研究与评论在药学和制药雷竞技苹果下载科学
菜单e-ISSN: 2320 - 1215 p-ISSN: 2322 - 0112
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Tandia米1,2*,AliliJ-M1,AbbaraC1,3,Noel-Hudsonxm2Ayadi F1Polrot米4Gonin P4和Bonhomme-Faivre L1,2,5
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2upr 4123 EA学院医药科学,大学因为XI, 5让-巴蒂斯特·克莱门特街,92296年Chatenay-Malabry cedex,法国
3药理学和毒理学d 'Angers大学医疗中心4街拉,49100激怒,法国
4动物和动物资源,IFR 54,古斯塔夫Roussy研究所,39个仅仅街,94800年法国瑟
5935年UMR-S INSERM, 94800年巴黎Sud瑟,法国
收到日期:27/09/2017接受日期:10/12/2017发表日期:15/12/2017
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种代号为ABCB1的22的过度表达(P-gp)()与多药耐药性有关。由于伊立替康及其活性代谢物P-gp基质,我们测试是否贝伐单抗,一个单克隆抗体针对VEGF(血管内皮生长因子),可以调节P-gp函数。本研究的首要目标是评估贝伐单抗是否能增加细胞内阿霉素的浓度(P-gp衬底)与P-gp交互。第二个目标是文档贝伐单抗是否能修改伊立替康的性格在老鼠身上。因此,伊立替康及其活性代谢物的浓度用高效液相色谱检测SN-38裸体小鼠的血浆和血浆和人类大肠癌癌异种移植肿瘤的老鼠轴承当伊立替康口服3天(40毫克/公斤),单独或预处理后与贝伐单抗(5毫克/公斤IP)天1和3。
为在体外研究中,两个人类卵巢癌细胞(IGROV1) overexpressing或弱表达P-gp。贝伐单抗的影响P-gp功能评估通过测量阿霉素(P-gp荧光底物)细胞内积累。贝伐单抗的能力增加细胞毒性被MTT测试评估。暴露在贝伐单抗与阿霉素导致显著的阿霉素积累和阿霉素耐药性的逆转P-gp表达细胞系。药代动力学分析显示显著增加(1.7折)的伊立替康AUC和C马克斯(2倍)与贝伐单抗等离子体预处理后在人类大肠癌异种移植轴承老鼠。伊立替康与增加肿瘤AUC(1.3折)和C马克斯(1.3折)和SN-38 AUC(1.4折)观察贝伐单抗治疗组。等离子体的一个重要槽浓度SN-38(3.9倍),贝伐单抗治疗裸鼠实验也观察到。贝伐单抗增加P-gp基质细胞内积累在细胞行表明贝伐单抗可能影响伊立替康药代动力学部分由于P-gp调制函数。
伊立替康、SN-38贝伐单抗,22,药物动力学种代号为ABCB1的,
P-gp 22;AUC:曲线下的面积;C马克斯:最大浓度;T马克斯:时间达到最大浓度;T1/2:终端半衰期;CRC:结直肠癌;MDR:多药耐药性;VEGF:血管内皮生长因子;PTX:紫杉醇;DXR:阿霉素耐药
引入新的化疗药物结合治疗癌症的靶向治疗,如贝伐单抗(阿瓦斯丁®)和西妥昔单抗(艾比特思®)导致增加生存(1]。贝伐单抗人源化单克隆抗体结合血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成和血管生成的关键驱动因素,从而抑制VEGF与其受体的结合,Flt-1 (VEGFR-1)和KDR (VEGFR-2),内皮细胞表面。中和VEGF的生物学活动导致肿瘤血管化的回归,实现剩余肿瘤脉管系统规范化,并抑制肿瘤新血管的形成,从而抑制肿瘤的生长。
然而,内在的和获得的抗性通常观察到,收购的多药耐药性(MDR)最终导致失败的系统性的癌症治疗。许多肿瘤过多表达的多药耐药性(MDR)有关的射流泵22,从而强烈减少22基质的效力。
活跃流出的化疗药物在肿瘤细胞的跨膜泵磷酸腺苷磁带(ABC)家庭已经广泛报道作为一个潜在的临床相关的MDR机制(2]。22 (P-gp)在MDR有重要作用。伊立替康和SN-38 P-gp基质,从而导致这些药物的细胞内水平下降。
肿瘤侵犯/转移和多药耐药性(MDR)是治疗失败的主要原因,在各种各样的癌症患者高死亡率。在一项研究3),我们表明,西妥昔单抗,单克隆抗体针对表皮生长因子受体,可以调节22 (P-gp)功能,导致增加P-gp基质细胞内积累在癌行adriamycine P-gp表达也显著增加(1.7倍)SN-38性格在等离子体和肿瘤异种移植模型结肠直肠肿瘤与西妥昔单抗后预处理。王等人。4)已经证实,西妥昔单抗种代号为ABCB1的增强的化学治疗剂的功效糖蛋白overexpressing癌细胞。
李l . et al。5]显示凋亡之间的协同增强效应/ P-gp和VEGF血管内皮生长因子(VEGF)对人类喉部癌HEP2T细胞入侵在体外。此外,VEGF水平与P-gp表达K562 / A02癌细胞:三氧化二砷的作用导致耐药性逆转这些细胞的减少P-gp表达式(6]。
此外,Broggini-Tenzer a . et al。7)表明,贝伐单抗治疗resensitized 22过度SW480-derived肿瘤异种移植microtubule-stabilizing代理像紫杉醇因此支持这个以前的临床研究。
这里我们研究贝伐单抗在P-gp预处理功能的影响,有利于减少流出的流行性流感减毒活疫苗P-gp基质。
为了实现我们的目标,我们使用在体外我们的一个模型的人类卵巢癌症细胞系(IGROV1)对阿霉素耐药,因为高P-gp流出。
我们还进行了体内比较伊立替康及其活性代谢物的药代动力学研究(SN38)在等离子体和在结直肠肿瘤tumorgraft轴承裸小鼠,是否使用贝伐单抗
药物
阿霉素是购自Teva(法国巴黎),维拉帕米从雅培(法国巴黎)。伊立替康(CAMPTO®)(40毫克/ 2毫升)和贝伐单抗(阿瓦斯丁®)(25毫克/毫升)购买来自辉瑞(Montrouge、法国)和罗氏公司注册有限公司(英国)韦林花园城,实验室,分别。化学品Dullbecco修改鹰的介质(DMEM),胎牛血清(FCS)磷酸盐(PBS)、青霉素、链霉素、zeocin潮霉素b .买来Gibco英杰公司(法国- pontoise)。
伊立替康(纯度99%)和SN-38(纯度98%)从Sigma-Aldrich购买公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。乙腈和甲醇(液体色谱法级),四丁基铵和三氟乙酸从Sigma-Aldrich公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国),醋酸买来VWR BDH Prolabo (Haasrode、比利时)。3 - (4、5 - dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT)试验(Saint-Quentin Sigma-Aldrich化工有限公司,法国). .
细胞系
IGROV1细胞都来自别人和CNRS 8126实验室瑟博士,法国。
建立敏感和耐药阿霉素细胞系:父母非细胞系(IGROV1-p) doxorubicinresistant细胞系(IGROV1-DXR)
IGROV1-p细胞系是源自人类卵巢癌III期。亲代的特征敏感IGROV1-p报道之前(8,9]。IGROV1-DXR细胞过表达P-gp,选择从IGROV1-p细胞连续曝光的这些细胞的阿霉素浓度的增加逐渐步进式的方式,对阿霉素0.1μg /毫升。细胞系是增长与附着层补充10% (v / v) FCS,青霉素(100 U /毫升)和链霉素(100μg /毫升)37°C调湿大气中5%的二氧化碳在空气中。IGROV1-DXR细胞中维护中补充了阿霉素(0.1μg /毫升)。
阿霉素积累分析衡量流动仪分析(流式细胞仪)
P-gp功能评估:与IGROV1-p细胞阿霉素运输进行了化验,IGROV1-DXR细胞系。细胞在DMEM孵化单独使用阿霉素(10μM)加上5%的边后卫在2 h 37°C为了比较阿霉素积累两个细胞系。与阿霉素孵化后,细胞被洗两次与PBS和细胞分离有0.05% Trypsin-EDTA缓冲区。细胞在DMEM re-suspended + 10% FCS和离心机。与PBS洗涤三次后,消除细胞外的阿霉素荧光由于阿霉素积累在细胞用流式细胞术分析(10000年收购数据通道2细胞(FL2)。结果表示为总事件。
贝伐单抗对IGROV1-DXR P-Gp函数的影响线
贝伐单抗的效果进行了测试在2不同浓度(1毫克/毫升和5毫克/毫升)按照下列协议co-incubated与阿霉素10μM DMEM和5% FCS在2 h 37°C。贝伐单抗的效果也是IGROV1-p细胞上进行实验。维拉帕米在使用阿霉素10μM孵化是一个积极的控制。P-gp函数评估阿霉素累积百分数表示的doxorubicine积累通过以下方程。
100×(MFI贝伐单抗- MFI控制)/小额信贷机构控制。
MTT可行性测试
衡量IGROV1的贝伐单抗细胞毒性细胞,MTT比色细胞增殖是化验。IGR-OV1细胞被镀在96 - 20000细胞/盘子和孵化,在200年的依恋,μL介质与贝伐单抗。
两种类型的毒性进行了分析:短期(在2小时孵化,n = 5)和长期(孵化在24和48小时,n = 8)贝伐单抗,在浓度为0.0125毫克/毫升,0.5毫克/毫升,2.5毫克/毫升,5.0毫克/毫升,10.0毫克/毫升10% FCS的媒介。
四唑染色MTT (bromure de 3 - (4、5 dimethylthiazol-2-yl) 2、5-diphenyl四唑)(Sigma-Aldrich化工有限公司、Saint-Quentin、法国)试验是用来评估不同药物的细胞毒性浓度,根据莫斯曼(描述的过程10]。MTT IGROV1-p和IGROV-DXR执行测试。细胞治疗与洗涤剂Triton x - 100 1%磷酸缓冲盐(PBS)的积极控制每组实验。
贝伐单抗孵化后,细胞被洗PBS和MTT被添加在0.5毫克/毫升的浓度。4小时孵化后,执行甲瓒提取和测量数量与ELISA colorimetrically 570海里使用multiwall-scanning荧光谱仪(MRX二世标,丹尼克斯技术)。生存的细胞的百分比与贝伐单抗治疗与否是规范化的控制,使用公式:
细胞生存能力(%)= [(Abs(样本)——Abs (pos. ctrl)) / (Abs(底片。ctrl) - Abs (pos. ctrl)))×100
实验进行了一式三份。
人类大肠癌癌异种移植轴承小鼠模型
在这项研究中使用来自人类肿瘤异种移植模型集合,建立CReMEC项目:CR-IGR016P主要异种移植。从病人肿瘤的起源,是一个女人,与卵巢转移的乙状结肠腺癌。样品是直接源自于原发肿瘤。
CR-IGRO16P组织切成小块。这些组织在皮下植入女性Foxn1nu cd -裸小鼠鼠标侧翼。这些老鼠从动物兽医资源购买,古斯塔夫Roussy研究所IFR54(瑟、法国)。老鼠被安置在标准实验室无菌条件下,用无菌水和定期消毒(gammairradiated)提供的食物随意在12 h / 12 h光/暗周期在研讨会°C的温度。麻醉诱导与5%和2.5%异氟烷在空气中异氟烷和维护。当肿瘤直径达到了2 - 3厘米,采样和切成小块来获得第2通道模型,用于研究。动物治疗按照欧洲委员会关于实验动物保健和使用的标准。实验协议批准了当地动物实验委员会(N 26°, Ministere de la矫揉造作的et de l 'Enseignement特级)。
伊立替康和SN-38药代动力学研究
六个星期老男性裸体小鼠(20 - 30 g)从动物兽医资源购买的古斯塔夫Roussy研究所(IGR瑟、法国)。48老鼠形成两组,健康小鼠和人类结肠直肠肿瘤癌(CR-IGR016P)轴承老鼠。水和食物是可以随意在整个研究。48个裸体小鼠接受伊立替康(40毫克/公斤口服3天)单独或5毫克/公斤intraperitonealy贝伐单抗天后1和3。的实验中,动物与异氟烷麻醉,血液通过心脏穿刺收集和老鼠被颈椎脱位牺牲。肿瘤从周围的连接组织,提前在液态氮冷冻和储存在- 80°C。
伊立替康和SN-38试验,400年肝素化μl血液收集管为0.25,0.5,1,2,3,4和8 h后伊立替康管理,三个老鼠每点。血液样本在6200 g离心10分钟。等离子体被收获到清洁管和立即分析。
也做过相同的实验与人类大肠癌癌轴承老鼠。
伊立替康和SN-38血浆浓度测定用高效液相色谱荧光检测器的耦合。进行分析,100μl等离子体与200μl混合乙腈与醋酸酸化(20:1 (v / v)]。混合物是涡10秒,然后离心10分钟在室温下5000 rpm。氮的上层清液蒸发受到温和流在30°C。的残留于200年重组μl 0.0025四丁基铵/乙腈/三氟乙酸混合物(233:100:1 (v / v / v)]和漩涡,持续10秒。一个整除40μl随后注入色谱系统。
伊立替康或SN-38测量使用Nucleosil C18柱(4.6×125毫米,3μm) (Interchim、Montlucon、法国)。流动相是构成tetra-butyl-ammonium和三氟乙酸(40000:1 (v / v)],乙腈和甲醇(73:22:5 (v / v / v)]在1.2毫升/分钟的流量。洗脱液监测在260海里。
伊立替康和SN-38标准曲线是正确描述未加权的最小二乘线性回归。在伊立替康(或SN-38)血浆浓度范围的10 - 2500 ng / mL (5 - 1250 ng / mL),决定系数(R2)的校准曲线仍然> 0.99。基于质量控制样品,总体相对SD精度(索引)不到12%。伊立替康和SN-38下限的量化是10和5 ng / mL。准备三个伊立替康和SN-38质量控制:低(30和15 ng / mL),中等(750和375 ng / mL)和高(2000和1000 ng / mL)。
伊立替康和SN-38浓度在使用相同的HPLC和UV法测定肿瘤。进行分析,肿瘤是大约25 mm3的切成小块,然后与100μl乙腈/水混合物混合(1:1 (v / v))。伊立替康和SN-38然后提取如上所述。
校准标准的伊立替康和SN-38准备在无毒肿瘤强化集中标准获得浓度范围的伊立替康(或SN-38) 0.5至50 ng / g(0.25 -25纳克/克)。无毒也准备了三个伊立替康和SN-38质量控制肿瘤强化集中标准:低(1.5和0.75 ng / g),中等(7.5和3.75 ng / g)和高(40 - 20 ng / g)。伊立替康和量化SN-38下限分别为0.5和0.25纳克/克。
数据分析
因为每个动物提供只有一个血液样本,数据从动物相同的组集中使用一个天真的平均数据方法(11]。
每个治疗数据分别进行分析,给等离子体和肿瘤的价值平均浓度。使用WinNonline 5.2 noncompartmental分析软件(Pharsight山景,CA)。等离子体和肿瘤伊立替康和SN-38浓度与时间曲线是用来确定意味着最大浓度(C马克斯),时间达到最大浓度(t马克斯),平均停留时间外推到无穷(MRT0 -¥),面积浓度时间曲线外推到无穷(AUC0 -¥),面积第一力矩曲线外推到无穷(AUMC0 -¥),终端半衰期(t1/2),明显全身间隙(克拉普),表观分布容积(Vapp)和槽浓度(碎屑)。伊立替康和在肿瘤表达SN-38 tumoral组织的100毫克。
意味着区域浓度时间曲线(AUC)梯形法计算了从0到最后浓度时间点。伊立替康和SN-38槽浓度被定义为最后一个可量化的浓度。
伊立替康和SN-38最大槽浓度比较使用学生的学习任务和0.05的显著水平。AUC (Tlast)的两组(伊立替康或SN-38 +贝伐单抗与伊立替康或独自SN-38)比较使用水斗的方法(12];零假设被拒绝如果一个¢一ZobsA一个¢一大于1.96。当T马克斯和半衰期是独一无二的价值,他们的变化描述了贝伐单抗预处理后,但无法进行统计检验。
MTT可行性测试
贝伐单抗在IGROV1细胞增殖的影响量化与MTT试验来确定可行的细胞的数量。当IGROV1孵化与贝伐单抗短时期内serum-supplemented媒体(2小时),观察细胞生存能力没有统计上的显著差异。
显著降低IGROV1细胞数量是观察到贝伐单抗浓度为10.0毫克/毫升(P < 0.001)细胞中有10% FCS孵化24小时与贝伐单抗;在无血清条件下,细胞数量显著减少IGROV1贝伐单抗浓度为2.5毫克/毫升10.0毫克/毫升(P < 0.05)。
贝伐单抗与IGROV1细胞培养48小时时,显著降低IGROV1细胞数量是观察到贝伐单抗浓度为10.0毫克/毫升(P < 0.001)细胞中有10% FCS孵化与贝伐单抗48小时;在无血清条件下,细胞数量显著减少IGROV1贝伐单抗浓度为2.5毫克/毫升10.0毫克/毫升(P < 0.001)。贝伐单抗的浓度必须在serumcontaining条件下诱导细胞死亡是高于在无血清条件下由于血清VEGF与贝伐单抗结合,使其失去活性。
贝伐单抗对阿霉素的影响细胞内的积累
贝伐单抗的修改P-gp活动在体外被阿霉素的强度测量细胞内积累在IGROV1-p和IGROV1-DXR细胞培养在贝伐单抗的存在。显著增加阿霉素的吸收存在剂量依赖的相关性IGROV1——DXR细胞观察孵化时贝伐单抗在浓度为1.0毫克/毫升(* * * P < 0.001;n = 3)和5.0毫克/毫升(* * * P < 0.001;n = 3)相比IGROV1-DXR细胞非用贝伐单抗治疗控制细胞。在IGROV1-p细胞,略有增加阿霉素的吸收通过观察细胞与贝伐单抗在1.0毫克/毫升的浓度(* P < 0.05;观察n = 3),而没有区别在5.0毫克/毫升,而控制细胞。P-gp抑制剂治疗,维拉帕米,10μM导致显著增加阿霉素在IGROV1-DXR吸收细胞和IGROV1-p细胞相比,控制细胞(* * * P < 0.001;n = 3) (图1和表1)。
图1:阿霉素积累IGROV1-DXR细胞培养在贝伐单抗的存在(在1和5毫克/毫升)(n = 3) * p < 0.05;* * * p < 0.001
| 控制 | 贝伐单抗1毫克/毫升 | 贝伐单抗5毫克/毫升 | 维拉帕米10µM | |
|---|---|---|---|---|
| PAR-cells Doxorubucin Acumulation(平均数±标准差) | 1933±62 (n = 3) | 2054±35 * (n = 3) |
1900±37 (n = 3) |
2399±9 * * * (n = 3) |
| DXR-cells Doxorubucin Acumulation(平均数±标准差) | 357±7 (n = 3) | 890±74 * * * (n = 3) |
1283±24 * * * (n = 3) |
1432±9 * * * (n = 3) |
* p < 0.05;* * * p < 0.001
PAR-cells =父母非细胞系
DXR-cells = Doxorubicin-resistant细胞系
表1:阿霉素积累IGROV1-DXR细胞培养在贝伐单抗的存在(1毫克/毫升和5毫克/毫升)(n = 3)。
贝伐单抗预处理对等离子体的影响伊立替康和SN-38裸体小鼠的药物动力学参数
在表2和3据报道伊立替康和SN-38血浆药物动力学参数。
| 变量 | 老鼠仅接受伊立替康 | 老鼠收到伊立替康和贝伐单抗 | 概率 |
|---|---|---|---|
| C马克斯(ng / mL)±SD | 653±183 | 660±199 | NS |
| T马克斯(h) | 1 | 1 | |
| AUC±SD (ng * h /毫升) | 1716±162.7 | 1527±852.7 | NS (Z = 0.46 < 1.96) |
| 比AUC | 0.89 | ||
| 槽浓度(ng / mL)±SD | 6±0.34 | 12.3±4.79 | NS |
| 半衰期(h) | 1.14 | 1.26 |
表2。贝伐单抗的影响(5毫克/公斤)预处理对伊立替康的血浆药物动力学参数(40毫克/公斤)在裸小鼠(noncompartimental分析)。
| 变量 | 老鼠仅接受伊立替康 | 老鼠收到伊立替康和贝伐单抗 | 概率 |
|---|---|---|---|
| C马克斯(ng / mL)±SD | 626±172 | 844±175 | NS |
| T马克斯(h) | 0.5 | 0.25 | |
| AUC±SD (ng * h /毫升) | 1286±69.8 | 1257±120 | NS (Z = 0.26 < 1.96) |
| 比AUC | 0.98 | ||
| 槽浓度(ng / mL)±SD | 3.7±1.4 | 14.5±5.8 | S (p = 0.03 < 0.05) |
| 半衰期(h) | 0.91 | 1.59 |
表3。贝伐单抗的影响(5毫克/公斤)预处理后血浆的药物动力学参数SN - 38伊立替康(40毫克/公斤)政府在裸小鼠(noncompartimental分析)。
伊立替康最大浓度(C马克斯)是观察到T马克斯= 1 h后管理。
为两组,贝伐单抗并不影响所需的时间达到最大血浆浓度。伊立替康AUC bevacizumab-treated小鼠组低1.12倍;虽然没有统计学意义的差异。
伊立替康终端有半数住在bevacizumab-treated老鼠群长1.11倍,增加并不显著。
SN-38 C马克斯观察值分别为0.5小时和0.25小时仅在伊立替康治疗组和贝伐单抗,预防组。
SN-38 C马克斯在bevacizumab-pretreated组高。贝伐单抗T预处理的影响马克斯和C马克斯,但不显著。AUC没有修改和终端有半数住在bevacizumab-treated老鼠长1.71倍组。
槽浓度SN-38 3.9倍bevacizumab-pretreated组高于对照组(p < 0.05)。
贝伐单抗政府修改伊立替康等离子体和肿瘤药代动力学参数在人类大肠癌癌异种移植小鼠轴承。
在等离子体
在表4和表5有报道称伊立替康和SN-38血浆药代动力学参数。
| 变量 | 老鼠仅接受伊立替康 | 老鼠收到伊立替康和贝伐单抗 | 概率 |
|---|---|---|---|
| C马克斯(ng / mL)±SD | 855±437 | 1706±217 | S (p = 0.04 < 0.05) |
| T马克斯(h) | 1 | 1 | |
| AUC±SD (ng * h /毫升) | 1908±415 | 3323±1218.4 | 年代(Z = 2.54 > 1.96) |
| 比AUC | 1.74 | ||
| 槽浓度(ng / mL)±SD | 63.5±58.1 | 8.4±3.2 | NS |
| 半衰期(h) | 3.87 | 0.88 |
表4。贝伐单抗的影响(5毫克/公斤)预处理对伊立替康的血浆药物动力学参数(40毫克/公斤)在人类大肠癌癌裸鼠轴承(noncompartimental分析)。
| 变量 | 老鼠仅接受伊立替康 | 老鼠收到伊立替康和贝伐单抗 | 概率 |
|---|---|---|---|
| C马克斯(ng / mL)±SD | 596±179 | 749±472 | NS |
| T马克斯(h) | 1 | 1 | |
| AUC±SD (ng * h /毫升) | 1109±82.8 | 1154±102.7 | NS (Z = 0.21 < 1.96) |
| 比AUC | 0.96 | ||
| 槽浓度(ng / mL)±SD | 14.6±6.8 | 30.3±19.04 | NS |
| 半衰期(h) | 2.62 | 1.35 |
表5所示。贝伐单抗的影响(5毫克/公斤)预处理后血浆的药物动力学参数SN - 38伊立替康(40毫克/公斤)政府在人类大肠癌癌裸鼠轴承(noncompartimental分析)。
有趣的是,伊立替康,C马克斯2倍bevacizumab-pretreated小鼠组,对照组相比,这种增长是具有统计学意义(p = 0.04)。伊立替康AUC还高1.74倍统计bevacizumab-treated组(Zobs = 2.54 > Z (表4)。
半衰期是bevacizumab-pretreated组虽然不显著下降。
SN-38 T马克斯伊立替康管理后观察1 h。关于SN-38 C马克斯和AUC两组之间没有统计上的显著差异被发现。
在肿瘤
在表6和7据报道伊立替康和SN-38肿瘤药代动力学参数。
| 变量 | 老鼠仅接受伊立替康 | 老鼠收到伊立替康和贝伐单抗 | 概率 |
|---|---|---|---|
| C马克斯(ng / mL)±SD | 1294±142 | 1797±196 | NS |
| T马克斯(h) | 2 | 1 | |
| AUC±SD (ng * h /毫升) | 5982±3513.9 | 7818±468.8 | NS (Z = 1.14 < 1.96) |
| 比AUC | 1.31 | ||
| 槽浓度(ng / mL)±SD | 231.2±127.5 | 698.4±305.6 | NS |
| 半衰期(h) | 2.18 | 3.74 |
表6所示。贝伐单抗的影响(5毫克/公斤)预处理对伊立替康的肿瘤药物动力学参数(40毫克/公斤)在人类大肠癌癌裸鼠轴承(non-compartimental分析)。
| 变量 | 老鼠仅接受伊立替康 | 老鼠收到伊立替康和贝伐单抗 | 概率 |
|---|---|---|---|
| C马克斯(ng / mL)±SD | 252±155 | 371±121 | NS |
| T马克斯(h) | 4 | 4 | |
| AUC±SD (ng * h /毫升) | 1345±153.5 | 1868±224 | NS (Z = 1.57 < 1.96) |
| 比AUC | 1.39 | ||
| 槽浓度(ng / mL)±SD | 110±82.8 | 230.9±93.6 | NS |
| 半衰期(h) | 3.34 | 5.86 |
表7所示。贝伐单抗的影响(5毫克/公斤)预处理后肿瘤的药物动力学参数SN - 38伊立替康(40毫克/公斤)政府在人类大肠癌癌裸鼠轴承(noncompartimental分析)。
伊立替康C马克斯和AUC bevacizumab-treated组高出1.3倍比控制。这种差异没有统计学意义。
所示表5,时间必须达到最大浓度是1 h短bevacizumab-pretreated小鼠组与高C马克斯值,比仅在伊立替康治疗组。
SN-38 C观察4 h后政府伊立替康的两组,但没有发现统计上的显著差异。关于SN-38 AUC bevacizumab-treated组,1.4折高于不治疗组中,这种差异没有统计学意义。
等离子体与肿瘤之间的关系伊立替康在小鼠接受贝伐单抗治疗浓度
每一点,伊立替康等离子体和肿瘤与伊立替康和贝伐单抗治疗组小鼠的平均值除以伊立替康等离子体和肿瘤与伊立替康治疗组小鼠的平均值。
在图2,等离子体的价值比伊立替康增加0.5 h,伊立替康管理和减少8 h和肿瘤的价值比伊立替康增加8 h后伊立替康。
图2:意思是等离子体和肿瘤伊立替康的浓度比。
等离子体与肿瘤之间的关系SN-38在小鼠接受贝伐单抗治疗浓度
SN-38等离子体和肿瘤与伊立替康和贝伐单抗治疗组小鼠的平均值除以SN-38等离子体和肿瘤与伊立替康治疗组小鼠的平均值。
所示图3,更高的SN-38等离子体价值比率被观察到两个点,3和4 h。更高的SN-38肿瘤价值比率被观察到两个点,0.25 h和8 h。
图3:意思是等离子体和肿瘤SN38浓度比率。
贝伐单抗对伊立替康的影响新陈代谢SN-38
SN-38等离子体和肿瘤的意思是浓度除以伊立替康等离子体和肿瘤小鼠的平均浓度与贝伐单抗治疗与否。这些等离子体比率显示。
在图4观察等离子体,高SN-38形成早期没有贝伐单抗的采样时间(0.25和0.5 h),和他们的比率减少抽样末次反映高SN-38形成的贝伐单抗为后期取样时间(4 h和8 h)。
图4:比率SN38意味着等离子体浓度除以伊立替康意味着等离子体浓度没有和贝伐单抗的存在。
这些肿瘤比率如下所示。
在图5,观察肿瘤SN-38形成更高的贝伐单抗的* 0.25 h, 2 h在采样时间和他们的比率没有贝伐单抗在后来相比较小。
图5:SN - 38的比率是肿瘤浓度除以伊立替康是肿瘤浓度没有和贝伐单抗的存在。
贝伐单抗的影响在SN-38并非常数在等离子体和肿瘤形成。
药物抗性是癌症治疗的主要限制。抵抗常规药物包括ATP结合盒(ABC)转运蛋白和减少的疗效化学疗法。
许多药物现在已经证明了他们在癌症的治疗效率。然而,由于药物暴露水平之间的相关性,疗效和不良反应13),很难增加药物剂量学不增加副作用的风险。因此重要的是要研究其他方法增加功效试图维持肿瘤细胞内的药物已进入并通过控制其流出。这就是为什么看起来有趣的在最近的协议用药物来调节活动抗癌协会旨在防止流出细胞维持细胞浓度高。
本研究的目标之一是评估与贝伐单抗可以修改预处理在体外细胞内阿霉素浓度的增加P-gp功能的调制。
我们使用两个细胞系来源于人类卵巢癌,原线IGROV1-p (doxorubicin-sensitive)和IGROV1-DXR (overexpressing P-gp)。
体外IGROV1-DXR中我们观察到癌细胞,显著增加细胞内积累的阿霉素预处理与贝伐单抗后(Pglycoprotein衬底)。这表明耐阿霉素已经被贝伐单抗衰减由于其P -的功能的调制效果糖蛋白。类似的效果观察与维拉帕米(已知的抑制剂P-gp和积极的控制在我们的测试)。贝伐单抗能直接与P-gp和调节其功能。研究乳腺癌或肺癌异种移植轴承裸体小鼠显示生物活性的抑制VEGF通过贝伐单抗可以改善吸收和流行性流感减毒活疫苗化疗的效果,从而增加紫杉醇的吸收(PTX),导致其intra-tumor紫杉醇的浓度更高,导致渗透率降低和肿瘤体积(14]。一个案例研究报告的resensitization paclitaxel-resistant紫杉醇治疗转移性乳腺癌患者通过增加贝伐单抗化疗方案(15]。
此外,类似的结果已经被观察到我们的团队与西妥昔单抗预处理后,另一个直接针对表皮生长因子受体的单克隆抗体。这可能部分解释更高浓度的细胞毒性药物在癌症细胞,主要是那些基质的2216]。
我们进行了体内比较药代动力学研究伊立替康和SN38(已知P-gp基质(17)在等离子体和肿瘤结直肠肿瘤移植轴承裸小鼠,是否使用贝伐单抗在伊立替康管理。
我们观察到显著增加血浆药代动力学参数的伊立替康与bevacizum ab预处理后,尤其是AUC,以及C马克斯这是肿瘤小鼠的两倍高于不使用老鼠。在先前发表的研究显示在[18,19P-gp函数的调制,将导致增加了C马克斯,这个跨膜泵与结直肠癌细胞vegf在个人(20.,21),强化更多驱逐减少和细胞毒性药物的血浆浓度。这也可以解释缺乏统计学意义的结果在裸小鼠也许是因为P-gp表达式的低水平与肿瘤的小鼠组。
在肿瘤中,我们观察到与伊立替康AUC的增加和C马克斯(1.3折)和SN-38 AUC(1.4折)与贝伐单抗预处理后。伊立替康AUC肿瘤增长,尽管统计非重要,可以因增加分布到组织。
尽管缺乏统计显著增加,这可能表明,伊立替康及其活性代谢物SN-38略好分布在结直肠异种移植结合贝伐单抗。此外,T马克斯减少可能反映了肿瘤伊立替康的渗透性的增加。这可以解释部分的调制函数的P-gp贝伐单抗肿瘤。此外,2015年进行的一项研究[22),对人类大脑xenograft-bearing老鼠(胶质母细胞瘤)证明了pretreatement贝伐单抗可能略有增加肿瘤的渗透temozolomide(小基质P-gp),通过一个机制包括抑制P-gp [22]。
文档贝伐单抗是否可以修改通过形成SN-38伊立替康的新陈代谢,我们评估了等离子体和肿瘤小鼠的平均浓度比伊立替康有或没有贝伐单抗(图4和图5)。这个评估显示,在等离子体第一采样时期,贝伐单抗预处理导致减少SN-38形成肿瘤而导致其增加(0.25和2 h)。
结果可以用这一事实来解释贝伐单抗调节P-gp功能,促进伊立替康扩散到肝脏和肾脏等组织。高伊立替康和SN-38由于贝伐单抗的分配导致第二个两分子浓度的增加4 h采样时间。
这一研究获得的结果表明,伊立替康分布是影响最大的一步,与贝伐单抗的预处理。文献中提到的另一个机制是指增加结合细胞毒性药物的浓度与贝伐单抗肿瘤细胞。瞬态补偿贝伐单抗血管生成的导致血管通透性的增加和减少肿瘤水肿,改善co-administrated药物在癌症细胞的分布和细胞死亡增加23,24]。事实上,更好的诱导细胞凋亡是建议由于政府与伊立替康的贝伐单抗,单药治疗相比,导致细胞死亡中增加恶性肿瘤细胞(25]。
一个小药代动力学substudy AVF2170g III期临床试验,建议增加贝伐单抗化疗方案bolus-IFL(伊立替康/研究者用/亚叶酸)转移性结直肠癌患者并没有改变等离子体浓度的伊立替康(26),但SN-38的浓度变化,平均高出33%的病人接受贝伐单抗结合bolus-IFL,相比bolus-IFL孤独患者。
这项研究于2005年执行Gaudreault et al。27),贝伐单抗对伊立替康的药物动力学的影响,SN-38天真在猕猴身上,研究者用接收萨尔兹方案(伊立替康/研究者用/亚叶酸),得出的结论是,贝伐单抗并不影响相关药物的药物代谢动力学。因为这对健康的动物研究,可以认为这一结论与我们的研究结果是一致的关于缺乏两种药物的药代动力学相互作用患肿瘤的老鼠。然后,假设存在一个先进的肿瘤的surexpression P-gp可以修改伊立替康的发生的必要条件和SN-38贝伐单抗药物动力学。
南Qi et al。28)在非小细胞肺癌患者联合使用紫杉醇(Pgp基质)和贝伐单抗快速显示分布的紫杉醇与消除半衰期的胸膜液体。平均停留时间增加紫杉醇的贝伐单抗的存在。他们认为,这种快速分布称为血管渗透性的变化;自降低渗透率将有利于紫杉醇剩下的目标组织。
我们的结果也显示增加伊立替康的消除半衰期和SN38肿瘤在贝伐单抗的存在
除了其抗癌活性,贝伐单抗可以调节P-gp功能和改善P-gp底物药物的功效,如阿霉素。贝伐单抗SN-38等离子体槽浓度明显增加小鼠和伊立替康AUC和C马克斯等离子体在小鼠体内轴承人类大肠癌癌。这个结果可以打开新的研究视角在MDR现象单克隆抗体的作用及其与基质的药物。
我们感谢Cremec财团允许异种移植模型的建立CR-IGR016P(项目C.Re.M.E.C。)和西蒙·奥巴赫博士对她的帮助。
实验协议批准由当地动物实验委员会(N 26°, Ministere de la矫揉造作的et de l 'Enseignement特级)。
作者宣称没有利益冲突。
