Pyrogollol的氧化脂质氧化的衍生品单膜囊泡和大鼠血浆

文摘

两亲的焦棓酸脂质衍生物(PD)含有不同碳原子烷基链长度,包括- h, -C5H11, -C10H21 -C15H31, -C20H41在苯环的c - 4位置被合成。4-Decylpyrogallol显示联系人雷竞技网页版超敏反应,但是其他化合物不引起过敏反应,当老鼠的耳朵敏感的化合物每日10天。PDs包含超过五个碳原子的烷基链表现出高亲油性n-octanol /水分区实验和高脂质体膜的结合。此外,PDs显示1日自由基清除活性更高,比α-tocopherol 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 3-pentylcatechol。PDs有效抑制脂质过氧化的蛋黄磷脂酰胆碱大单膜泡脂质体诱导脂质和aqueous-soluble激进的发电机。此外,PDs减毒胆甾醇酯氢过氧化物的形成引起的大鼠血浆铜离子。这些结果表明,non-allergenic PDs可以作为有效的抗氧化剂对细胞和亚细胞的膜的氧化损伤。

关键字

两亲的焦棓酸衍生品、抗氧化剂、大单膜泡脂质体,血浆,接触过敏,酚类脂质雷竞技网页版

介绍

漆的漆酚主要组件在sap树(采用verniciflua斯托克斯,Anacardiaceae),已被用作食品和预防胃疾病的草药,炎性疾病和各种癌症在韩国(1- - - - - -4),但他们因为接触过敏(雷竞技网页版5,6]。漆酚由邻苯二酚结构,15到17个碳原子的烷基侧链苯环的颈- 3的位置,和各自不同的生物效应,如抗氧化剂7,8),抗菌9,10和抗癌11]活动的报告。此外,漆酚产生的各种生物效应细胞和亚细胞的膜由于两亲的属性和高速率的合并膜(12]。然而,漆酚诱导的主要过敏原接触过敏,即使这些化合物有良好的生物活性雷竞技网页版8]。

在先前的研究中,我们化学合成漆酚衍生品,拥有不同的烷基侧链的长度(12]。的一些合成漆酚衍生品不诱发过敏性接触,而3-decylcatechol和3-pentadecylcatechol,由c雷竞技网页版₁₀H₂₁和- c₁₅H_31日烷基侧链,引起严重的过敏反应。此外,非过敏漆酚衍生物,3-pentylcatechol 3-eicosylcatechol,显示出高度的亲油性和脂质体膜整合的速度,他们有效地回收自由基和抑制脂质过氧化脂质体膜和在大鼠血浆。

酚酸等酚类化合物和黄酮类化合物,广泛分布于食物材料,包括谷物,蔬菜,和水果,有很高的抗氧化活动(13,14]。酚羟基的数目和位置与抗氧化活动相关联,和儿茶酚和焦棓酸结构是重要的活跃的网站(15,16]。特别是,焦棓酸结构更有效地进行清除自由基和金属离子螯合物比苯邻二酚结构17,18]。此外,与漆酚的结构相似,酚类脂质,如anacardic酸,cardanol、间苯二酚,gingkolic酸在植物(19]。这些化合物表现出抗氧化,抗癌和抗菌活动,因为他们的高亲油性和膜的结合率19,20.]。因此,我们假设焦棓酸衍生物,具有不同的烷基侧链的长度,可以更有效地抑制氧化损伤细胞和细胞内的膜相比,漆酚衍生物,苯邻二酚结构。

在目前的研究中,我们化学合成焦棓酸脂质衍生物(PDs),含有不同长度的烷基侧链苯环的c - 4位置。接触过敏雷竞技网页版的PDs - 10在老鼠评估。我们也测量了PDs的自由基清除活性使用1 - 10,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)激进和测试他们的抑制性影响磷脂酰胆碱的脂质过氧化作用大单膜囊泡(PhC LUV)在大鼠血浆。

结果

PD合成

trimethylated PDs 2−5合成的lithiation butyllithium 1-bromoalkanes (n-BuLi)和烷基化,具有不同的碳长度,如C₅C₁₀C₁₅C_20.(12]。原油trimethylated PD产品被硅胶柱纯化色谱法(甲苯)。确定结构2 (1、2、3-tri-O-methyl-4-pentylpyrogallol), 3 (1、2、3-tri-O-methyl - 4-decylpyrogallol), 4 (1、2、3-tri-O-methyl-4-petadecylpyrogallol)和5 (1、2、3-tri-O-methyl-4-eicosylpyrogallol),利用NMR和MS分析(图1)。PDs 7 - 10也从trimethylated PDs合成2 - 5通过脱甲基三溴化硼(BBr)₃)[12]。原油PD产品在硅胶柱层析法纯化使用流动相的正己烷/醚= 1:1.5 (v / v)。结构被确定是7 (3-pentylpyrogallol) 8 (3-decylpyrogallol), 9 (3-pentadecylpyrogallol)和10 (3-eicosylpyrogallol) NMR和MS光谱数据(图1)。

在老鼠雷竞技网页版的耳朵PD接触过敏

老鼠敏化后(1厘米²)的左耳EtOH PDs的解决方案(3μmol)为10天(每天2 - 5和7 - 1012]。所示图2治疗8,由c₁₀H₂₁的烷基侧链的c - 4位置焦棓酸结构,造成了严重的红斑和肿胀在老鼠耳朵的皮肤。相比之下,其他治疗PDs 7, 9和10没有原因红斑或鼠耳肿胀。此外,没有trimethylated PDs 2 - 5诱发接触过敏无论烷基侧链的长度。雷竞技网页版

PDs对Hypersensitivity-related血液的影响因素

雷竞技网页版接触hypersensitivity-related生物标记物在治疗后大鼠血液中有两个trimethylated PDs 3和4和4个PDs 7 - 10天每天测定。化合物8显示明显高于白细胞数比对照组(p < 0.05) (图3一)。白细胞的数量略有不同的老鼠接受其他化合物3,4,7,9,10,尽管这些值没有显著不同的控制。老鼠接受7中的白细胞数和9略高于对照组。的小鼠白细胞的数量与3、4、10比的控制相对较低。这些白血球数量模式是相似的嗜伊红的(图3 b)和中性粒细胞(图3 c)数字以及血清组胺水平(图3 d)。此外,大鼠血清IgE水平处理8明显高于其他化合物3、4、7、9、10和对照组(p < 0.05) (图3 e)。大鼠血清IgE水平处理3、4、7、9和10个类似级别的控制,没有显著差异。hypersensitivity-related生物标记的模式分析了研究与接触过敏试验的结果一致(雷竞技网页版图2)。

PD行为n-Octanol /水分区系统

焦棓酸衍生品1 - 10,4-pentylcatechol (PC),抗坏血酸(AsA)和α-tocppherol(α-Toc)分区n-octanol /水系统,及其内容被ODS-HPLC确定两个阶段分析(21]。所示图4,大多数的PDs 1 - 5和7 - 10,除了6,发现在n-octanol阶段,虽然他们的分区系数是不同的。这些模式是类似于α-Toc和PC的结果。因此,PDs 6 - 10似乎具有亲脂性的性质类似于α-Toc和电脑。然而,PDs 6 - 10显示内容在n-octanol阶段相对低于trimethylated PDs 1 - 5,α-Toc,电脑。因此,PDs 6 - 10有亲脂性的属性略低于其他化合物1 - 6和电脑。PDs的内容在n-octanol阶段烷基侧链长度的增加而延伸。

PD本地化PhC爱超滤系统

PDs的亲和力磷脂膜检查6 - 10超滤使用PhC LUV系统(22]。发现了少量的大多数PDs 6 - 10滤液,表明这些化合物对PhC爱有很强的亲和力。滤液中PDs的内容与烷基侧链长度的增加减少。拥有超过15-carbon化合物9和10原子烷基侧链的焦棓酸结构,显示更高速率的掺入比α-Toc PhC爱和电脑。增长结合的化合物,具有十原子烷基侧链的焦棓酸结构,类似于电脑,由五个碳原子的烷基侧链苯邻二酚(图5)。化合物6和7也显示相当大的合并为PhC爱,虽然他们的亲和力略低于其他PDs 8 - 10, PC,α-Toc。

PD的DPPH自由基清除活性

的自由基清除活性焦棓酸衍生品1 - 10,PC,α-Toc积极利用DPPH控制进行评估。所示图6,trimethylated PDs 1 - 5不清除DPPH自由基的浓度,就像dimethoxylated漆酚衍生品(12]。相比之下,PDs DPPH自由基- 6 - 10显示主要是高扫气活动,他们的活动非常类似无论烷基侧链的长度。

抑制效果的PDs AMVN——AAPH-induced PhC-LUV体系中脂质过氧化反应

所示图7,磷脂酰胆碱氢过氧化物(PhC-OOH)形成诱导PhC LUV暴露于2时,2》-azobis (2, 4-dimethylvaleronitrile) (AMVN),这是一种脂溶性激进的发电机。PDs 6 - 10有效抑制PhC哦形成在PhC LUV AMVN引起的脂质过氧化作用。这些化合物表现出抑制作用显著高于α-Toc,这是一个代表亲脂性的抗氧化维生素。7 - 10的抑制效应,包含超过五个碳烷基侧链,非常类似无论烷基链的长度和显著(p < 0.05)高于6,这中不含碳的烷基侧链。此外,化合物7 - 10,它包含三个附近的自由羟基苯的结构,更有效地抑制了PhC-OOH形成脂质过氧化反应过去的爱与PC相比,它包含一个苯邻二酚结构和一个五碳烷基链,作为non-allergenic漆酚的导数。此外,6的抗氧化活动非常类似于电脑。

我们也评估PDs的抑制性影响6 - 10在PhC-OOH形成PhC LUV诱导的脂质过氧化2,2’-azobis (2-amidino-propane)盐酸盐(AAPH),这是一种水溶性激进的发电机。所有PDs 6 - 10施加高抑制性影响PhC-OOH生产PhC LUV生成的水相(图7 b)。6 - 10的抑制作用非常类似无论烷基侧链的长度。此外,这些化合物的抑制作用非常类似于PC,它包含一个苯邻二酚主要结构和一个五碳烷基链,大于α-Toc,这是一个积极的控制。

PD对铜离子感应抑制影响大鼠血浆脂质过氧化作用

当老鼠血液等离子体处理的铜离子,胆甾醇酯氢过氧化物(CE-OOH)内容作为脂质过氧化反应产品孵化期间逐渐增加。所有的PDs 6 - 10和PC,作为一个积极的控制,有效地抑制CE-OOH形成铜离子感应期间大鼠血浆脂质过氧化反应,尽管他们的抑制效果不同(图8)。化合物7,与五碳原子的烷基侧链的焦棓酸结构,显示抑制效果比明显高于其他PDs 6和8 - 10和PC。14 h孵化后,抑制影响CE-OOH形成减少7 > 9 > 8 > 6的顺序≥10 PC > (图8)。这些结果表明,PDs 6 - 10对增加的抑制作用在CE-OOH形成的脂质过氧化作用引起的大鼠血浆铜离子。

讨论

我们以前的研究表明,邻苯二酚结构和烷基侧链长度的漆酚衍生品与接触过敏和脂质体膜的抗氧化活性和大鼠血浆雷竞技网页版12]。我们假设PDs,由gallol和烷基侧链结构,可能更有吸引力和潜在的抗氧化化合物在细胞和亚细胞的膜比漆酚衍生品。因此,我们合成了PDs - 10包含不同碳烷基侧链的长度(图1)和他们的接触糖甙抗氧化雷竞技网页版活动在本研究确定

在大量合成PDs - 10治疗(3μmol)左耳朵的老鼠每天10天。形态学的结果表明,只有8 (3-decylpyrogallol),增长包含十烷基侧链原子,造成了严重的接触过敏(雷竞技网页版图2)。8的形态特征是类似于3-decylcatechol 3-pentadecylcatechol,漆酚衍生品,诱发过敏反应在我们之前的研究12]。然而,其他PDs 1 - 7、9和10没有造成接触过敏。雷竞技网页版接触过敏雷竞技网页版的合成PDs衍生品(图2)与血液生物标志物的结果密切相关,包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、血清IgE,组胺(图3)。这些观察表明,酚羟基的数目和位置和烷基侧链长度与接触的感应超敏反应类似于漆酚衍生品。雷竞技网页版

抗氧化复合生物膜上的定位是一个至关重要的因素来防止膜的氧化损伤。我们假设本地化PDs 6 - 10的生物膜抗氧化活动的影响。特别是,化合物在生物膜的抗氧化机制常常依赖于平衡亲脂性的,与膜的亲水部分抗氧化剂。α-Toc,拥有chromanol集团和植基侧链,是防止膜的氧化损伤。几项研究已经报道,植基侧链的长度α-Toc,代表脂质抗氧化,是公司重要的因素和本地化的α-Toc膜(23,24]。一个水溶性的α-Toc导数,含有糖基组而不是植基侧链α-Toc,增强抗氧化活性在膜表面25]。一种抗氧化的化合物的羟基减少亲油性。因此,亲油性PDs似乎低于苯邻二酚衍生品。此外,PDs可能影响公司的亲油性率低和本地化PDs的膜。支持这一假设的结果显示7亲油性相对低于PC,在n-octanol /水分区测量实验中,尽管两个化合物具有相同的五碳烷基侧链。此外,PD亲油性是成正比的长度烷基侧链的碳原子。我们还发现PD亲油性的化合物有超过10个碳原子的烷基侧链表现出相对较高的亲油性比电脑。PDs的总和的6 - 10 n-octanol和水阶段没有达到100%,这表明缺少的部分可能是位于n-octanol和水之间的界面,就像catechol-type漆酚衍生品(12]。这些趋势是类似于公司的PDs 6 - 10在PhC LUV脂质体膜实验(图5)。因此,这些结果表明,焦棓酸的羟基结构可能导致较低的亲油性和膜结合率。

几项研究已经表明,酚羟基的数目和位置很重要,作为自由基清除活性的活性部位(15,16]。特别是,焦棓酸结构已经被研究和显示更高的自由radicalscavenging比苯邻二酚结构的活动。在DPPH自由基实验的结果(图6),PDs 6 - 10与焦棓酸结构更有效地回收比PC DPPH自由基,具有邻苯二酚结构。PDs 6 - 10显示高自由自由基清除活动无论烷基侧链的长度,这表明烷基侧链长度不为自由基清除(图6在一个齐次解系统。然而,trimethylated PDs 1 - 5,这有一个tri-methylated焦棓酸结构,没有清除DPPH自由基。因此,这些结果证实了PDs中的焦棓酸结构中扮演一个重要的角色在自由基清除。此外,DPPH自由基的分子数回收焦棓酸或漆酚衍生的一个分子计算的假设一个分子α-Toc进行清除DPPH自由基的两个分子26,27]。一个分子的catechol-type漆酚衍生物PC被困两分子自由基,这是类似于α-Toc。然而,一个分子的PDs 6 - 10本研究中使用的是明显高于α-Toc和catechol-type漆酚衍生品(12]。因此,每个PD的一个分子可能进行大约5个激进分子。

PC LUV模型系统常用的生物膜模型来评价抗氧化剂对脂质过氧化的抑制影响细胞膜(28]。一种脂溶性AMVN生成过氧化氢自由基在脂质体膜的内部29日]。而水溶性AAPH生成过氧化氢自由基脂质体膜的表面和表面(30.]。AMVN和AAPH分别添加在PhC LUV悬挂和PC-OOH测量每隔30分钟的延迟时间为360分钟。PC-OOH由激进的发电机约60分钟,此后线性增加孵化期间360分钟。PD抑制PC-OOH形成PhC爱由激进的发电机控制没有添加抗氧化剂相比,尽管他们抑制活动是不同的。270分钟孵化后,抑制活性焦棓酸衍生品对PC-OOH形成明显不同与α-Toc相比和/或PC积极控制。这些结果表明,PDs 7 - 10包含焦棓酸结构有效地抑制PhC-OOH形成AMVNand AAPH-induced膜PhC LUV系统,虽然略有不同的影响取决于烷基侧链的长度。这一趋势是相似的结果(图7)漆酚的抗氧化活动衍生品,它具有邻苯二酚结构,据我们之前研究[12]。有趣的是,我们的数据表明,PDs 7 - 10与增长了十烷基侧链更有效地抑制脂质过氧化作用引起AMVN LUV脂质体膜的内部比α-Toc和电脑,这是由邻苯二酚结构和一个五碳原子烷基侧链(图7)。此外,所有PDs强烈抑制脂质过氧化的爱引起的脂质体膜AAPH无论烷基侧链的长度,和他们的抑制活性明显比α-Toc更有效(p < 0.05);然而,PD活动从PC活动之间没有显著性差异。这些结果表明,PDs 6 - 10更有效地回收自由基诱导水和脂质阶段的爱比α-Toc脂质体膜系统。因此,这些结果表明,焦棓酸的羟基结构可能是分布在表面以及内部的PhC爱膜。此外,PDs有相对较低的数量合并PhC LUV膜比漆酚衍生物,化合物之间相比拥有相同的烷基侧链的长度。因此,PDs可能更有效地清除自由基分布在膜的界面。

几项研究已经表明,抗氧化剂抑制氧化的组件,如在血浆脂蛋白,和预防心血管疾病的发展,如动脉粥样硬化(30.- - - - - -33]。CE-OOH是血浆脂质过氧化作用生物标志物因为CE-OOH产生氧化是非常稳定和存在于健康人的血浆浓度约3海里的34,35]。我们已经报道,所有catechol-type漆酚衍生品有不同的烷基侧链长度强烈抑制CE-OOH的形成在铜离子引起的血浆脂质过氧化作用。在目前的研究中,我们还发现,所有PDs 6 - 10与焦棓酸结构有很高的抑制性影响CE-OOH形成在这个系统。这个结果表明,PDs 6 - 10高效螯合铜离子和/或回收铜离子感应在血浆自由基。然而,我们之前和现在的观测表明,抗氧化活动PDs和catecholtype漆酚衍生品没有与烷基侧链长度在大鼠血浆氧化(图8)。化合物7和电脑拥有一个五碳原子烷基侧链但包含三个本地的和两个羟基苯的结构,分别。然而,化合物7更压倒性地抑制CE-OOH形成血浆比电脑。此外,化合物7显示抑制脂质过氧化的影响高于其他PDs 6和8 - 10。化合物8和9,10年期和15-carbon原子烷基侧链,抑制脂质过氧化的影响显示相对高于电脑。这一结果表明,PDs拥有5 -和15-carbon原子烷基侧链可以有效地抑制铜离子感应在血浆脂质过氧化作用。

在这项研究中,我们证明了PDs 6 - 10拥有不同的烷基侧链长度有效回收自由基生成水和脂质阶段。增长,然而,4-decylpyrogallol 8十原子烷基链中,造成了严重的过敏性接触,就像漆酚。雷竞技网页版相比之下,其他PDs 6、7、9、10接触没有造成过敏反应。雷竞技网页版因此,酚羟基的数目和位置和长度的碳原子的烷基链PDs被澄清为重要因素过敏感应。此外,non-allergenic PDs 7、9和10个可能是优秀的抗氧化化合物在生物膜系统,因为它们显示高结合磷脂膜,有效回收自由基诱导的接口以及PhC LUV膜的内部系统。因此,non-allergenic PDs被认为是强有力的抗氧化剂,防止生物膜氧化。现在,non-allergenic PDs的吸附和新陈代谢7,9、10和他们在活的有机体内抗氧化膜过氧化作用的影响正在评估。

实验部分

核磁共振光谱数据得到瓦里安UnityINOVA(瓦里安,核桃溪市,CA)光谱仪在CDCl使用四甲基硅烷₃和acetone-d₆作为内部标准。质量光谱数据得到电喷雾电离质谱(API 3200 q陷阱,应用生物系统公司,促进城市,CA)在下列条件:离子源温度、0°C;和电子电压的积极的和消极的模式,分别为5000 V和−4500 V。和硅胶柱层析法进行(70 - 230目)(默克公司,达姆施塔特,德国)树脂。高效液相色谱法分析了在日本岛津公司LC-6AD SPD-M20A探测器和硅胶(4.6×250毫米)(Tosoh、东京、日本),LiChroprep大叶性(40 - 63μm 25×310毫米)(默克公司),和辛基- 80 t(4.6×150毫米)(Tosoh)列。薄层色谱法进行硅胶60 F_254年(0.25毫米厚)(默克公司)。

化合物1 (1、2、3-trimethylbenzene), 1-bromopentane, 1-bromodecane, 1-bromopentadecane, 1-bromoeicosane, n-BuLi在正己烷(1.6米),三溴化硼(BBr)₃1.0年的正己烷)2 6-di-tert-butyl-4-methyl-phenol(二叔丁基对甲酚),70%高氯酸(HClO₄),diethylenetriaminepentaacetic酸(二乙三胺五醋酸)获得Sigma-Aldrich化工有限公司(圣路易斯,密苏里州)。化合物6(焦棓酸)从关东大购买化工有限公司(日本东京)。在我们的实验室电脑合成12]。n-Octanol Samchun获得纯化工有限公司(平泽市、韩国)。DPPH、AMVN AAPH、AsA和蛋黄3-sn-phosphatidyl胆碱和光(日本大阪)获得kouichi。α-Toc购买从丙烯酰胺(buch SG、苜蓿、瑞士)。其他化学试剂和溶剂分析纯。

合成Tri-O-methyl-4-alkylpyrogallol衍生品

1、2、3-Tri-O-methyl-4-alkylpyrogallol根据漆酚衍生物合成衍生物合成方法(12]。3.82毫升整除的1、2、3-tri-O-methyl-4-alkylpyrogallol(更易与24日)被添加到解决方案(50 mL)干四氢呋喃(四氢呋喃)和混合搅拌30分钟在0°C。的溶液72毫升n-BuLi(72年1.6年的正己烷,更易)5毫升四氢呋喃在慢慢添加到混合物中,然后搅拌先后为1 h在0°C和3 h在室温下。解决方案(5.94毫升)的1-bromoalkanes(48更易)与不同碳链长度在慢慢涌上解决方案然后回流20 h 210°C。结果被添加到饱和NH混合物₄Cl解决方案(50毫升,三次)和分区与乙酸乙酯(层,50毫升,三次)。有机层用盐水溶液洗(50毫升,三次)和蒸发在真空内在35°C。集中净化在硅胶(140克,2.3×67厘米)柱层析洗脱与正己烷/层= 18:1 (v / v)提供trimethylated PDs。四个trimethylated PDs 2 - 5使用1-brompentane合成,1-bromodecane 1-bromopentadecane, 1-bromoeicosane使用上面描述的过程。原油trimethylated PD产品被硅胶柱层析法纯化(甲苯)。收益率为62.9、59.5%、60.1和60.5%,2,3,4,5,分别。所有化合物的纯度> 99%。

1、2、3-Tri-O-methyl-4-pentylpyrogallol 2

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ6.83 (1 h d J = 8.5赫兹,H-5), 6.61 (1 h d J = 8.5赫兹,货币供应量),3.85 (3 h, s,哟₃的颈- 1),3.88 (6 h, s,哟₃c - 2和颈- 3),2.55 (2 h t J = 8.0赫兹,h -”), 1.57 (2 h, m, 2), 1.34 (4 h, m, H-3 ', H-4 '), 0.91 (3 h t J = 7.0赫兹,H-5”);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ142.3(颈- 1),151.8 (c - 2), 151.7(颈),129.0 (c - 4), 123.7 (c - 5), 107.1(其他),56.0 (3 h, s,哟₃的颈- 1),60.9(哟₃c - 2), 60.7(哟₃颈- 3),29.6(颈- 1”),30.6 (c - 2 '), 31.8 (c - 3 '), 22.6 (c - 4 '), 14.0 (c - 5 ');谱积极的)239.2 m / z [m + H]⁺261.2 [M + Na]⁺。

1、2、3-Tri-O-methyl-4-pentylpyrogallol 3

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ6.83 (1 h d J = 8.3赫兹,H-5), 6.61 (1 h, t J = 8.3赫兹,货币供应量),3.85 (3 h, s,哟₃的颈- 1),3.85 (6 h, s,哟₃c - 2和颈- 3),2.54 (2 h t J = 7.8赫兹,h -”), 1.55 (2 h, m, 2), 1.30 (14 h, m, H-3 -H-9), 0.89 (3 h t J = 7.0赫兹,H-10”);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ142.2(颈- 1),151.8 (c - 2), 151.7(颈),129.0 (c - 4), 123.7 (c - 5), 107.1(其他),60.0(哟₃的颈- 1),60.9(哟₃c - 2), 60.9(哟₃颈- 3),31.0 (c - 2 '), 29.8 - -29.3(颈- 1,颈-C-7”)。31.9 (8),22.7 (C-9 '), 14.1 (C-10 ');质(积极)309.3 m / z [m + H]⁺。

1、2、3-Tri-O-methyl-4-decylpyrogallol 4

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ6.82 (1 h d J = 8.5赫兹,H-5), 6.60 (1 h d J = 8.5赫兹,货币供应量),3.84 (3 h, s,哟₃的颈- 1),3.87 (6 h, s,哟₃c - 2和颈- 3),2.53 (2 h t J = 7.8赫兹,h -”), 1.54 (2 h, m, 2), 1.29 (24 h, m, H-3 -H-14), 0.88 (3 h t J = 7.0赫兹,H-15”);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ142.3(颈- 1),151.9 (c - 2), 151.7(颈),129.0 (c - 4), 123.7 (c - 5), 107.1(其他),56.0(哟₃的颈- 1),60.9(哟₃c - 2), 60.7(哟₃颈- 3),29.7 - -29.4(颈- 1,颈- 3 c 12), 31.0 (c - 2 '), 31.9 (c13), 22.7(碳14的),14.1 (C-15 ');ESIMS(积极)379.3 m / z [m + H]⁺401.3 [M + Na]⁺。

1、2、3-Tri-O-methyl-4-eicosylpyrogallol 5

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ6.82 (1 h d J = 8.3赫兹,H-5), 6.60 (1 h d J = 8.3赫兹,H-5), 3.84 (3 h, s,哟₃的颈- 1),3.87 (6 h, s,哟₃c - 2和颈- 3),2.53 (2 h t J = 7.8赫兹,h -”), 1.54 (2 h, m, 2), 1.31 (34 h, m, H-3 -H-19), 0.88 (3 h t J = 7.0赫兹,H-20”);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ142.3(颈- 1),151.9 (c - 2), 151.7(颈),129.0 (c - 4), 123.7 (c - 5), 107.1(其他),56.0(哟₃的颈- 1),60。9(哟₃c - 2), 60.7(哟₃颈- 3),29.7 - -29.4(颈- 1,颈-C-17 '), 31.0 (c - 2 '), 31.9 (C-18 '), 22.7 (C-19 '), 14.1 (C-20 ');质(积极)449.4 m / z [m + H]⁺471.4 [M + Na]⁺。

PDs的合成

PDs根据合成漆酚衍生物合成方法前面描述的(12]。简而言之,trimethylated PDs 2 - 5(5.7克,22.5更易)溶解在60毫升干燥的二氯甲烷(CH₂Cl₂)在0°C。这个示例解决方案添加到解决方案(45毫升)的1.0 BBr³己烷溶液(45更易)在干燥的CH₂Cl₂,混合搅拌2 h在0°C,然后在室温下20 h。每个解决方案与H分区₂O生产CH₂Cl₂层。水层与CH分区₂Cl₂(50毫升,两次)。合并后的有机层用盐水洗净(100毫升,两次)。有机层蒸发在真空内在35°C。原油产品纯化在硅胶(2.9×56厘米,正己烷/醚= 1:1.5,v / v)生产PDs柱层析法。PDs 7、8、9和10合成了1,2,3-tri-O-methyl-4-alkylpyrogallol衍生品2、3、4和5,分别使用上面描述的过程。PDs 7 - 10也从trimethylated PDs合成2 - 5与BBr脱甲基作用³(12]。收益率分别为95.9,86.5,81.1和94.5% 7,8,9,10,分别和所有化合物的纯度> 99%。

4-Pentylpyrogallol 7

¹H NMR (500 MHz, acetone-d₆)δ7.84 - -7.02 (3 h, s,颈- 1的哦,c - 2,和颈- 3),6.42 (1 h d J = 8.5赫兹,H-5), 6.30 (1 h d J = 8.5赫兹,货币供应量),2.52 (2 h t J = 7.8赫兹,h -”), 1.56 (2 h, m, 2), 1.32 (4 h, m, H-3”和H-4”), 0.88 (3 h t J = 7.0赫兹,H-5”);¹³C NMR (125 MHz, acetone-d₆)δ133.5(颈- 1),144.8 (c - 2), 144.4(颈),121.7 (c - 4), 120.6 (c - 5), 107.3(其他),30.5(颈- 1“),30.8 (c - 2”), 32.5(颈),23.4 (c - 4 '), 14.5 (c - 5 ');质(负面)195.1 m / z [m - H]^{- - - - - -}。

4-Decylpyrogallol 8

¹H NMR (500 MHz, acetone-d₆)δ7.34 (3 h, s,颈- 1的哦,c - 2,和颈- 3),6.43 (1 h d J = 8.5赫兹,H-5), 6.30 (1 h d J = 8.5赫兹),2.52 (2 h t J = 7.8赫兹,h -”), 1.55 (2 h, m, 2), 1.31 (14 h, m, H-3 -H-9), 0.88 (3 h t J = 7.0赫兹,H-10”);¹³C NMR (125 MHz, acetone-d₆)δ132.6(颈- 1),143.9 (c - 2), 143.5(颈),120.8 (c - 4), 119.7 (c - 5), 106.4(其他),29.6 - -29.4(颈- 1,颈-C-9 '), 30.2 (c - 2 '), 31.8 (8), 22.5 (C-9 '), 13.5 (C-10 ');质(负面)265.2 m / z [m - H]^{- - - - - -}。

4-Pentadecylpyrogallol 9

¹H NMR (500 MHz, acetone-d₆)δ7.82 - -7.01 (3 h, s,颈- 1的哦,c - 2,和颈- 3),6.43 (1 h d J = 8.0赫兹,H-5), 6.30 (1 h d J = 8.0赫兹,货币供应量),2.52 (2 h t J = 7.8赫兹,h), 1.56 (2 h, m, 2), 1.31 (24 h, m, H-3 -H-14), 0.88 (3 h t J = 7.0赫兹,H-15”);¹³C NMR (125 MHz, acetone-d₆)δ133.5(颈- 1),144.8 (c - 2), 144.4(颈),121.7 (c - 4), 120.6 (c - 5), 107.3(其他),30.5 - -30.4(颈- 1,颈- 3 c 12), 31.2 (c - 2 '), 32.7 (c13), 23.4(碳14 '),14.4 (C-15 ');质(负面)335.2 m / z [m - H]^{- - - - - -}。

4-Eicosylpyrogallol 10

¹H NMR (125 MHz, acetone-d₆)δ7.85 - -7.03 (3 h, s,颈- 1的哦,c - 2,和颈- 3),6.42 (1 h d J = 8.0赫兹,H-5), 6.30 (1 h d J = 8.0赫兹,货币供应量),2.52 (2 h t J = 7.5赫兹,h -”), 1.56 (2 h, m, 2), 1.31 (34 h, m, H-3 -H-19), 0.88 (3 h t J = 7.3赫兹,H-20”);¹³C NMR (125 MHz, acetone-d₆)δ133.5(颈- 1),144.8 (c - 2), 144.5(颈),121.7 (c - 4), 120.6 (c - 5), 107.3(其他),30.5 - -30.4(颈- 1,颈-C-19 '), 31.2 (c - 2 '), 32.7 (C-18 '), 23.4 (C-19 '), 14.4 (C-20);质(负面)405.3 m / z [m - H]^{- - - - - -}。

雷竞技网页版接触过敏试验PDs的老鼠的耳朵

Sprague-Dawley老鼠(男,6周大,180 - 200 g)得到Samtako生物韩(乌山、韩国)。老鼠被安置在控制湿度(55±5%),室温(25±1°C),和一个12 h光/暗周期。食物和水随意。所有实验程序批准的机构动物保健和使用委员会Chonnam国立大学(没有。CNU iacuc yb - r - 2012 - 26)。所有的老鼠都习惯与一个标准的1周啮齿动物的饮食(哈伦啮齿动物的饮食,2018年代)之前的实验。EtOH解决方案(3μmol 50μL-1)应用PDs 1 - 10的后方(1厘米²)左鼠的耳朵(n = 6)每天20天。老鼠的耳朵上的红斑可视化处理PDs是接触过敏反映。雷竞技网页版

老鼠的血液生物标志物PDs对待

PD治疗10天后,老鼠(n = 6)与乙醚麻醉,腹壁被打开了,血从腹主动脉收集到玻璃管。数量的白细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在全血测定与兽医血液学大型化系统(CDC Technologies Inc。牛津,MI)。血清是通过离心(1500克)在4°C 20分钟和储存在-70°C到使用。血清IgE和组胺水平测量使用老鼠IgE酶联免疫吸附试验(ELISA)工具包(Komabiotec,首尔,韩国)和组胺酶联免疫试剂盒(牛津大学生物医学研究公司,牛津,MI)根据制造商的指示。

分配系数的测量n-Octanol / H₂O混合物

PDs的分区系数6 - 10、PC、AsA,α-Toc测定使用n-octanol / H₂O系统(21]。100 nmol整除的化合物在甲醇和抗氧化剂(α-Toc和AsA,每个100 nmol)被放置在试管中。与氮气去除溶剂后,n-octanol(100μL)和50 mM Tris-HCl缓冲区(pH值7.4,100μL)被分散到试管。后悬架是大力混合30年代,它是在6000转离心5分钟在4°C生产n-octanol Tris-HCl缓冲阶段。每个化合物在两个阶段的内容由ODS-HPLC分析下面描述。

过去爱超滤

PDs 6 - 10的乙醇溶液,PC,α-Toc(最终浓度,25μM)和解决方案的纯化PhC LUV CHCl(最终浓度5毫米)₃/甲醇(95:5,v / v)被放置在试管中,和溶剂被氮气紧随其后在真空内蒸发了30分钟。0.01的残留于400年分散μL Tris-HCl缓冲区(pH值7.4)。暂停使用旋涡混合器混合30年代声波降解法对30年代紧随其后。悬架是通过聚碳酸酯膜(孔隙大小= 100海里)21次给爱悬架(36]。滤液离心机在12000 rpm 40分钟在4°C。上层清液都集中在氮气流,集中是用乙醇溶解(100μL)。

PD定量分析

PDs的内容1、AsA和α-Toc PhC爱后的滤液用高效液相色谱检测超滤配备一个辛基- 80 - ts列(Tosoh)。移动阶段分离PDs - 10是甲醇/ H的溶剂混合物₂求:1、甲醇/ H₂O = 40:6 0 (v / v);2、甲醇/ H₂O = 70:30 (v / v);3,甲醇/ H₂O = 83:17 (v / v);4、甲醇/ H₂O = 88:12 (v / v);5、甲醇/ H₂O = 94:6 (v / v);6、甲醇/ H₂O = 0:100 (v / v);7、甲醇/ H₂O = 52:48 (v / v);8、甲醇/ H₂O = 73:27 (v / v);9、甲醇/ H₂O = 83:17 (v / v);10、甲醇/ H₂O = 88:12 (v / v);电脑,甲醇/ H₂O = 62:38 (v / v);α-Toc,甲醇/ H₂O = 93:7 (v / v);和亚撒,甲醇/ H₂O = 0:100 (v / v)。流量为1.0毫升最低为1,化合物监测在240 nm(日本岛津公司)。标准PD方案1 - 10在甲醇浓度的5 - 200 nmol准备。校准曲线是由策划每个化合物的峰面积与浓度。PD内容量化实验一式三份

测定DPPH自由基清除活性

PDs的自由基清除自由活动1 - 10、α-Toc和PC进行评估使用DPPH自由基[37]。简单地说,化合物是准备在最后10浓度,50岁,100年,150年、200年和250年μM乙醇。每个化合物的甲醇溶液(0.5毫升)在不同浓度乙醇添加到DPPH自由基溶液(2.0毫升,最终浓度,250μM)。混合物在室温下孵化了在黑暗中30分钟。自由自由基清除活性的化合物被脱色在517 nm,评估和活动也决定从一个空白的吸光度下降百分比计算测试。

蛋黄磷脂酰胆碱的制备(EYPhC)

EYPhC准备如前所述,Terao et al。38),用细微的修改。简单地说,一个商业EYPhC试剂提纯了LiChroprep肺叶的柱层析法与CHCl筛选了₃/甲醇/小时₂O = 1:10:0.5 (v / v / v)。EYPhC-containing EYPhC内容分数在830 nm通过分光光度计使用量化4-diaminophenol盐酸盐。溶剂被与氮气流蒸发真空紧随其后。EYPhC集中储存在-40°C到使用。

决心对AMVN PDs的抑制性影响,AAPH-induced PhC LUV的脂质过氧化作用

PDs的抑制效应对AMVN——AAPH-induced PhC LUV系统中脂质过氧化反应测定根据前面描述的方法(12]。乙醇解PDs 6 - 10、PC和α-Toc, CHCl纯化PhC LUV的解决方案₃/甲醇(95:5,v / v)或AMVN在正己烷溶液放置在试管中。后蒸发溶剂,残留物被分散在1毫升的0.01米Tris-HCl包含0.5毫米二乙三胺五醋酸缓冲(pH值7.4)。PhC爱悬架得到使用相同的声波降解法和膜过程(孔隙大小= 100海里,21倍)。PhC LUV悬挂是稀释1毫升的0.01米Tris-HCl缓冲区(pH值7.4)包含0.5毫米二乙三胺五醋酸和孵化37°C 270分钟在黑暗中不断颤抖。最后的抗氧化剂的浓度,PhC爱,和激进的发电机(AMVN和APPH) 25日,分别为5和1毫米。反应混合物中的PhC-OOH内容确定使用下面描述的高效液相色谱条件。

确定的抑制性影响焦棓酸衍生品在PhC爱,对APPH-induced氧化溶液AAPH(最终浓度,10毫米)在0.01 M Tris-HCl缓冲区(pH值7.4)包含0.5毫米二乙三胺五醋酸是添加到PC LUV悬挂在37°C pre-incubated 5分钟在黑暗中连续晃动后声波降解法和膜过程。其他条件为AMVN水平是一样的。

PhC-OOH内容根据前面描述的方法取决于Shirai et al。22]。短暂,整除受到ODS-HPLC使用TSK-gel辛基- 80 - ts列(Tosoh)。流动相是由甲醇/ H₂O =挺(v / v),流量是恒定在1.0毫升分钟¹。在235 nm PhC-OOH被紫外线检测监控。从PhC-OOH PhC-OOH浓度计算标准曲线。详细的程序准备PhC-OOH标准一直在前面描述的(38]。

测定铜离子感应PD抑制性影响大鼠血浆中氧化

PD的抗氧化活动6 - 10和PC进行评估通过测量他们的抑制效应的形成在铜离子感应CE-OOH鼠血浆氧化(25]。Sprague-Dawley老鼠(男,6-weeks-of-age, 180 - 200克)是获得Samtako生物。老鼠维持在20±2°C下12 h光/暗周期和禁食采血前15 h。乙醚麻醉后,从腹主动脉血收集到肝素化管。大鼠血浆被离心分离(3000克)在4°C 20分钟和存储−40°C。血浆和PBS稀释4倍(pH值7.4)。稀释的等离子体(650μL)添加到20μL PDs(10μM)和100年的乙醇溶液μL CuSO₄PBS的解决方案(最终浓度,100μM)。的混合是在37°C的环境中14 h和持续的震动。CE-OOH浓度是决定如前所述39]。简而言之,100年μL整除撤出了孵化解决方案和混合3毫升甲醇含2.5毫米二叔丁基对甲酚。混合物用了1分钟,然后用3毫升分区正己烷为1分钟。上层有力的涡流(正己烷)收集和提取较低的层的重复了3毫升的正己烷。合并后的正己烷阶段在室温下在旋转蒸发器蒸发。剩余的油脂溶解在100μL甲醇/ CHCl₃(95:5,v / v)和整除受到使用TSK-gel rp -辛基- 80 - ts列来确定CE-OOH内容。废水被紫外线监控检测在235海里。甲醇/小时₂O (97:3, v / v)作为流动相,和最小流量是恒定在1.0毫升¹。从CE-OOH CE-OOH浓度计算标准曲线。详细程序CE-OOH标准制剂已发表之前(39]。

统计分析

数据表示为平均值±标准偏差和社会科学统计软件包(SPSS、IBM、阿蒙克,纽约,美国)19.0一揽子计划是用于确定差异。由单向方差分析统计差异进行评估之后,邓肯的多重比较检验。p < 0.05被认为是显著的。

确认

本研究支持的基础科学研究项目通过韩国国家研究基金会(NRF),这是由教育部、科学和技术(没有。nrf - 2013 r1a1a2012410)。

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