研究与评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志
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e-ISSN: 2320 - 0812
1Amrutvahini药学院药物分析系，印度马哈拉施特拉邦艾哈迈德纳格尔区，塔尔:桑加姆纳
2印度马哈拉施特拉邦艾哈迈德纳格尔区，塔尔:桑甘纳尔，阿姆鲁特瓦希尼药学院质量保证技术系
收到日期:18/07/2018;接受日期:08/08/2018;发表日期:20/08/2018
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对乙酰氨基酚(PAR)，盐酸曲马多(TRM)和多潘立酮(DOM)用于急性肌肉骨骼疼痛。生物样品中微量药物的定量方法有待优化。色谱分离采用C18柱，流动相为甲醇:磷酸盐缓冲液(50:50 v/v)，流速为1 ml/min，紫外检测波长为272 nm。对大鼠进行体内药代动力学研究，分别口服扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮(1 mg/kg)后采集血液。对乙酰氨基酚、盐酸曲马多和多潘立酮的滞留时间分别为3.3、5.3和8.9 min。对分析结果进行了静态验证。PAR、TRM、DOM在250 ~ 1500、25 ~ 150、25 ~ 150 μg/mL范围内呈线性关系，准确度分别为100.12、99.87、100.4%，片剂分析准确度分别为99.88、100.28、99.6%。该方法成功应用于PAR、TRM、DOM的口服药动学研究。对乙酰氨基酚、盐酸曲马多和多潘立酮在3、4和6时的最大浓度(Cmax)分别为156.36、335.15和55.34 (ng/mL)，半衰期分别为3.75、5.8和4.8 h。该方法已成功应用于药代动力学研究。
化学上，扑热息痛(图1一个)为N-(4-羟基苯基)乙酰胺。它是一种镇痛解热剂。它能有效治疗轻至中度疼痛，如头痛、神经痛和肌肉-骨骼源性疼痛[1]。扑热息痛的半衰期为1 ~ 3小时，生物利用度为70 ~ 90%。化学上，盐酸曲马多(图1 b)是2-(二甲氨基甲基)-1-(3-甲氧基苯基)环己醇。盐酸曲马多是一种中枢镇痛药，用于治疗中度至重度疼痛。盐酸曲马多通过与μ-阿片受体结合并作为5 -羟色胺-去甲肾上腺素再摄取抑制剂起作用。盐酸曲马多激动剂μ-阿片受体[2]。盐酸曲马多半衰期6.3 ~ 7.4小时，生物利用度70 ~ 75%。Domperidone (图1 c)化学上是5-氯-1-[1-[3-(2-氧- 1,3 -二氢苯并咪唑-1-基)丙基]-4-哌啶基]- 1,3 -二氢苯并咪唑-2- 1。DOM是多巴胺受体的特异性阻断剂。它加速胃肠蠕动，引起催乳素释放，并被用作止吐剂和多巴胺能机制研究的工具(图1) [2，3.]。
图1:a.扑热息痛b.曲马多盐酸和c.多潘立酮的化学结构。
采用高效液相色谱法测定PAR、TRM和DOM [4]和稳定性指示方法有报道[5，6]。对乙酰氨基酚输注对白化Wistar大鼠亚急性毒性研究测定PAR [7]。这三种药物的生物分析方法的开发和验证及其药代动力学应用尚未实现。最广泛接受的方法验证指南是ICH和USFDA指南Q2 (R1)，该指南用于制药和医学科学[8-11]。
仪表
高效液相色谱法(Water 600控制器)仪器配备型号为6CE的在线脱气器AF，往复泵，Rheodyne 7725i手动进样器(20 μl固定回路)和HPLC注射器(100UI)，并配有UV-Vis检测器。采用rp -18, Inertsil ODS色谱柱(250 × 4.6 mm × 5 μ) (5 μm粒径)分离定量。检测器设置在254 nm。采用HANNA pH计测定流动相的pH值。
材料与方法
PAR、TRM和DOM均来自印度罪人Glenmark Pharmaceutical LTD。使用的磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和氯化钠分别为AR级和HPLC级。甲醇为高效液相色谱级。血浆取自实验动物。
方法优化
采用甲醇:磷酸盐缓冲液(Dibasic)组成的流动相，pH为4 (50:50 v/v)，流速为1 ml min-1，对化合物进行等密度分离。注射量固定为20 μl。流动相用0.45 μ的膜过滤器过滤。选择这种方法的原因是，它比其他流动相具有更好的分辨率。该方法在色谱条件(图2）.
图2:刺突血浆中扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮的代表性色谱分析。标准溶液的制备。
PAR、TRM和DOM的原液分别在100 ml甲醇中称重10 mg。在流动相中进一步稀释得到PAR、TRM和DOM的工作标准溶液，浓度范围为2.5 ~ 12.5 μg/ml、0.25 ~ 1.25 μg/ml和0.25 ~ 1.25 μg/ml。
血浆的制备
保存的大鼠血浆样品在室温下解冻后处理，4000rpm离心10min，移液0.5 ml到10ml聚丙烯管中，加入乙腈2.0 ml。将混合物短暂涡旋混合，室温静置5分钟后，4000rpm离心5分钟。小心地将上清移入管中，注入高效液相色谱系统。所得样品在完善的色谱条件下进样。
检测方法的应用
上述方法成功用于分析血浆样品中PAR、TRM和DOM的药代动力学研究。应用该方法在片剂中发现的PAR、TRM和DOM如下图所示。精密度的% RSD <2，这证实该方法足够精确(图3）.
图3:刺突血浆中对乙酰氨基酚、盐酸曲马多和多潘立酮片剂分析的代表性色谱。
特异性
生物分析方法在可能出现的成分存在下测量和区分分析物的能力。用于生物分析方法开发和验证的PAR、TRM和DOM以及本方法在生物分析研究的色谱条件下被接受(图4）.
图4:空白等离子体线性代表性色谱图。
PAR、TRM和DOM在2.5 ~ 12.5、0.25 ~ 1.25和0.25 ~ 1.25 μg/mL范围内线性良好，相关系数均超过0.999。结果表明，在浓度范围内，PAR、TRM和DOM的峰面积比与相应的浓度有很好的相关性表1。
| 参数 | 票面价值 | TRM | DOM |
|---|---|---|---|
| 线性范围 | 2.5 - -12.5µg / ml | 0.25 - -1.25µg / ml | 0.25 - -1.25µg / ml |
| 回归方程 | Y =51.96x - 25.4 | y = 4.88 - -3.33 | y = 13.6 -523 |
| 相关系数(r2) | 0.999 | 0.999 | 0.999 |
| 坡 | 51.96 | 4.88 | 13.6 |
| 截距 | 25.4 | -3.33 | -5.23 |
表1:线性结果。
精度
采用血浆回收率百分比来确定所提方法的准确性。测定血浆注射药物时PAR、TRM、DOM在400、500、600 μg/mL、40、50、60 μg/mL和10、15、20 μg/mL三个浓度水平下的回收率。回收率和RSD的计算方法见表2。
| 浓缩的。(µg / mL) | 添加的std药物(µg/mL) | 回收率(µg/mL) | %的复苏 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM |
| 500 | 50 | 15 | 400 | 40 | 10 | 399.9 | 39.5 | 9.8 | 100.08 | 99.75 | 100.3 |
| 500 | 50 | 15 | 500 | 50 | 15 | 501.1 | 50.2 | 15．5 | 100.45 | 100.06 | 100.4 |
| 500 | 50 | 15 | 600 | 60 | 20. | 599.5 | 59.1 | 20.8 | 99.85 | 99.8 | 100.5 |
表2:准确性研究结果。
精度
通过在HPLC柱上注射3个重复进行重复性和日间精密度研究。所有测试浓度的相对标准偏差均低于2.0%表3。
| 验证参数 | %的意思 | 堡。 | % R.S.D | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM | |
| 可重复性 | 100.2 | 100.73 | 100.18 | 0.1 | 0.945 | 0.256 | 0.099 | 0.93 | 0.257 |
| 日复一日 | 99.83 | 100.1 | One hundred. | 0.251 | 0.3257 | 0.19 | 0.252 | 0.325 | 0.19 |
| 分析师对分析师 | 100.14 | 100.08 | 100.05 | 0.075 | 0.476 | 0.1761 | 0.074 | 0.475 | 0.1760 |
表3:岁差结果。
鲁棒性
稳健性是通过根据ICH指南故意改变色谱条件来评估的。在流动相pH (pH 4±0.1)变化的条件下考察了该方法。它体现在表4。
| 流动相pH的变化 | %的意思 | 堡。 | % R.S.D | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM | 票面价值 | TRM | DOM | |
| (pH值3.9) | 100.27 | 101.03 | 100.21 | 0.29 | 0.98 | 0.542 | 0.28 | 0.97 | 0.541 |
| (pH值4.1) | 100.15 | 100.65 | 100.41 | 0.1616 | 1.15 | 0.720 | 0.1613 | 1.14 | 0.717 |
表4:稳健性结果。
药代动力学研究
该动物研究已获得Sangamner Amrutvahini药学院机构动物伦理委员会批准(批准号:CPCSEA/1153/PO/AC/08)。验证的反相高效液相色谱法成功应用于PAR、TRM和DOM在大鼠体内的药动学研究(表5）.250 ~ 300只Wistar大鼠自由饲养。对健康女性受试者(n=9)进行了药物代动力学研究。分别于给药前0、1、2、3、4、6、8、12、24h分别给药32.5、37.5、10 mg扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮，经EDTA采集管取血(1 mL)。在4°C下，3000 rpm离心10 min，收集血浆。收集后立即将血浆样品进行速冻，并在-70°C保存直至使用。血浆样品与药物和处理按照液-液萃取程序前面描述的。采用Kinetica 5.0(Thermo scientific)软件对扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮的血药浓度-时间数据进行非区隔分析。将该方法应用于大鼠药代动力学研究。给大鼠单次口服PAR、TRM和DOM (1 mg/kg)，在给药后24小时内测定其血药浓度。 The mean plasma concentration–time curves after an oral administration of PAR, TRM and DOM (1 ng/ml) is shown in图5药代动力学参数综述见表6。曲线得到PAR、TRM和DOM的Cmax分别为156.36、335.15和55.15 ng/ mL, Tmax分别为3、4和6 h。所示图6。
| 参数 | TRADOL-PD | ||
|---|---|---|---|
| 票面价值 | TRM | DOM | |
| 均值(%) | 99.88 | 100.28 | 99.6 |
| 堡。 | 0.09165 | 0.4386 | 1.5307 |
| R.S.D. (%) | 0.09176 | 0.4373 | 1.5368 |
表5:片剂分析方法。
图5:大鼠血浆中扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮的代表性色谱仪。
| 参数 | 票面价值 | TRM | DOM |
|---|---|---|---|
| Cmax (ng / mL) | 156.36 | 335.15 | 55.34 |
| 达峰时间(小时) | 3. | 4 | 6 |
| AUC0-last (ng / ml.h) | 1072552500 | 2742600000 | 469687500 |
| AUC0-tot (ng / ml.h) | 1251699667.3 | 3821515685.2 | 640304279 |
| AUCextra (ng / ml.h) | 179147167.3 | 1078915685.2 | 179147167.3 |
| t1/2(小时) | 3.75 | 5.8 | 4.8 |
表6:药代动力学研究。
图6:扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮的大鼠平均血浆浓度-时间谱。
本研究建立了一种简便、准确、精密度高的反相高效液相色谱法同时测定扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮的方法。该方法以甲醇和pH为4的磷酸盐缓冲液为流动相。所建立的方法具有特异性，对乙酰氨基酚、盐酸曲马多和多潘立酮洗脱时间短(<10 min)，不受空白基质干扰。扑热息痛、盐酸曲马多和多潘立酮单次口服对患者无明显影响。该方法已成功应用于PAR、TRM和DOM在大鼠体内的药动学研究。计算的药代动力学参数包括口服给药可延长药物在大鼠体内的生物半衰期(t1/2)。Tmax值相当高。最佳口服剂量的最大血药浓度(Cmax)较小。该方法在生物等效性、生物利用度和药物相互作用研究中具有广泛的应用前景。
标准PAR、TRM和DOM参考标准由Glenmark Pharmaceutical LTD、罪人和印度提供。作者对阿姆鲁特瓦希尼药学院管理层在本研究工作中的合作表示感谢。
