铵(10 m米)(68:17:15,v / v / v) 0.25毫升/分钟的流量和检测是由三重四极质谱仪优化多反应监测(MRM)条件的分析物在正离子模式。这里,前体→产品离子SRL过渡(m / z931.7→864.5),是(m / z821.6→768.5)都是被监控的。方法的结果参数列表表没有。8(13]。

马诺等。2011年建立质/ LC / MS方法定量SRL的人体全血。样品制备、预处理实验首先是硫酸锌蛋白质沉淀,为消除水溶性和提取使用octadecylsilyl-silica凝胶亲水性化合物,和混合SPE盒治疗消除磷脂。使用Ascomycin作为执行分离是Capcell Pak MG II(150毫米×2.0毫米身份证。5μm)在50°C柱温度使用10米米醋酸铵:甲醇(20:80,v / v)作为流动相的流速0.2 mL / min。检测是由选择反应监测(SRM)转换的m / z 931.6 - -864.5和809.5 - -756.5 m / z被用于监测SRL Ascomycin,分别住时间是500 ms。方法验证参数列表表没有。9。样品稳定至少46天在-200 c存储至少三冻融循环(14,15]。

阿尼尔•库马尔等。2012年进行产物分析方法与PDA检测SRLin量化的血液样本使用酮康唑(KTZ)。使用二氯甲烷萃取进行氮气氛下andseparation是通过水域Xterra女士C₁₈分析柱(250×4.6毫米,5μm),在权力平等主义的模式使用流动相组成的甲醇:水:冰醋酸(90:10:0.1%,v / v) 1毫升/分钟的流量和PDA探测器探测到278海里。方法验证参数列表表没有。10(16]。

酶的方法

固特异N。等。1996描述了基本估计SRL的全血。为此,SRL从干resuspended管与[3 h]二氢吸收FK506在160000衰变/分钟(dpm)其次是直接甲醇提取,使用包含14或15 - 25μg蛋白质52 kDa蛋白质最终稀释剂。之后,样本应用于交联葡聚糖LH-20列,床体积1.8毫升之前平衡LH-20缓冲区(20更易与L三羟甲基氨基甲烷(pH值7.2),液5更易/ Lβ-mercaptoethanol,和0.5 g / L叠氮化钠),和筛选了150μL其次是1.25毫升LH-20缓冲独立自由[3 h]二氢吸收FK506绑定和绑定部分测量使用闪烁计数器的计数效率的59%。非特异性结合估计使用1 mg / L无标号SRL的浓度。验证参数列表表没有。11。在干扰的研究中,基本没有干扰观察SRL CsA,甲氨蝶呤、地塞米松和强的松(17]。

琼斯K等。2000年研究了MEIA准备样本测量全血和HPLC-MS / MS方法用于SRL估计。在这种方法中,样本由蛋白质沉淀提取技术。特异性是由2西罗莫司的代谢物(Hydroxysirolimus和4 l-o-demethylsirolimus)西罗莫司免费人体全血。方法验证参数列表表没有。12。在稳定性研究,没有失去SRL期间共有3个冻融循环和样本在40度和稳定的10天环境温度(22°C免受光)(18]。

威尔逊D等。2006描述微观粒子酶免疫法(MEIA)西罗莫司的使用IMx分析器全血。在这种方法中,MEIA是一个一步竞争分析利用小鼠单克隆抗体共价耦合的羧酸盐微粒子。,样本使用methanolic沉淀试剂和IMx探针/电极装置预处理的样本,结合微粒子,和共轭的孵化好一次性MEIA反应细胞。之后,它与碱性磷酸盐反应,形成基质,4-Methylumbelliferyl磷酸盐,转化为一个荧光产品由IMx光学测量装置。特异性,SRL主要代谢成羟化和/或脱甲基CYP3A4酶系统的形式。方法结果参数列表表没有。13(19]。

结论

本文介绍了特异、灵敏和准确的评估分析技术SRL的血液是基于高效液相色谱的分离具有不同探测器和一些酶的方法。除了光度,spectrofluorimetric和色谱方法高效液相色谱法不报道SRL量化制剂和生物液体。然而在未来一些新的方面可以认为稳定指示方法的开发和验证以及退化动力学研究和杂质研究。

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