研究与评论:生药学与植雷竞技苹果下载物化学杂志
菜单e-ISSN: 2321-6182 p-ISSN: 2347-2332
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Doukkali Z1*，塔赫祖提K2——卡马尔·R1， Jemeli ME1，纳杰莫丁1，泽卢A1， Cherrah Y1，阿拉维K1
1药效学研究小组，药理学实验室毒理学摩洛哥拉巴特穆罕默德五世大学医学和药学学院
收到:21/12/2015接受:01/02/2016发表:07/02/2016
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背景:治疗焦虑症最广泛的处方药是苯二氮卓类药物;然而，它们有明显的副作用。因此，开发新的药物是合理的，对影响“心灵”的替代药物的兴趣正在增长。在药用植物中，在摩洛哥民间医学中，汞已被推荐用于缓解焦虑。方法:采用高架加迷宫(EPM)模型和开阔场(of)模型，研究环水仙甲醇提取物对焦虑模型的影响。黄花汞提取物按剂量口服Balb/c小鼠，地西泮腹腔给药。结果:在EPM中，与对照组相比，200-400 mg/kg的甲醇提取物通过增加张开手臂的时间和张开手臂的百分比显示出抗焦虑作用。在露地试验中，甲醇提取物(400 mg/kg)增加了在花场中心的交叉面积、饲养时间和饲养次数。结论:这些数据支持了环沙沙醇提物可能具有显著的抗焦虑潜力，值得在药物开发过程中进一步研究，为其传统说法提供了科学依据。
焦虑;Balb / c小鼠;高架加迷宫;开放的领域;的甲醇提取物Mercurialis青蒿;摩洛哥
焦虑疾病是最常见的精神疾病影响所有年龄组别的人口[1]。治疗焦虑症的主要药物有苯二氮平类药物以及选择性血清素再摄取抑制剂[2]。然而，这些化合物有一些不良影响，如失眠，肌肉放松和肝毒性(3.]。这些考虑意味着寻找新的抗焦虑化合物，这些化合物起效快，副作用少，安全边际大。药用植物是找到治疗这些疾病的新疗法的好来源。
在民间医学中，属于大戟科的一些品种，如Mercurialis青蒿，已知具有抗焦虑作用[4]。
Mercurialis青蒿大分流科(Euphorbiaceae)是一种一年生风媒传粉植物，遍布欧洲中部和西部以及地中海盆地周围的原始栖息地和路边栖息地[5]。该物种是地中海地区的冬季一年生植物，长期以来一直被认为在摩洛哥人民中具有镇静作用[4，6]。
高达10-50厘米，m .青蒿含有大量的类黄酮(Aquino et al.， 1987)和吡啶酮型生物碱hermidin [7]。民族植物学报告认为，干燥的植物具有泻药、利尿或抗梅毒的作用。
在本研究中，我们考察了水提物的抗焦虑活性Mercurialis青蒿通过升高+迷宫(EPM)模型和开阔场模型对小鼠焦虑的影响。
动物
成年瑞士小鼠(雌雄各20-30克)被用于这项研究。这些动物来自拉巴特Mohammed V souissi大学医学和药学学院的动物实验中心。动物被饲养在可控温度(25±1°C)和照明(亮/暗12:12 h)的房间里，在聚丙烯笼中，随意提供食物和水。动物在实验开始前至少1小时适应实验室条件。这些动物被分为四组，每组由六只老鼠组成，执行所有的实验。
植物材料
空中部分Mercurialis青蒿是在一名传统医生的协助下，从摩洛哥北部瓦赞镇(Jaaouna el Basra)附近采集的。该植物由科学研究所Pr. M. Ibn Tatou和Pr. Halim Khammar的植物学家鉴定。凭证标本(N°RAB78984)保存在拉巴特科学研究所植物系植物标本室。
水提取物的制备
空中部分Mercurialis青蒿(100 g)用1 L蒸馏水(70°C, 30 min)提取，浓缩后冷冻干燥得到水提物(AE)，得率32.70%。
药物
水提取物Mercurialis青蒿悬浮在蒸馏水中。安定(安瓿10 mg/2 ml)用生理盐水稀释至所需浓度后使用。众所周知，苯二氮平类药物在低剂量时起抗焦虑作用，而在高剂量时则可诱导镇静和肌肉松弛作用[8]。因此，我们使用安定(1 mg/kg)作为抗焦虑样作用的阳性对照。
治疗计划
实验组小鼠口服(p.o.)黄芪水提液Mercurialis青蒿剂量为(100-600 mg/ kg)，而对照组通过相同的途径注射生理盐水。地西泮(1mg /kg)腹腔注射。所有药物均在实验前新鲜配制。计算提取物的剂量，给20克小鼠注射0.25 ml的提取物悬浮液。在处理后1H min进行试验。采用光/暗箱试验和全板试验检测抗焦虑活性，采用旋转杆试验评估运动协调性。
急性毒性研究
程序按照OECD 423指南执行[9)(经合组织/ OCDE。2002)。提取物以2000 mg/kg体重口服。小鼠被观察14天，以记录可能的死亡率;记录他们的体重并研究他们的行为神经毒性。
高架迷宫
升高+迷宫(EPM)最初是由Handley和Mithani [10由黑色木板组成，由两个50厘米x 10厘米x 40厘米的闭合臂和两个50厘米x 10厘米的张开臂组成，连接到一个中央平台(10厘米x 10厘米)。盖上可拆卸的盖子，使张开或合上的手臂彼此相对[11]。迷宫被抬高到离地面50厘米的高度。在实验过程中，每只老鼠都被放在中央隔间里，面对着其中一只张开的手臂。记录输入的次数和张开双臂的时间，持续5分钟。当老鼠的四只爪子都进入张开或闭合的手臂时，记录一次输入。双臂张开条目的增加和双臂张开时间的增加被解释为潜在的抗焦虑活性指标。所有的测试过程都是用摄像机记录下来的。
露天试验
实验组6只小鼠分别用生理盐水、水提液处理Mercurialis青蒿(100- 600mg /kg, po)或安定1mg /kg, ip)。在处理后(水浸60分钟，安定30分钟)，动物被单独放置在竞技场中心，并进行5分钟的露天测试。露天设备是一个不透明的有机玻璃笼子(72 x 72厘米)，墙壁高35厘米，地板用白线划分为16个相同尺寸的正方形(18 x 18厘米)。在笼子上方安装了一个数字摄像机来记录老鼠的活动。整个房间，除OF在实验期间保持黑暗外，本研究评估小鼠的一般运动活动，以丢弃低活性、多活性或没有与治疗相关的变化，这些变化可能会干扰小鼠在高架加迷宫中的行为活动，并观察到以下参数:(a)穿过的总数，(b)穿过中心区域，(c)在中心区域的时间(d)中央区域饲养[12，13]。
每次测试结束后，用水仔细清洗抬高的加迷宫设备和露天笼子，并晾干以去除先前评估动物的气味，否则可能会改变后续评估小鼠的自发行为[14]。
这个测试也反映了老鼠对新开放区域中心区域的固有恐惧与它们探索新环境的愿望之间的冲突。焦虑时，老鼠的自然倾向是喜欢靠近墙壁。
伦理批准
这项研究是根据由美国国家科学院编写并由美国国立卫生研究院出版的《实验动物护理和使用指南》中概述的公认原则进行的，并尽一切努力尽量减少动物的痛苦和使用的动物数量。经拉巴特穆罕默德五世大学医学和药学学院动物中心实验室批准。
统计分析
所有结果均以均数±标准差表示。所有统计分析均采用单向方差分析(ANOVA)，随后采用Tukey事后检验。与对照组比较，P<0.05为显著性差异。
急性毒性研究
口服后，水提取物Mercurialis青蒿在剂量为2000mg /kg, P.O时，观察动物的毒性迹象，如抽搐，体温过低给药后持续2小时，死亡率可达24小时。在治疗组和对照组之间，没有观察到毒性和体重的显著变化。
高架迷宫
小鼠在高架加迷宫试验中张开双臂时间的方差分析显示各组间差异显著(P<0.05) (图1）.
图1所示。时间花在张开的手臂上。
所有值均为平均值±SEM (n=6);*p<0.05， ***p<0.001。单向方差分析，Tukey的多重比较事后检验。##p<0.01， ##p<0.001，与Ext 100和Ext 200相比Ext 400。
与Tukey测试的事后比较显示，接受meoh提取物的动物Mercurialis青蒿与对照组相比，(100- 400 mg/kg, po.)和腹腔注射1mg /kg地西泮增加了张开手臂的时间(分别为P<0.01和P<0.001)。
所处理的组的值m .青蒿在400 mg/kg体重时高于低剂量处理(100,200 mg/kg)。
同样，进入高架加迷宫张开臂次数的方差分析显示各组间差异有统计学意义(P<0.05)。进一步的事后比较与Tukey试验表明，动物接受水提取物环汞(100-600 mg/kg)组小鼠进入迷宫张开臂的次数显著多于对照组(P<0.05和P<0.001) (图2）.
图2。打开手臂条目。
所有值均为平均值±SEM (n=6);*p<0.05， ***p<0.001。单向方差分析，Tukey的多重比较事后检验。##p<0.01， ##p<0.001，与Ext 100和Ext 200相比Ext 400。
然而，与标准药物地西泮(1mg /kg)相比，400 mg/kg体重处理组的入组数更高，张开双臂的时间更长。
空旷的田野
总过
在野外测试中，两组间的运动能力(穿越总次数)无差异(图3）.
图3。总穿越。
所有值均为平均值±SEM (n=6)。单向方差分析，Tukey的多重比较事后检验。
中心区交叉口
所有值均为平均值±SEM (n=6);*p<0.05， **p<0.01。单向方差分析，"Tukey's多重比较事后检验。
事后测试显示，中心区域交叉仅在400 mg/kgMercurialis青蒿(P<0.001, P<0.05)，与对照组和其余组(图4）.
图4。中央区域交叉。
在中心区停留时间:
给予400 mg/kg或地西泮治疗的小鼠在中心区域停留的时间显著延长(P<0.01, PÃÂ 0.001) (图5）.
图5。花时间在中心区域。
所有值均为平均值±SEM (n=6);**p<0.01， ***p<0.001。单向方差分析，"Tukey's多重比较事后检验。
中心区饲养
水提液可提高中部饲养率Mercurialis青蒿400 mg/kg和地西泮1 mg/kg(分别P<0.001, P<0.05) (图6）.
图6。中心区饲养。
在目前的工作中，我们检查了抗焦虑的性质Mercurialis青蒿．我们已经选择评估水提取物Mercurialis青蒿在研究动物焦虑行为的两个最有效的模型中，即高架加迷宫和开放场地是一个被广泛接受的实验动物模型，通常用于测试药物的有效性抗焦虑药药物(15-17]。
高架加迷宫测试是基于对大鼠或小鼠的自然行为的观察，它们表现出对新的开放空间的厌恶，并害怕在相对狭窄的凸起平台上保持平衡，这可能会引起人类的焦虑[17];因此，避免张开双臂被解释为焦虑行为[16，18]。抗焦虑剂增加了对张开双臂的探索(时间和进入张开双臂的次数)。安定可增加张开双臂的百分比和张开双臂所花费的时间[18]，证实了其抗焦虑作用。本研究的发现表明，用分级剂量的荨麻属urens(100-400mg/kg)增加了进入张开双臂的次数和时间，表明具有抗焦虑作用，此外，这种焦虑样行为的减少与常规地西泮治疗后观察到的类似。
开阔的田野是一种非常流行的类似焦虑行为的动物模型。自1934年为客观测量大鼠情绪而设计的露天测试问世以来[19]，即把动物(通常是啮齿动物)置于一个未知的环境中，周围的墙壁会阻止动物逃跑[20.]。
事实上，在野外的焦虑行为是由两个因素引发的:个体测试(动物与它的社会群体分离)和广场恐怖症(因为竞技场相对于动物的繁殖或自然环境非常大)。
野外试验是为了研究勘探活动而设计的[21];在这个测试中，Mercurialis青蒿没有改变交叉数字(图3)，水提取物Mercurialis青蒿400 mg/kg体重的处理增加了对中心区域的偏好，增加了在装置中心区域的交叉次数、花费的时间和饲养时间(图4-6）;这些参数的增加可能表明有抗焦虑作用[22]。
大多数的功效草药是由于多种活性原理的结合，在本研究中从水提物中提取部分Mercurialis青蒿含有大量类黄酮化合物[7]而这些物质可能对抗焦虑活性的作用更大Mercurialis青蒿．最近，一些天然和人工合成的类黄酮被发现与苯二氮卓受体特异性和竞争性结合，并具有抗焦虑作用[23-25]。
总之，在此提供的数据加强了传统的使用和我们之前的研究methanolic提取的Mercurialis青蒿(16]，并指出，空中部分的水提取物Mercurialis青蒿具有类似抗焦虑的作用。因此,Mercurialis青蒿可能是一个有前途的候选人，未来发展为一种新的抗焦虑药物。进一步的药理学研究正在进行中，以确定植物提取物中负责显示活性的活性成分。了解这些提取物如何发挥作用的精确机制以及它们在哪些分子靶点上发挥作用应该会让我们了解如何开发更好的情绪辅助药物自然产品。
作者感谢拉巴特科学研究所的植物学家Amina Zellou Pr.， Hamid Khammar博士，Hanae Hosni, Amina Bounihi和Ghizlane Hajjaj，感谢他们对研究工作的鼓励和兴趣。
