用甲醇溶液研究淡水藻类的抗氧化活性

摘要

绿藻是一种具有适应能力和代谢灵活性的绿色淡水鞭毛藻类，在许多研究活动中被用作模式生物。在本研究中，采用甲醇溶液和自由基清除剂DPPH研究了绿藻的抗氧化性能。本研究的结果表明，随着提取液浓度的增加，所占的百分比抗氧化剂活动增加了。本研究为进一步深入研究青霉属植物的抗氧化能力和功能价值提供了有益的信息制药研究。

关键字

抗氧化剂、DPPH、眼虫自由基，清除剂，氧化。

简介

氧化是一种化学反应，涉及电子的转移电子富电子到缺乏电子的实体。缺乏电子分子被称为氧化剂或氧化剂。抗氧化剂是一种能够阻止或减缓其他分子氧化的物质。一般来说,一个抗氧化剂可以保护金属毒性通过捕获自由基从而终止链式反应，通过螯合金属离子并阻止与活性氧的反应，或通过螯合金属并将其保持在氧化还原状态，从而导致其不能减少分子氧[1］．抗氧化剂是天然的和人造的化学物质，可以防止或减缓细胞损伤。抗氧化剂实际上不是一种物质，它是任何化合物的一种行为，可以提供电子并抵消自由基。自由基可以定义为包含一个或多个未配对电子的分子或分子片段[2］．虽然这个定义没有明确指出未成对电子存在的位置，但它仍然是首选的，因为它使我们能够将大多数过渡金属离子归类为自由基，从而更好地理解氧和活性金属离子之间的密切相互关系。由于这个未配对电子的存在，这些自由基赋予了相当程度的反应性。氧化反应可以产生自由基;这些自由基可以像多米诺骨牌一样引发连锁反应。它们的主要危险来自于当它们与重要的细胞成分如DNA或细胞膜发生反应时所造成的损害。当链式反应在细胞中发生时，它会对细胞造成损害或死亡。抗氧化剂通过去除自由基中间体来终止这些链式反应，并抑制其他氧化反应。类胡萝卜素脂肪酸是两种非酶类物质，能够保护生物体免受氧化损伤[3.］．以甲醇为萃取溶剂抑制细胞化合物对DPPH自由基的清除。只有甲醇溶性物质，如类胡萝卜素，脂肪酸参与了这个清除过程。自由基导致人类一百多种疾病，包括动脉粥样硬化、关节炎、多种组织缺血再灌注损伤、中枢神经系统损伤、胃炎、癌症和艾滋病[4，5］．合成抗氧化剂，如丁基羟基茴香醚、二叔丁基BHT、没食子酸酯等，已被怀疑对健康造成负面影响，因此已对其应用加以限制[6，7］．考虑到合成产品的有害影响，近年来，天然抗氧化剂及其与健康益处的关系受到了广泛关注[8］．有几种方法可以评估几种化合物的抗氧化活性。DPPH稳定自由基分光光度法清除自由基是一种简便、流行、快速、灵敏的植物提取物抗氧化清除方法。

藻类是公认的天然着色剂的优良来源保健品由于其生产的可持续性和可再生性质，预计它们将超过合成材料和其他自然资源[9］．眼虫是受欢迎的鞭毛实验室吗微生物见于淡水环境[10］．它是最简单最早的真核细胞之一。不同种类的眼虫已筛选出它们生产的多种抗氧化化合物如ß-胡萝卜素;维生素C和维生素E，可提供很有前途的膳食补充剂[11］．最近的研究表明，许多藻类，如杜氏藻、小球藻、衣藻、色单胞藻、螺旋藻和绿藻因其显著的抗氧化特性而引起广泛关注[12，13］．鉴于藻类具有巨大的药用潜力，本研究初步分析了绿色鞭毛虫藻类清除自由基的活性眼虫物种。

材料与方法

盲蝽属的种类集合

Euglena sp.采自Dargakona地区(图1)，位于阿萨姆邦卡沙尔区的阿萨姆大学校园附近。该藻样经标准键[14-16］．

样品制备

藻类在淡水中被彻底清洗以去除其他污染。然后立即将样品装入有小孔的聚乙烯袋中，漏出多余的水滴，带到实验室，在室温下遮阳干燥。

样品有机提取物的制备

将粉末(100 g)与1000ml甲醇:水(7:3)用磁力搅拌器混合15小时，然后在2850×g离心得到上清液。将沉淀的颗粒与1000毫升新鲜溶剂混合，重复该过程。两个相的上清液在旋转蒸发器中进行混合和减压浓缩，然后升华干燥．冻干70%甲醇提取物眼虫sp.保存在-20°C以备将来使用。

自由基清除活性(DPPH)测定

采用稳定的1,1-二苯基-2-苦味基肼自由基(DPPH)测定提取物的自由基清除活性。DPPH自由基性质稳定，常用于测定天然化合物的自由基清除活性。DPPH溶液与甲醇和抗坏血酸DPPH与甲醇和眼虫以sp提取物为样品，计算抑菌率。Mahakunakorn等人通过DPPH(1,1-二苯基-2-苦酰肼)清除试验证实了提取物抗氧化能力的补充研究，[17稍加修改。将不同浓度(0 ~ 100 μg/ml)的提取物和标准抗坏血酸与等体积甲醇混合。然后加入DPPH溶液50 μl (1 mM)，充分搅拌。将得到的溶液静置2分钟，然后在517 nm处测量OD值。测量重复6组。根据对照和试验样品的值计算清除率。

结果与讨论

数千年来，大自然一直是药物的来源，从自然来源中分离出的现代药物数量惊人[18］．抗氧化剂能够在自由基有害之前将其中和生理的效果。图2显示了眼虫B.在微观尺度和C.显示提取样品。关于藻类的生物活性及其物质已进行了多项研究，这些物质可能是天然抗氧化剂的潜在丰富来源[19］．初步的抗氧化研究表明，其具有一定的抗氧化性能眼虫sp。图3)．结果表明，随着浓度的增加，抗氧化性能的百分比眼虫种类增加。10 μl时抑制作用最小，为11.55%;70 μl时清除率最高，为66.89%。自由基形式的DPPH在517 nm处吸收，但在被抗氧化剂还原后，由于形成非自由基形式的DPPH - h，其吸收下降[20.］．因此，在供氢抗氧化剂的存在下，自由基清除活性可以通过DPPH溶液吸光度的降低来监测。眼虫对DPPH自由基具有良好的剂量依赖清除活性(图4)，但低于标准抗坏血酸．的集成电路₅₀的值眼虫提取物和标准抗坏血酸分别为147.05±1.81 mg/ml和5.29±0.28 81 mg/ml (表1)．高水平的抗氧化性能眼虫物种的贡献在于它含有类胡萝卜素。表2示类胡萝卜素的浓度眼虫类胡萝卜素的最高浓度为100 μg/ml，为12.21 μg/ml。类胡萝卜素是一种有效的自由基清除剂和单线态氧猝灭剂[21］．已知类胡萝卜素具有抗氧化特性[22-24］．类胡萝卜素的光谱眼虫sp让步了图5．类胡萝卜素的抗氧化活性主要是由于共轭双键结构使未配对电子离域的能力[25］．这主要是由于α-胡萝卜素具有良好的物理猝灭单线态氧而不被降解的能力，以及α-胡萝卜素与自由基如过氧基、羟基和自由基的化学反应性超氧化物自由基．在抗氧化剂存在的情况下，DPPH自由基获得一个或多个电子，吸光度下降[26］．抗氧化活性眼虫物种可能是由于存在各种植物化学物质，如碳水化合物，脂肪酸，氨基酸等。DPPH作为一种稳定的自由基被广泛用于评价还原性物质，是一种用于研究组分自由基清除活性的有用试剂[27-29］．本研究得到的结果表明，这种单细胞眼虫被证明是一种具有大量药用价值的生物活性化合物的宝贵宝库。

表1:70%乙醇提取物和标准参比化合物自由基清除能力的比较，其中值以mg/ml表示

表2:不同剂量下丁香中类胡萝卜素的浓度，均以μg/ml表示。

结论

目前的信息可以用于仔细审查药物研究策略的选择眼虫专门研究医学科学。在体外分析表明眼虫提取物是一种很有前途的天然抗氧化剂来源，有助于防止各种氧化应激的进展，从而有利于预防各种人类疾病。

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