婴儿出生第一周内的母乳抗体

摘要

随着哺乳时间的增加，母乳中IgA、IgM和IgG值在前12 h内显著升高，而在其他时段的优势下则显著下降。分娩0 ~ 12 h时，SD值分别为36.53±6.72、14.05±2.78和0.88±0.42 g/L;第7天，分别为4.23±0.61、0.37±0.03、0.13±0.07 g/L。此外，人乳免疫球蛋白(Igs)的总氨基酸水平在这段时间也有相同的趋势。

关键字

乳房初乳,牛奶免疫球蛋白(抗体)，氨基酸

简介

母乳喂养是一种独特的系统，为新生儿的健康生长和发育提供完美的食物，其中母乳是一种生物形式，含有大量具有特色的生物活性颗粒，可确保防止感染和炎症，这是由于免疫成熟，器官改善和健康的微生物定植。其中一些生物活性颗粒已被研究为一种新的治疗剂。因此，全世界的公共卫生建议提倡在婴儿出生后的前6个月进行纯母乳喂养。母乳的成分因饲料不同而不同，母亲之间的哺乳量增加[1，2］．母乳不仅为新生儿提供了完美的营养供应。此外，它是促进健康增长和发展的重要组成部分。因此，保护、支持和促进母乳喂养是一个公共卫生问题[3.］．

然而，初乳是雌性哺乳动物在新生儿出生后的头几天(1-3天)内从乳腺分泌的“前乳”生物液体。这种液体的成分与之后产生的牛奶截然不同。色泽淡黄色，粘稠，量少，营养价值高。它含有许多被认为对婴儿的免疫保护很重要的成分，如Igs，乳铁蛋白，生长因子和溶菌酶。免疫球蛋白，又称抗体，是存在于所有哺乳期物种的血液、初乳和乳汁中的血液分子，由人体天然免疫系统“浆细胞(白细胞)产生”产生。在人类中，某种程度的防御性被动免疫在怀孕期间转移到胎儿，其程度高于许多其他不同的哺乳动物，人类初乳进一步支持新生儿免疫的持续发展，而在许多不同的哺乳动物中，它没有免疫保护。许多研究表明，通过喂初乳可将细胞因子、Igs、生长因子、抗菌化合物和母体免疫细胞转移给新生儿[4-8］．此外，母乳是最适合新生儿的营养，其中含有丰富的蛋白质(包括Igs)、其他免疫分子、丰富的营养物质以及维生素和微量营养素，由于其显著的优势，可以满足婴儿在哺乳各阶段的所有需求[9］．

人类Igs家族包括五类，三大类，IgA, IgM和IgG，以及两大类，IgD和IgE。牛奶和人奶中的主要成分是IgG、IgM和IgA。初乳和乳中不同的Ig分数水平因物种而异，与血液相比往往是独特的。例如，在人的初乳、牛奶和血液中，IgA类分别含有约90%和15-20%的总Igs [10］．对于牛，Igs分为四种同型，IgG (IgG1和IgG₂)、IgA、IgM和IgE，基于它们所拥有的重链[10-14］．IgG、IgA和IgM分子在牛奶中含量较高，初乳中含量较高。IgG主要存在于初乳、乳汁和血液中，分别约占总Ig的80- 90%、60- 70%和90%，而在人乳中，IgA是主要的Ig类[15，16］．

本研究的目的是从人乳样品中沉淀免疫球蛋白，测定出生后0-0.5天、产后1、2、3、4、5、6、7天出生第一周人乳中IgA、IgM、IgG的浓度以及人乳中必需氨基酸和非必需氨基酸的浓度。

材料与方法

样品收集

进行这项研究是为了估计出生第一周内母乳中抗体的浓度。来自埃及Sharkia省Menia Al-kamh中心El-Sadeen村的6名哺乳期母亲的个人乳汁样本。在产后0-0.5天、1天、2天、3天、4天、5天、6天和7天采集初乳和乳汁样本。样品(约25-35 ml)在喂药结束时由人工监督表达，在消毒瓶中收集，并在冰盒中运输到实验室。所有样品在到达时立即保存在-20°C，并在分析前保持冷冻。

人乳免疫球蛋白的测定

样品制备

人乳样品以4000转/3分钟的速度离心脱脂。用一氮盐酸溶液将脱脂牛奶的pH值调整为4.6制备乳清，并以10000转/15米的速度离心去除酪蛋白沉积。用饱和硫酸铵溶液配以乳清样品[17］．硫酸铵的提取与蒸馏水多次变化在冰箱中透析24小时。透析提取液保持在-20℃进行分析。

单放射免疫扩散(srid)技术定量免疫球蛋白

SRID试剂盒(来自英国Binding site limited)用于测定分娩7天内人类初乳和牛奶样本中的Igs部分(IgA, IgM和IgG)。它主要来源于[18，19］．一些样品经稀释后使用;每个样品都放置在穿孔好的凝胶层中，盖紧盖子，平板保存在2-8˚C。重要的是，凝胶在培养过程中不能干燥。为了减少孵育期间的蒸发，建议必须将培养皿重新密封在箔袋中或储存在湿盒中(密封的塑料盒中含有潮湿的纸巾)。完全扩散的最小孵育时间为48小时(IgM为72小时)，然后测量扩散，并可以直接从RID参考表中读取，以计算提供给制造商手册的每个样品中的免疫球蛋白含量。

氨基酸分析

氨基酸水平的测定由[20.，21］．该分析在埃及国家研究中心中央服务单元完成，使用LC3000氨基酸分析仪(Eppendorf-Biotronik，德国)。该程序建立在强阳离子交换色谱分离氨基酸，然后茚三氢显色反应和570 nm光度检测。样品在110°C下用6n HCl在特氟龙盖的小瓶中水解24小时。在真空排除HCl后，剩余部分溶解在pH为2.2的柠檬酸锂缓冲液中。取20 μl上传至阳离子交换柱上(用相同的缓冲液预平衡)，然后依次向流速为0.2 ml/min, pH值为2.2、2.8、3.3、3.7的柱中加入柠檬酸四锂缓冲液。压力为0 ~ 150bar，流速为0.2 ml/m。缓冲压力为0 ~ 50bar，反应温度为130℃。

统计分析

采用SPSS version 20计算机程序对所得数据进行统计分析[22］．所有数据均以三次重复的均数±标准差(SD)表示，并采用单因素方差分析和最小显著性差异(LSD)进行比较。同一列中不同字母的值差异显著(p<0.01 ~ 0.05)。

结果与讨论

从6位哺乳母亲产后7天内获得的个别乳汁样本。在分娩0-0.5天、1、2、3、4、5、6、7天采集样品。SRID技术计算的人乳Igs。Igs浓度与沉淀抗原-抗体反应直径的关系可以建立。研究注意到，初乳中的Igs水平较高，在出生后的头几天急剧下降。随着哺乳时间的延长，Igs值有下降的趋势。这一发现与[23］．人乳样本中总Igs水平在产后0-0.5天、1天、2天和其他天之间变化。与其他日相比，0 ~ 0.5 d显著性最高。0 ~ 0.5 d Igs总水平平均为51.47±6.64 g/L，产后第1天下降36.88%(32.49±4.79 g/L)，产后第2天下降61.61%(19.76±4.47 g/L)。在分娩3、4、5、6、7 d时，平均总Igs水平分别为14.05±3.47、10.59±1.38、8.24±1.91、6.17±1.10和4.73±0.57 g/L。与产后0-0.5 d的总Igs相比，3、4、5、6、7 d的这些浓度分别下降了72.70、79.43、83.99、88.01和90.82%(表1)．这些结果与[的结果十分一致。14他指出，在从初乳过渡到成熟乳的过程中，Igs水平在产后的前五天急剧下降。本研究中总Igs均高于[24]即产后0、3、6天分别为33.66、9.77、1.73 g/L。成熟乳初乳中Igs含量分别为19.4 mg/ml和1.14 mg/ml [25］．

表1。哺乳第一周内人乳免疫球蛋白含量的平均变化。

分娩第一周0 ~ 0.5天人乳IgA值明显高于其他分娩日，0 ~ 0.5天人乳IgA值为36.53±6.72 g/L。产后第1天和第2天分别降至23.98±3.09和14.25±1.50 g/L。产后3天、4天、5天、6天、7天分别为10.16±2.06、8.57±1.23、6.71±1.84、5.24±1.11、4.23±0.61 g/L (表1而且图1 a-1c)．这些结果与[所得的结果一致。23-28］．然而，IgA主要存在于人的初乳和乳汁中，随着哺乳时间的增加，IgA的含量甚至会下降，其中Igs的个体差异是相当大的。相反，IgG是反刍动物奶中存在的主要免疫球蛋白类[29］．另一方面，在本研究中，它高于[23即在1^圣(1735毫克/100毫升)和4^th(100毫克/100毫升)的哺乳天数。产后0、3、6、14 d人乳样品IgA浓度范围分别为1.5 ~ 83.7、0.63 ~ 32.8、0.40 ~ 3.14、0.50 ~ 1.1 g/L，平均水平分别为32、9、1.45、0.75 g/L。在本研究中，IgA在第1天和第2天的平均浓度低于[30.]依次为33.5±25.8 g/L和21.1±18.0 g/L。在分娩3、4、5、6、7 d时则较高(分别为9.5±8.2、4.3±2.5、3.1±2.1、2.9±2.3、2.2±1.2 g/L)。初乳和乳中IgA含量中位数分别为17.4和1 mg/ml [25］．人初乳中IgA含量为1234 mg/100 ml [31］．西班牙女性初乳中IgA含量最高，其次是过渡乳，最后是成熟乳，均值分别为290.4±258.2、63.4±63.5和50.3±67.2 mg/dL，差异有统计学意义[32］．人初乳和乳中IgA水平分别为17.35和1 g/L，占总Igs的90和87% [29］．母乳样品中IgA平均水平(83.71±38.03 mg/dl)， IgM平均水平(29.95±15.73 mg/dl) [33］．

表1而且图2 a-2c为IgM中位水平，产后0 ~ 0.5天IgM水平(14.05±2.78 g/L)显著高于其他日，产后第1天降至7.99±3.04 g/L。产后2天、3天、4天、5天、6天、7天血糖水平逐渐下降，依次为5.14±2.96、3.59±1.86、1.77±1.76、1.32±1.18、0.76±0.28、0.37±0.03 g/L。分娩0 ~ 0.5、1、2、3、4、5、6、7天IgM分别占总Igs的28.56、24.58、26.01、25.57、16.73、15.99、12.28、7.77%。本研究中IgM的含量高于[23]即在泌乳第1天(19毫克/100毫升)和第4天(10毫克/100毫升)。此外，也高于[24]他们发现产后0、3、6和14天IgM的平均浓度分别为1.13、0.58、0.25和0.15 g/L。然而，他们发现在产后的最初几个小时和出生后的几天内，IgM含量逐渐下降。初乳和乳汁中IgM的浓度分别为1.6和0.10 mg/ml [25］．此外，人初乳和牛奶中IgM的浓度分别为1.59和0.10 g/L，占总Igs的比例分别为8.0和10% [29］．

最后，IgG含量在0-0.5天显著高于其他分娩日，为0.88±0.42 g/L，产后第1天和第2天依次下降为0.53±0.21和0.37±0.15 g/L。产后3天、4天、5天、6天、7天分别为0.29±0.13、0.25±0.14、0.22±0.12、0.17±0.08、0.13±0.07 g/L (表1而且图3 a-3c)．在我们的研究中，IgG的含量高于[23]在泌乳第1天(43毫克/100毫升)和第4天(4毫克/100毫升)。相比之下，它低于[24]发现产后0、3、6天IgG含量分别为0.53、0.19、0.03 g/L。此外，他们还发现IgG含量在分娩后的最初几个小时内和分娩后的几天内逐渐下降。玛雅印度妇女(产后1-4天)初乳IgG水平为0.063 mg/ ml [34］．人初乳中IgG含量为10 mg/100 ml [35］．

综上所述，在所有分析样本中，IgA是主要的免疫球蛋白，IgM是第二主要的免疫球蛋白，与IgA和IgM相比，牛奶中检测到的IgG含量较低(图4)．[的作品也是如此。23-26，28，29，36-38］．

氨基酸的测定对新生儿非常重要，因为蛋白质的营养价值主要取决于人体不能合成的必需氨基酸的含量。因此，本研究测定了产后第一周人类Igs的必需氨基酸和非必需氨基酸含量。人类初乳含有多种蛋白质，这些蛋白质说明并完全有助于营养质量的提高，并且是婴儿快速生长所需特殊氨基酸的重要来源[39］．它对出生后的生长非常重要，特别是丝氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸，它们提供了氨基酸总量中相当大的蛋白质。牛奶中含量高的谷氨酸可以作为氨基酸代谢的关键位置。另一方面，它转化为α-酮谷氨酸，可以进入三羧酸循环。通过分析母乳蛋白的氨基酸组成，发现其中约20%是谷氨酸，而最少的是组氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸[40］(表2)．

表2。产后第一周人乳Igs氨基酸值。

氨基酸、苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸和精氨酸浓度在泌乳期第一周逐渐下降，0 ~ 0.5和产后7天分别为0.78 ~ 0.17、1.33 ~ 0.19、0.56 ~ 0.16、1.88 ~ 0.50、1.00 ~ 0.21、2.42 ~ 0.65、0.37 ~ 0.07、1.12 ~ 0.23和1.22 ~ 0.20 mg/100 ml。蛋氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和脯氨酸在产后0 ~ 0.5天最高，产后第7天下降，但下降趋势不明显。产后0 ~ 0.5和第7天的值依次为蛋氨酸(0.30、0.09)、苯丙氨酸(1.47、0.49)、组氨酸(0.91、0.20)、赖氨酸(1.11、0.36)、天冬氨酸(1.22、0.35)、半胱氨酸(1.66、0.22)、酪氨酸(1.16、0.25)、脯氨酸(1.95、0.43)mg/100 ml。结果表明，各组氨基酸总量在0 ~ 0.5天最高，随泌乳期时间的推移显著下降，0 ~ 0.5、1、2、3、4、5、6、7天分别为20.47、12.32、11.74、10.09、9.65、8.40、7.36、4.78 mg/100 ml。

结论

而且，很明显，人乳Igs中以谷氨酸(非必需)为主，占总氨基酸的13-30%，含量为1.41 mg/100 ml。这一发现与[41他们发现母乳中谷氨酰胺和谷氨酸的含量很高，但不同母亲的含量差异很大。其中以亮氨酸(必需氨基酸)含量最高(9.72%)，平均为1.03 mg/100 ml。此外，牛奶中丝氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸和半胱氨酸含量在泌乳期前2周逐渐下降，而天冬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和蛋氨酸含量在泌乳期同期基本保持不变。另一方面，在泌乳早期，谷氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和赖氨酸的浓度增加[42］．

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