组织病理学中的人为因素:误读的潜在原因。

摘要

术中对新鲜组织的组织学评估可以提供有价值的诊断信息，指导手术处理。组织病理学中的伪影，可能造成严重的错误和误诊。在某些情况下，人为损伤的程度如此之大，可能涉及整个标本，使其不适合于诊断目的或无用。活组织检查口腔标本体积小，质地细腻，对其进行伪影效果较好。有些人工制品很容易与正常或病理组织成分区分开来，而有些则很难与此类实体区分开来。人工制品可能会在不同阶段遇到，包括在组织的常规收集、固定、加工、切割和染色过程中。本文综述了在组织组织病理学处理的每个阶段中发生的所有伪影，试图从组织病理学上识别伪影，其致病因素和外观，以便将其与病理实体区分开来。

关键字

文物，切割，固定，加工，染色。

简介

人工制品的定义是通过组织加工而产生的任何结构或特征。有些人工制品易于与正常或病变组织成分区分，有些则难以与此类实体区分。在组织学和细胞学术语中，人工制品可以定义为在活组织中通常不存在的结构。问题是，当伪影确实出现时，要识别它们，不要将它们与正常组织成分或病理变化混淆。在某些情况下，工件的存在可能会影响准确的诊断。

伪影会改变正常的形态学和细胞学特征，甚至导致组织完全无用。了解和理解伪影是很重要的，因为通过学习识别它们，我们可以避免误诊[1，2］．这些伪影可能很小，只涉及标本的一小部分，因此不会影响病理学家提供准确诊断的能力。然而，在某些情况下，人为损伤程度过大或可能涉及整个标本，使其不适合于诊断目的或无用[1］．因此，本出版物的目的是提高对组织病理学中可能遇到的各种伪影的认识，为其识别提供指导，解释其原因，并在可能的情况下提出避免其发生的方法。

Pre-Fixation构件:

固定前伪影是指固定前在组织中产生的伪影。它们可能以纹身颜料等沉积物的形式出现，也可能是激光刀损伤或粉碎人工制品等外科手术的结果。污染物也可能在手术或标本解剖前的处理过程中引入组织。只有确保相关人员充分意识到允许标本被污染或以其他方式损坏的后果，才能避免这种类型的人工制品。

表面处理造成的工件

有时用着色剂标记新鲜手术标本的切除边缘，以使标本有适当的方向，并在显微镜下评估这些边缘[3.］．活检区也可用碘酒准备。常用的表面标记试剂有印度墨水、硝酸银、阿利新蓝或阿利新绿。（图:1使用酊剂或其他染色溶液准备活检区域应谨慎使用，并应在活检细节时清楚地提及，因为它可能会干扰组织处理和染色程序。

纹身颜料人工制品

用于制作装饰性纹身的各种颜色的不溶性颜料偶尔会在皮肤的部分中遇到。对沉积物的存在没有组织反应

手术的工件

镊子或挤压器

当仪器的齿穿透标本时，会导致周围组织的空洞或撕裂和压迫。手术处理过程中产生伪影的其他可能原因有:机械原因:活检过程中常用的止血器和蚊虫止血器、吸头、带齿或无齿的Adson钳、无创伤钳和Allis钳。化学的原因:在损伤组织内过量注射大剂量局麻药溶液，并应用消毒药物如碘碘溶液。热的原因:用于凝固和切割电极的仪器，如电灼[4，5］．这导致表面上皮被迫穿过结缔组织，产生小的“假性囊肿”，也导致细胞质和核特征的丧失[6］．这些伪影可以通过轻轻处理标本，避免施加不必要的力，并将组织固定在远离病变组织的区域来避免。（图:2）

Fulgeration构件:使用激光或电外科手术时产生的热量可导致上皮细胞和结缔组织的显著改变[4］．上皮细胞可能出现分离，细胞核呈梭形、护盾状结构，上皮细胞与基底膜分离也会发生。纤维结缔组织、脂肪和肌肉可能呈现不透明、无定形的外观。可以通过使用刀具、使用低毫安电流、使用刀和电点组合来避免这种伪影。

注入工件:将大量麻醉溶液注射到待活检的部位，会产生出血并渗出，从而掩盖正常的细胞结构。将该溶液注射到病变组织中会引起上皮和结缔组织空泡化，并引起结缔组织分离。为了避免这种情况，可以使用阻塞技术代替浸润技术，并将溶液注射到远离病变组织的地方。不应注射大量局部麻醉溶液[4，5］．

缝合线的工件:缝合材料在组织学标本中偶有夹杂物。它可能由横向、斜向或纵向切割的孤立碎片或完整纤维束组成[5，7］．在仔细检查h&e染色切片时，有时可以看到纤维结构的细节，这些丝缝线在偏振光下表现出强烈的双折射，这对识别它们很有用(图:2 b)．组织学标本中存在缝合可能没有任何病理意义。它会损坏切片刀，导致切口撕裂和刀纹。可见缝合线应尽可能去除。

污染造成的文物

污染会产生某些伪影，主要包括:淀粉伪影:手术手套中用作润滑剂的淀粉粉污染标本。这些淀粉颗粒是可折射的，玻璃状，胶合体，PAS阳性体，直径一般为5-20mm。它们具有孢子状结构，中心区域较暗，可能被误解为固缩核或正在进行有丝分裂(图:3)，标本污染伪影可能发生在解剖过程中，来自先前标本的组织通过所使用的仪器(如手术刀刀片)或来自残留在解剖板表面的碎片转移。可重复使用的加工部件(如纸巾盒盖)，如果没有彻底清洗，也可以携带以前标本的碎片(图:3 b)．彻底清洗标本之间的板和仪器，或者用单独的纸覆盖解剖板，可以避免这个问题。异物污染常使标本的解释相当困难。这些伪影是由于样品制备过程中使用的纸、棉纱或软木板所产生的污染物而遇到的。它们通常在标本表面发现，但在解剖过程中可机械植入[1，3.) (图:3 c)．

固定工件

虽然固定是必要的，以避免可溶性组织成分的扩散和分解，但它本身构成了伪影的主要原因。如果该过程没有在最佳条件下进行，如果固定剂没有适当地进入组织，或者由于所使用的特定试剂的性质和质量，就会发生伪影[8，9］．最常用的固定剂是10%的福尔马林。福尔马林的浓度、污染和固定时间的延长导致标本切片困难。

色素伪影:这些伪影是由于各种固定剂中使用的福尔马林、氯化汞和苦味酸引起的，这些伪影会导致棕黑色颗粒状和黄色斑点随机分布在整个组织中(图:4)．

收缩构件:固定期间，组织体积发生变化。这是由于抑制细胞呼吸和改变膜的通透性。因此，在生命中连接的组织可能会相互拉开，留下空白[8]，这是一个非常常见的人工制品。在福尔马林固定后，一些非蛋白沉淀剂会引起组织肿胀。

流构件:这是一种重要的伪影类型，由于不固定物质的扩散，通过停留在同一位置而不是原始位置来给出错误的定位，众所周知的例子是糖原。为了进行糖原研究，应及时固定组织，因为在死后溶液中糖原最初会急剧损失，应在4度的80%酒精中进行固定。

扩散构件:物质有时会从组织中扩散出来。除了大分子外，像无机离子和生物胺这样的小分子也会从组织中丢失。例如;当切开的肾上腺组织置于碘酸盐中进行碘酸盐反应时，可以看到晚期胆胺以氨基色素的红色云状离开组织。

微波固定造成的伪影:微波固定的最佳温度为45-55℃。过热会导致切片质量差，而65℃以上过热会产生空泡、细胞质过度染色和核固缩。

冷冻干燥过程中的工件-冰晶工件:冷冻干燥固定时，应立即将组织浸入液氮冷却至-160℃至-180℃的异戊烷中。低温很重要，因为除非整个组织都冷冻起来，否则就会形成大冰晶，造成破坏。这种伪影导致组织完全扭曲，诊断困难。

长时间固定导致的伪影:长时间固定引起二次收缩和硬化，导致部分组织分离，出现空白。

加工工件

组织处理的目的是去除组织中所有可提取的水，代之以具有足够刚性的支撑介质，使组织切片不损伤或扭曲，如果不遵循适当的护理和程序，每一步都会产生伪影。

固定治疗后的伪影:在铬中固定的组织如果没有在自来水中清洗24小时，可能会导致氧化铬色素的形成。

脱水过程中的伪影:在脱水过程中可能会遇到伪影，因为1。脱水梯度不当，如果组织内外液体之间的浓度梯度过大，液体交换时扩散电流穿过细胞膜，从而增加细胞变形的可能性[2，8) 2。过度脱水使组织变硬、变脆、萎缩，造成切割困难，也会影响切片的染色性能[11) 3。脱水不足和不完全导致石蜡浸润不当，块状组织切片扭曲破碎，难以切片，导致人为变化。

清理过程中的工件:伪影可能因组织标本过于硬化而出现，并会阻碍石蜡在石蜡中适当浸渍，使切片时难以切割[2，3.］．

浸渍过程中的工件:蜡浸渍的作用是从组织中去除清除剂(蜡溶剂)，并使它们完全渗透到石蜡中，随后使其硬化以产生可切割部分的块。在这个过程中产生的人工制品是结晶:组织越厚，它将携带的清洗剂越多，因此需要更多的蜡来去除它。即使少量的清洗剂污染了蜡，也会导致切割过程中组织的破碎和结晶。

嵌入过程中的工件:在错误的包埋过程中，由于定位不当而导致的伪影经常出现，这将导致切片机的损坏或组织的显微研究困难。

由于加工不良造成的工件:疏松结缔组织内大面积的结构细节和清晰度缺失可能反映了固定不足。也可由组织加工过程中的故障引起，如加工周期过短、试剂选择不当、使用耗尽的试剂或在加工机器上更换溶剂时出错[3.，11］．

切割工件

与显微切片相关的人工制品:分段切割和浮选过程中产生的各种形式的机械损伤，以及来自各种来源的各种污染物，在分段中经常遇到。表1在显微切片中显示各种伪影及可能的原因。（图:5）

组织浮水浴相关文物:1)气泡滞留应注意防止气泡被困在切片下，这些滞留主要是由于漂浮技术差，切片被落下而不是在水面上轻轻拉过，或者由于水浴中已经存在的气泡被滑道移出并在切片下上升。在浮选和安装后，这些气泡被困在一个部分中，在干燥时可能会坍塌，留下裂缝并不能正确地粘附在载玻片上的区域(图:6)．2.水浴温度升高导致组织膨胀超过极限，出现“干裂”效应。3.浮物是出现在载玻片上的不属于那里的组织碎片，它们在处理过程中或由于不干净的水浴而漂浮。

烤箱/热板相关物品:温度设定应近似于石蜡熔点。这种类型的神器是由于温度超过了石蜡的熔点而产生的。如果烤箱太热，可能会扭曲细胞。引起核暗缩或核泡的。给出“加热神器”细胞的外观，似乎完全没有核细节。

提起组织切片时的伪影:当组织附着在叶片下表面时，会产生组织褶皱等伪影，最常见的是脂肪组织，主要是由于叶片钝(图:7)．可以通过将部分转移到新的水浴或在部分上使用本生灯或添加少量洗涤剂来避免。组织撕裂是组织附着在叶片下表面时产生的，主要是由于叶片钝，使用清洁和更换叶片可以避免这种撕裂。

由于胶粘剂和安装造成的工件:厚涂层的切片胶会带走污渍，可能会检测到背景污渍，从而产生不规则、质量差的切片。未染色的安装部分可能被各种材料污染，如微生物、空气纤维、纤维素纤维和灰尘颗粒。

染色的工件

残蜡造成的文物:切片中残留的蜡将阻止水和酒精染料溶液的渗透，使该区域完全没有染色，残留的蜡痕迹对核染色有微妙的影响，在细胞核看起来浑浊和缺乏细节的切片中产生小斑块[3.，12) (无花果:8)．长时间的二甲苯处理和重新染色将克服这个问题。

染色液污染造成的伪影:被微生物/外来颗粒/过期溶液污染，在切片上可见沉积[3.］．

污渍沉淀造成的伪影:未溶解和沉淀的污渍将导致在切片上沉积。

不完整或未被污染的区域造成的文物:染色盘填充不足或染色液堆积在载玻片顶部会造成此种伪影[11］．

越来越多的工件

在安装气泡夹闭过程中，残余水和安装介质的过度使用会带来人为变化。如果采用适当的安装技术，可以避免这些变化。

显微镜的工件

载玻片内部或外部存在的灰尘颗粒杂质会带来人为的变化。由于未清洗的镜片或睫毛导致的眼罩上的油脂沉积会导致雾蒙蒙的外观。

总结

口腔活检标本的处理受程序规程的约束，以产生适合诊断和解释的组织。这些程序本身受到人为和物质错误的影响，其结果是人为的，至少可能妨碍充分的诊断，或者最多可能使组织扭曲到无法诊断。需要识别这些人工制品并试图克服它们是口腔病理实验室的最大挑战。本文就伪影的识别及其潜在原因作一综述，以克服误诊和诊断困难，帮助病理学家作出明确诊断。

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