抗癌活性提取来自的叶子Careya Arborea老鼠

文摘

死亡率在全球范围内的最大原因之一是癌症。增加兴趣和草药的研究显示它的重要性在治疗许多疾病,包括癌症。在目前研究methanolic提取的抗癌活性的叶子Careya arborea Roxb DAL模型大鼠进行了评价。木豆细胞接种到老鼠后,治疗Careya arborea Roxb提取(200和400毫克/公斤)和标准药物5 -氟尿嘧啶(20毫克/公斤)持续了9天。评价药物反应的影响是由肿瘤的生长响应的研究,包括增加寿命,研究血液参数、生化估计,肝组织抗氧化试验和体外细胞毒性。实验结果显示,Careya arborea Roxb提取物具有显著的抗癌活性,可能是由于其细胞毒性和抗氧化性能。进一步的研究去发现的积极原则Careya arborea Roxb提取的抗癌活性。

关键字

Careya arborea、细胞毒性、细胞凋亡、DNA碎片

介绍

癌症是一种严重的临床问题,具有重大的社会和经济挑战医疗体系。尽管成像和分子诊断技术的提高,癌症继续影响全球数以百万计的人(1]。在许多国家,癌症死亡的第二大原因后心脏病(2]。肺癌、肠癌和胃癌是世界上五个最常见的癌症中,男性和女性(3]。在过去的几十年,癌症仍然是全球死亡率的最大原因,个人生活与癌症的数量不断扩大。因此,当前的药理研究的主要部分是参与抗癌药物设计定制以适应新的分子靶点4]。由于植物的巨大的倾向,合成各种结构多样的生物活性化合物,植物王国是一个潜在的化学成分与抗肿瘤和细胞毒性活性来源。传统v7arious植物长期以来一直用于治疗癌症的5,6,7,8]。工厂已经高度有效的常规药物的主要来源用于治疗多种癌症。Careya arboreaRoxb。家庭玉蕊科,被命名为“慢匹配树”。这是一棵大树遍布印度落叶森林和草原。茎皮的Careya arborea传统上用于治疗支气管炎,癫痫发作,收敛剂,解毒剂蛇毒和皮肤疾病。也用于治疗腹泻,痢疾和血腥的凳子和耳朵疼痛9]。树叶在溃疡是有用的。花是有用的治疗阴道分娩造成的破裂。水果是刺鼻的涩,芳香和是有用的在消化不良10]。然而,到目前为止没有抗癌活动报道从这种植物。因此,在本研究调查的甲醇提取物的抗肿瘤特性Careya arborea对道尔顿Roxb淋巴瘤腹水(DLA)诱导肿瘤的老鼠。

材料和方法

植物材料和提取的集合

收集新鲜的叶子从南部卡纳塔克邦和认证部门植物学。叶子用水洗净,晒干后。然后他们被切成小块。10 g的这些作品和50毫升甲醇提取了半个小时。按马克后,滤液(从今以后称为叶提取物)收集和集中1/4th体积和紧闭密封的玻璃容器和存储保存在远离阳光直射。实验通过使用同一套玻璃产品为所有类型的评估。

实验动物

白化Wistar鼠的体重200 - 225 g。动物卫生条件下保持和他们提供商业食物颗粒和自来水随意。清洁和卫生工作是做隔天。稻谷壳提供床上用品材料,每天都改变了。笼子里保持干净,早上9点到下午5点之间的所有实验。

急性毒性研究

健康的白化Wistar鼠的,饿一夜之间,被分成五组(n = 4)。集团I-IV口头给动物喂食Careya arboreaRoxb提取增加剂量水平的0.5,1.0,1.5和2.0 g / kg wt,而V组(治疗)作为控制。动物首先被观察连续2 h总值为任何行为的改变,神经系统和自主配置文件或任何其他症状的毒性和死亡率,间歇性地在接下来的6小时然后再24小时后,48 h和72 h对任何杀伤力或死亡。十分之一和五分之一的最大安全剂量选择提取进行急性毒性检测的实验(11]。

肿瘤细胞

国防后勤局细胞从Chittaranjan获得国家癌症研究所(CNCI),印度加尔各答。国防后勤局细胞保持在白化Wistar鼠,通过腹膜内(i.p)移植在每个9^th天(12]。腹水是收集的注射器和肿瘤细胞计数被施行纽鲍尔血细胞计数器和2×107细胞/毫升得到用生理盐水稀释(13]。肿瘤细胞悬液显示超过90%的可行性(检查台盼蓝染料(0.4%)排除试验)被用于移植。

试验协议

白化Wistar鼠体重,分成五组(n = 6)。国防后勤局细胞(2×106细胞/鼠)被注入了我。p每鼠除了对照组,每组。这是作为天0。台面式晶体管和标准药物(5 -氟尿嘧啶)治疗持续了随后的9天从第一天开始。十天,24小时后剂量6老鼠从每组,其余都牺牲的寿命研究肿瘤宿主。牺牲动物后,血液收集评估血液和生化参数。肝组织收集动物的抗氧化活性的评价。

实验的组织和设计如下(14]:

我:2%渐变- 80(5毫升/公斤b . wt i.p)。

第二组:国防后勤局(2 x10⁶渐变- 80细胞/鼠)+ 2%(5毫升/公斤b . wt i.p)。

第三组:国防后勤局(2 x10⁶细胞/老鼠)+台面式晶体管(200毫克/公斤b . wt i.p)。

第四组:国防后勤局(2 x10⁶细胞/老鼠)+台面式晶体管(400毫克/公斤b . wt i.p)。

V:国防后勤局(2 x10⁶细胞/鼠)+ 5 -氟尿嘧啶(20毫克/公斤b . wt i.p)。

抗肿瘤活性Careya arboreaRoxb提取被观察的变化评估以下参数。

肿瘤的生长响应

的影响Careya arboreaRoxb提取肿瘤生长和主机上的存活时间是检查通过研究以下参数如肿瘤体积,包装细胞体积、肿瘤细胞计数,可行的肿瘤细胞计数,不能存活的肿瘤细胞计数,平均生存时间和提高寿命。

肿瘤体积和包装细胞体积

老鼠解剖和腹水从腹腔收集。体积测量通过离心管毕业。包装细胞体积是由离心法苦行的流体在1000 rpm 5分钟。

肿瘤细胞计数

禁欲的流体被WBC吸管和稀释100倍。然后一滴细胞悬液稀释放在纽鲍尔计数室和细胞的数量在64年的小广场。

可行的和不能存活的肿瘤细胞计数

细胞被台盼蓝染色染料在生理盐水(0.4%)。的细胞不占用染料是可行的,那些带着污点是不能存活的。这些可行的和不能存活的细胞数。

百分比增加寿命

的影响Careya arboreaRoxb提取肿瘤生长被监控记录死亡率每天6周和增减百分比(% IMST)寿命进行了计算。增强的寿命25%以上被认为是有效的抗肿瘤反应(14,15]IMST(%) =((治疗组的平均存活时间/对照组的平均存活时间)1]X 100。平均存活时间(MST) =(第一次死亡+天的死亡)/ 2

血液研究

红细胞,白细胞计数和血红蛋白的估计是由标准程序从血液中获得intracardially [16,17]。

血红蛋白的评估

0.1毫升的血液肝素化摄于沙利的血红蛋白仪和稀释0.1 n HCl直到颜色与标准。然后阅读从量筒和表达为g / 100毫升的血液。

红细胞计数的

血液样本稀释(1:200)稀释液体使用Thoma吸管。剧烈的混合后,一滴合成混合物出院的盖玻片下纽鲍尔血细胞计数器和小体被允许接受3分钟。红细胞的数量80个小方格是光显微镜下计数。1 cumm稀释血液中细胞的数量计算。

白细胞的总数

血液稀释液体稀释1:20。Neuberger血细胞计数器满心混合物和细胞的数量在四个角落块(每一块细分为16平方)决心和血白细胞总数/ cumm计算。

生化估计

从动物的血液样本收集intracardially和血清的生化估计分离血清谷氨酸丙酮酸氨基转移酶(血糖),血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶(血清)18)和碱性磷酸酶(ALP) (19]。

在活的有机体内抗氧化试验

与肝组织抗氧化试验进行评估是由测量脂质过氧化水平(20.)和酶(过氧化氢酶;猫)[21)和非酶的抗氧化系统(减少谷胱甘肽;谷胱甘肽)[22)测量。

细胞毒性的活动

股票HEp-2细胞,RD和州立细胞株培养rpmi - 1640和羊血清DMEM补充与10%,青霉素(100国际单位/毫升)和链霉素(100μg /毫升)在湿润的气氛中5%的有限公司₂在37°C到汇合的。这些细胞被分离与0.2%胰蛋白酶,0.02% EDTA在PBS。细胞毒性试验是通过添加0.1毫升的包含10000个细胞,每个细胞悬液井96井microtitre板(Tarson)和新鲜培养基含有不同浓度的提取液添加在24 h后播种。控制细胞孵化没有测试提取和DMSO(溶剂)。非常小的% DMSO出现在井(最大0.2%)被证明不影响实验。microtitre板块在37°C湿润孵化器孵化有限公司为5%₂在一段时间内3天。12井被用于每个提取物的浓度。这些细胞被观察到在不同的时间间隔在孵化期间提取的存在。细胞的生存能力是由标准MTT和SRB试验方法(23]。

DLA-Induced实体瘤的研究

国防后勤局细胞/鼠标的右后肢注射皮下注射小鼠和分成4组每组6只老鼠。所有的治疗都是在国防后勤局肿瘤接种后24 h ip,继续每天一次14天。右后肢的初始直径指出使用游标卡尺。从第7天开始,肿瘤直径easured每隔两天并记录34天。肿瘤体积是由以下公式计算:V = 4 / 3 1 2 r, r 1和2在肿瘤的半径在两个不同的飞机24]。

统计分析

值提出了均值±S.E.M.数据统计评估由单向方差分析(方差分析)其次是Tukey-Kramer多重比较测试。P < 0.05被认为是具有统计学意义。

结果

急性毒性研究中,Careya arboreaRoxb提取没有任何毒性作用的剂量2 g / kg wt,因此200和400毫克/公斤b wt被低和高剂量的Careya arboreaRoxb提取实验。

在肿瘤生长的情况下反应的研究中,Careya arboreaRoxb提取物治疗显著降低肿瘤体积,包装细胞体积和活细胞计数的国防后勤局控制老鼠相比,虽然不能存活的细胞计数被发现在治疗组显著增加。怎么这些研究结果进行了综述。Table.2描绘的影响Careya arboreaRoxb提取在延长寿命。在寿命研究中,对照组的平均生存时间为10.5天,而它17岁和23天低剂量和高剂量的Careya arboreaRoxb提取物治疗组。平均存活时间标准治疗组药物研究者用29天。增加在低剂量和高剂量的寿命Careya arboreaRoxb提取物治疗组(增加38.46%和69.23%)以及标准药物治疗组(74.36%)被发现是重要的国防后勤局控制老鼠和它反映了提取物的抗肿瘤特性Careya arboreaRoxb提取。管理Careya arboreaRoxb提取白细胞计数显著降低在第三和第四组对国防后勤局的对照组。红细胞计数和血红蛋白含量,降低国防后勤局接种后,被发现显著恢复到正常水平的对待动物Careya arboreaRoxb提取200和400毫克/公斤wt,以及标准药物研究者用。结果(图1)的保护作用Careya arboreaRoxb提取血液国防后勤局轴承的老鼠。

生化估计见Table.3表明肝脏功能酶的高水平在国防后勤局治疗组血清对正常动物,虽然这些显著降低至接近正常价值的药物治疗组。

图2说明了的影响Careya arboreaRoxb提取国防后勤局轴承抗氧化状态的老鼠。在肝组织脂质过氧化水平(表示为纳米脂质过氧化/毫克的湿肝组织)在国防后勤局控制显著增加大鼠相比,正常对照组。经过政府的Careya arboreaRoxb提取(200和400毫克/公斤b.wt),脂质过氧化水平和国防后勤局控制老鼠相比显著降低。同样,谷胱甘肽水平降低是谷胱甘肽水平降低在国防后勤局对照组恢复接近正常的治疗价值Careya arboreaRoxb提取以及研究者用。在国防后勤局控制大鼠有抗氧化剂过氧化氢酶的酶活性明显降低,大大提高了治疗Careya arboreaRoxb提取,观察到在标准药物治疗组小鼠V。

值意味着±SEM。每组n = 6。药物治疗是9天完成的。号国防后勤局对照组和正常对照组,p < 0.01;b组治疗对EAC对照组,* p < 0.01;的意义被施行了单向的方差分析后跟Tukey-Kramer多重比较测试

讨论

癌症是不受控制的肿瘤细胞扩散。本研究进行调查的抗癌潜力Careya arborea对国防后勤局Roxb提取轴承老鼠。国防后勤局与咄咄逼人的行为是一个非常快速增长的癌(25]。它能在几乎所有的大鼠生长。腹水对肿瘤的生长至关重要,因为这对肿瘤细胞构成直接的营养来源(26]。Careya arboreaRoxb提取物治疗显著降低肿瘤体积可能通过降低腹水的营养液体体积。此外,包装细胞体积和可行的国防后勤局在腹膜肿瘤细胞的数量显著降低小鼠治疗Careya arboreaRoxb提取肿瘤对照组相比。这些结果可能表明一个直接细胞毒性的影响Careya arboreaRoxb提取物对肿瘤细胞或当地一个间接效应,这可能包括巨噬细胞激活和抑制血管通透性。

延长寿命的动物是一个可靠的标准来判断任何抗癌药物的价值27]。增加小鼠肿瘤轴承的寿命Careya arboreaRoxb提取物治疗是一个积极的结果,支持的抗肿瘤效应Careya arboreaRoxb提取。

在癌症化疗的主要问题是myelosuppression和贫血28,29日]。贫血中遇到肿瘤小鼠轴承主要是由于红细胞或血红蛋白的比例减少,这可能会出现因缺铁或由于溶血或脊髓条件(30.]。治疗Careya arboreaRoxb提取带回了血红蛋白含量、红细胞和白细胞细胞计数附近正常价值。这表明Careya arboreaRoxb提取heamopoietic系统具有保护作用。

显著升高的血清水平,血糖,高山反映了肝细胞损害引起的数量的代理。生化测量这些参数在一定程度上表明,肝毒性有关9天后接种木豆。治疗Careya arboreaRoxb提取恢复提高生化参数或多或少的正常范围,表明肿瘤细胞诱导肝毒性的保护Careya arboreaRoxb提取。

rom之间的不平衡(活性氧代谢产物)和抗氧化防御系统导致的氧化应激,解除细胞功能导致的各种病理条件包括癌症(31日,32]。氧化应激可能导致损害的脂质等大分子,可以诱导脂质过氧化反应(33]。在国防后勤局轴承大鼠肝脏脂质过氧化水平显著升高,然而这是降低到接近正常水平Careya arboreaRoxb提取物治疗组动物。这反映了自由基的产量下降和随后的减少氧化应激,这种疾病的主要危险因素之一。谷胱甘肽,一种肿瘤的有效抑制剂过程中起着重要的作用作为一种内源性抗氧化系统发现特别是在高度集中在肝脏和已知保护过程中的关键功能(34]。减少谷胱甘肽的水平是减少癌症轴承老鼠可能是由于其利用过多的自由基。治疗Careya arboreaRoxb提取被发现会增加肝脏中谷胱甘肽含量比国防后勤局控制动物。

另一方面,自由基清除酶过氧化氢酶存在于所有的氧代谢细胞,其功能是提供一个直接防御潜在的破坏性超氧化物和过氧化氢的反应活性。猫活动的抑制肿瘤生长的结果也被报道(35]。观察类似的发现在目前的调查与国防后勤局轴承老鼠。的管理Careya arboreaRoxb提取物在不同剂量增加猫水平以剂量依赖的方式,以及恢复的脂质过氧化和谷胱甘肽含量接近正常显示的抗氧化和自由基清除财产Careya arboreaRoxb提取。

初步的植物化学的研究表明类黄酮的存在,多酚、皂苷、蛋白质和碳水化合物Careya arboreaRoxb提取。许多这样的化合物是具有强大的抗肿瘤特性。因此,强有力的抗癌活性Careya arboreaRoxb提取可能是由于这些植物成份。进一步的研究正在进行中在我们的实验室发现的生物活性原理(s)中提取的抗癌活性。

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