枸杞生果乙醇提取物对小鼠的止泻作用

摘要

本实验研究了蓖麻油中未成熟柑橘醇提物(EEAM)、前列腺素E2 (PGE2)、5-羟色胺(5-HT)和乙醇诱导小鼠腹泻的抗腹泻活性。高剂量EEAM (800mg/kg)完全阻止腹泻，低剂量EEAM(200和400mg/kg)显著增加腹泻诱导时间，减少蓖麻油致腹泻湿粪便的数量和重量。高剂量的EEAM(400和800 mg/kg)显著增加了PGE2、5-HT和碳乙醇诱导腹泻的诱导时间，减少了湿粪便的数量和重量，而低剂量对这些参数没有影响。

关键字

蜜瓜，蓖麻油，甘油三酯，5-羟色胺，PGE2，抗腹泻活性

介绍

海葵通常被称为Bael/Bilva，属于芸香科，由于其各种药用特性，在印度本土医学体系中被广泛使用[1]关于蜜瓜各种提取物的生物活性，包括抗糖尿病的研究已经被广泛报道[2]，抗溃疡药[3.]，抗癌[4]，抗高脂血症[5]，抗精子发生[6]，据报道，在蓖麻油引起的腹泻中，埃格尔甜瓜具有抗腹泻作用[7]，分泌性腹泻是一种常见的急性腹泻，表现为由于液体和电解质流失过多而导致的脱水。多种毒素引起的腹泻是通过多种内源性分泌物的释放介导的，包括5-HT、PGE2和胆碱能途径[8]。蜜瓜抗各种促泌剂引起的腹泻活性报道很少。因此，本研究旨在评价蜜瓜醇提物对不同促泻剂致腹泻小鼠的抗腹泻作用。

材料与方法

化学物质

蓖麻油IP (Oom Laboratories, Shimoga, Karnataka)， Carbachol (Merck Mumbai)，前列腺素E2和5-羟色胺(Cayman chemical company, Michigan, USA)。

植物材料

在7月至9月期间，从卡纳塔克邦的贝拉里区收集了未成熟的埃格尔蜜橘果实。该植物材料经Smt植物学系Govindraj博士进行了分类鉴定。印度卡纳塔克邦，贝拉里，A.S.M.女子学院。

粗提物的制备

新鲜收集的未成熟的埃格尔蜜瓜在自来水下彻底清洗，以去除附着的杂质。将果实切碎，果肉、果皮和种子在室温下阴凉处干燥，并磨成粗粉(#40)。药物粉末状(100g)用16份乙醇(90%)浸泡一周后过滤。得到的萃取物在减压旋转真空蒸发器中浓缩，得到红棕色的半固体物质。相对于风干植物材料，提取液得率为12.64% w/w。提取液低温保存(4 ~ 80℃)，用于植物化学、毒理学和药理学研究。

植物化学的筛选

为了确定植物成分的存在，使用特定试剂对提取物进行了初步的植物化学研究[9]。

实验动物

体重25-30 g的瑞士白化小鼠均购自M/S Venkateshwara enterprises, Bangalore。它们被安置在聚丙烯笼中，并在标准实验室条件下维持(12:12 h明暗循环;温度25±20℃，相对湿度55±10%)。用标准饲料和水随意喂养动物。每个实验组由8只动物组成，它们被关在不同的笼子里。在实验研究之前，这些动物被禁食过夜，并可以自由饮水。

研究方案由机构动物伦理委员会批准，实验按照动物实验控制和监督委员会(CPCSEA)的现行指导方针进行[10]。

急性毒性(LD50)研究

根据OECD指南No.423，采用固定剂量法对白化病小鼠进行了夜间禁食的急性毒性研究。在给药后的前3小时连续观察给药动物的死亡率和毒性症状，在前24小时定期观察，然后每天观察，共14天[11]。

抗腹泻活动评价

蓖麻油引起腹泻

Awouters等人报道的方法[12在本研究中使用了经过修改的。最初通过口服蓖麻油0.3ml筛选瑞士白化小鼠(24-30 g)，只有出现腹泻的小鼠才被选中进行最后的实验。在实验前，老鼠被剥夺了一夜的食物，但可以自由饮水。这些动物被分为对照组和试验组，每组8只。

每只动物被放置在一个单独的笼子里，笼子的地板上放着吸墨纸。口服蓖麻油0.3ml / o引起腹泻。各组动物在蓖麻油给药前30分钟分别给药200、400和800 mg/kg的载药或甜瓜乙醇提取物。在4小时的观察期间，记录动物腹泻的发生情况、湿便的数量和重量，并用于评估抗腹泻活性。

PGE2、5-羟色胺和碳乙醇诱导腹泻

不同组小鼠分别给予PGE2 (0.2mg/kg i.p)、5-羟色胺(1mg/kg i.p)或甲醇(0.5 mg/kg i.p)诱导腹泻[13，14，15]。在分别给药PGE2、5-HT或苯酚后约7、8或14分钟观察到腹泻。在给药前1小时口服EEAM (200,400,800mg/kg)或车辆。为了评估抗腹泻活性，在2小时内记录诱导腹泻的时间、湿粪便的总数和重量。

统计分析

结果用mean±SEM (n=8)表示。对照值与试验值的统计差异采用单因素方差分析(ANOVA)， Dunnet’s t检验(Graph Pad软件)。P值< 0.05为显著性。

结果与讨论

经初步植物化学分析，蜜瓜醇提物中含有单宁、甾体苷、黄酮类、生物碱、香豆素和萜类化合物。采用瑞士白化病小鼠进行了急性毒性研究，以评估毒性并确定试验提取物的最小致死剂量。毒性研究采用OECD指南No.423的固定剂量法。研究发现，在2000mg /kg体重剂量下，没有观察到死亡和行为变化。因此，选择200mg /kg、400mg /kg和800mg /kg的p.o提取物剂量来筛选抗腹泻活性。

剂量为800mg/kg的EEAM具有显著的抗腹泻作用，组中没有任何动物出现腹泻(结果未显示)。另外两种剂量的提取物(200mg和400mg/kg)在4小时的观察期间显著延长了诱导腹泻的时间，并减少了湿粪便的数量和总重量(表1）

较高试验剂量(400和800mg/kg)的EEAM显著延长了三种催泻剂诱导腹泻的时间，并显著降低了观察期内2 h的粪便数量和总重量，而较低剂量(200mg/kg)的EEAM对三种催泻剂诱导腹泻的参数没有影响(表2)。分泌性腹泻是由于肠道分泌增加或肠道对液体和电解质的吸收减少或这些机制的结合而发生的[16]。各种肠毒素引起的腹泻和炎症性腹泻一般被认为是通过改变肠道吸收和增加肠道分泌来介导的。口服蓖麻油释放蓖麻油酸，引起粘膜液和电解质运输的改变，导致高分泌反应和腹泻[17，18]。此外，蓖麻油酸诱导的小肠水和电解质分泌是通过释放PGE2介导的。在本研究中，EEAM不仅可以预防蓖麻油引起的腹泻，还可以降低PGE2引起的腹泻的严重程度。（表3)。因此，可以推测，艾格糖可能改变PGE2诱导的分泌过程，从而预防腹泻。

在本研究中，EEAM通过延长腹泻诱导时间以及减少5-HT诱导的湿粪便数量和重量来预防5-HT诱导腹泻的严重程度。（表4)。在本研究中，EEAM在乙醇引起的腹泻中也有类似的作用。据报道，5-羟色胺对肠细胞具有类似乙酰胆碱的作用[19]并刺激固有层的白细胞释放前列腺素[20.]。许多细胞内介质如环AMP, cGMP, Ca2+参与调节水和电解质在肠腔膜上的运动。肠道中5-HT、pg和乙酰胆碱的分泌/抗吸收刺激是通过细胞内Ca2+的增加和PKC的激活介导的。本研究结果表明，提取物可能通过调节Ca2+激活的分泌/抗吸收刺激来发挥其作用。然而，需要进一步的研究来确定抗腹泻作用的机制。

黄酮类化合物和萜类化合物衍生物可抑制类类固醇和前列腺素的释放，从而抑制由蓖麻油引起的运动和分泌[21]。EEAM中黄酮类化合物和萜类化合物的存在可能有助于本研究中观察到的抗腹泻作用，然而，涉及EEAM活性原理的分离和其抗腹泻活性评估的进一步研究可能支持这些发现。

结论

总之，我们的研究结果表明，EEAM对各种分泌剂引起的腹泻有效，并为其作为抗腹泻剂的传统用途提供了理论依据。

参考文献

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