科技创新研究国际杂志
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| 赫曼特KrSharma1,Kavery Bajpai2,ShubangiShukla3,Reena Kumari4,SujeetK辛格5 学生生物系、Cytogene研发公司、Indira Nagar公司、Lucnow公司、U.P公司、INDIA-2260161 学生应用医学研究所Ghaziabad U.P,INDIA-2012012 Amity生物技术学院、Amity大学Lucknow、U.P、INDIA-2260103 Amity生物技术学院、Amity大学Lucknow、U.P、INDIA-2260104 Cytogene研发主任Indira Nagar Lucknow |
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从Chennai染色行业采集的微量样本被用作从Chennai本地市场购买的9种可变异细菌分离源,这些细菌可变色化纺织品染色反作用红色11排出样本中的细菌生长介质与染色相异并获取数聚变法使用织染反色化检验法用反色化红色11to屏幕高染色化菌株2菌株显示反应式红色11高度去色化,这些聚类存储供进一步使用基因组DNA2菌系隔离并识别为Enterocactersp16SRDNA分析GC-MS反射红11分析这些细菌显示5 8二氢甲安二聚AIDS的分子质量为145.2和6-N-benzylapthalen-2
关键字 |
| 流水分解变色分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法分解法 |
导 言 |
| 自史前时期以来 人用色素染毛、织物和其他对象自然物质主要取自植物、蔬菜或动物dys用于染色食品、化妆品、纸张、塑料和纺织业溶液通过物理吸附保留,用共价债券制造金属和盐类化合物许多化学染料越来越多地用于纺织染料行业,因为它们与自然染料相比在合成、坚固度和颜色多样性方面容易并具有成本效益。约10万商业染料制造中包括数种染料,如酸性、基础性、响应性、azo、 Diazo、Anthraquinone基元复合染料超过10万商业染料存在,全世界每年生产超过7x105公吨染料(1)纺织品和造纸行业残留染料槽合成染料释放成废流估计多达50%应用染色视类型而定,在织物染色过程期间会损耗排出物中 |
| Azo染色物特征为氮对氮双联结(-N=N-),占所有编织染色物的70%以上,并是最常用化工化染色物(2,3)因此,含有染料的工业排出物在排入环境前必须处理(4)多物理和化学方法,包括吸附、凝聚、降水、过滤和氧化等方法,都用于处理Azo染色排水量(5)但这些方法可能产生大量污泥或很容易因过度使用化学物而引起二次污染此外,市级治疗费用高开发染色去色化替代方法,如生物修复,可能合算,因为它在环境友好公开接受处理技术上的名声 |
三.材料方法 |
| Dye Reactive红色11染色从甘巴斯蒂彩色公司Pvt当地市场购买开奈编译染料溶液(50g/l)并过滤消毒dye以各种富集度添加到适当的生长介质中 |
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| 图1:分子染料结构 |
| 增量样本:取自清奈康奇浦南市MOHANDYES样本中的细菌生长适配生长介质并染色 |
| (b) 其它材料:所有化学品均具有分析级并购自HiMediaPvt孟买有限公司PCR放大所需材料(Taq聚合素、dNTPs素数)取自Pvt海得拉巴 |
| C)方法 |
| 1) 固介板染色去色细菌隔离 |
| 2)从织染排出物中筛选高染分色生物 |
| 3) 基因组DNA隔离高染分色化细菌 |
| 4) 16SrDNA分析识别细菌 |
| 5)GC-MS退化路径分析 |
| 染色去色细菌隔离固态介质 : 抽取样本取自清奈市Kanchipuram的MOHANSDYE |
| 流水样本先在LB介质中生长并染色后使用浓缩介质汤法接受浓缩培养技术染料浓度随后从50mg/l提高至250mg/l最小介质组成g/lC6H12O6(1.00)、K2HPO4(7.00)、KH2PO4(2.00)、Na3C6H5O7(0.50)、MnSO4(0.10)、(NH4)2SO4(1.00)最终文化贴LB和Minime媒体板并保留在37oColonies同时生长板块上,这些板块进一步用于在其他LB和Minimal板块上爬行隔离单聚居隔离器存储在冷室40C供进一步使用 |
| 基因组DNA隔离高染色化细菌现在这些成熟文化取2mlependorve管离心机基因组脱氧核素从所有选择样本分离单片脱氧核糖核酸装入电阻槽中,并用agarose凝胶(0.8%)检测脱氧核酸是否存在与ethium溴化gel光照机发现并发现基因组脱氧核糖核酸 |
| F16SRDNA分析识别细菌 |
| 聚变链反应:总容量为30ml的反应组合包括3ml10x缓冲,1mmddnTPs和16SRDNA初级值1ml5picomole/ml,3U/mlTaq聚变值5mg/ml,模版DNA280ng/ml5ml和19ml无菌蒸水19ml |
| 940C初始折叠5分钟,550C退火1分钟,720C扩展一分钟,720C最后一次延展10分钟含乙基溴染色后放大产品加装agarose凝胶,并分辨出100V并记录脱氧核糖核酸碎片 |
| PCR产品排序使用ABI 3130XL识别细菌隔离序列测试BLAST识别细菌隔离(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)(6) |
| G) 反应式红色11 |
| 降级产品提取程序:前100mlLB媒体与染料(250mg/l)一起制作,染料文化最优持续24小时370C最小介质对LB进行接种每一瓶浸泡工作持续到24号72号120有机化合物使用乙乙酸溶剂从最小介质使用分离漏入内嵌染料中提取下层染相消除后,乙乙酸乙酸乙酯相继通过保持室温夜间发生蒸发由此获取的有机化合物粉状残留物需接受GC-MS分析 |
| GC-MS分析:蒸发后获取的有机化合物残余物与控件并用GC-MS分析转至Sexicted分析工具设施IIT Madras和Chennai色谱和质谱获取、分析和预测 |
四.结晶 |
| 染色去色化细菌从污水采样分离出-Effleent采样首次在含50mg/l染料的LBBBroth中注射浓缩介质达250 mg/ml染色富集度 |
| 微量介质浸泡并夜间孵化最小媒体中成熟文化现在被串行稀释并贴上LBagar板块和最小媒体agar板块12聚居区选自最小媒体板块 并用最小媒体板块排行编译完成,获取聚居室留待深造并存储冷室图2和图3分别显示介质增长前后最小化文化 |
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| 筛选织染排出物高染分色生物体本解析中首先所有采摘聚居器都用5个测试管注射,5个测试管装有最小青料加染250mg/lLBBBroth中也使用同样的程序并制成单控试管读取去色化时间间隔0时24时48分72分96分染色检测取色计间段96小时结束时,在最小介质染料中观察到超过60%去色化,LB染料中观察到超过90%去色化 |
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| 基因组DNA隔离高染分色化细菌:DNA通过标准细菌基因组脱色协议从2个高染分色化聚C3和C4分离脱氧核糖核酸用0.8%agarose凝胶用gelephosis分析基因组脱氧核糖核酸分析图8中的凝胶显示脱氧核糖核酸从筛选细菌分离 |
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| D)通过 16S RDNA分析辨识高变色细菌gel图4显示筛选细菌隔离带放大16SRDNA放大产品大小为1.5kb,而分子标识值为1kb放大产物通过脱氧核糖核酸列进一步净化并接受循环排序通过循环顺序获取的序列接受BLAST分析16S RDNA数组c3和c4显示于图6a.1和图6b.1 |
| 图6:按序识别筛选菌株:a)c3b)c4 |
| 6 a.1) sequence – strain c3 GTTAACCATTAAATGTGTAATGCAAGTCGACGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGTGGCG GACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACC GCATAATGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCGGATGTGCCCAGATGGGATT AGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCAC ACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAA GCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGAGGAGGAA GGCATTGTGGTTAATAACCGCAGTGATTGACGTTACTCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGC AGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCT GTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTTGAAACTGGCAGGCTTGAGTCTTG TAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAG GCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTG GTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTGCCCTTTGAGGCGTGGCTTCCCGGAGCTAACG CGTTAAGTCGACCGCCTGGGGGAGTACGGCGCAGATGATACTTCAATGATGATCGGGGCCCGCACAGCG GTGGGAGCATGGTGGCTTAATTACGAATGCAAACA |
| 6b.1) sequence GTAGCCCTACAAGAGTGGTCAGCGCACTCCGAAGGTTAGCTACCTACTTCTTTTGCAACCCACTCCCATG GTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTAGCATTCTGATCTACGATTACTAGCG ATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTACGACGCACTTTATGAGGTCCGCTTGC TCTCGCGAGGTCGCTTCTCTTTGTATGCGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGAT GACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCAGTTTATCACTGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGGCCTAACCGCT GGCAACAAAGGATAAGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACA GCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAAGGCATCTCTGGCAAGTTCTCTGGATGTCAAG AGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAA TTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAACGCGTTAGCTCCGGAAGCCAC GCCTCAAGGGCACAACCTCCAAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTG CTCCCCACGCTTTCGCACCTGAGCGTCAGTCTTTGTCCAGGGGGCCGCCTTCGCCACCGGTATTCCTCCAG ATCTCTACGCATTTCACCGCTACACCTGGGAATTCTACCCCCCCTCTACAAGACTCAAGCCTGCCAGTTTC AAATGCAGTTTCCCAGGTTGAGCCGGGATTTCACATCTGACTTAACAGACGCTGCGTGCGCTTACGCCAG TAATACGGAATGACGCATGGCACCTCCGGTAATACGCGCTGCTGGCACGAGTAGGCCAGGTGCTTCCTTC TGTGCGAGTTAAAA |
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V级讨论和结论 |
| 隔离和筛选污水样本高染去色化菌群:Azo染色结构在细菌变色反应中起着重要作用复杂染色度与其去色化百分比相关数azo染色关联高置高分子重染色难消除,而薄度结构低分子重染色在细菌出现时显示更大变色化研究3菌群从序列稀释期间获取的12片菌分离物中筛选菌群显示不同的去色化效率从研究中可以推断颜色清除过程还取决于细菌攻击染色分子并导致变色化的潜力,因为每一种细菌都有不同的染色减色能力。 |
| GC-MS变换产品分析:GC-MS分析后获取的降解产品检测为5 8-二合二亚胺,分子质量为145.2和6-N-benzylapthalen-2-分子质量262每种产物的分子量对m/z之比这两种产品只有在azo联结N=N切片后才能获取从此研究可以明显看出 产生退化产物的azo联结 是由发现菌株活动完成研究细菌生物降解并发现可降解性红11azo染色的菌类约百分百染色化由细菌完成生物方法可以是最有用的工具 来去色化和退化这些有害的Azo染色选择适当的介质和染色集中度是这一进程中非常重要的一步LB和最小介质去色化过程 LB介质去色化显示极有希望结果大量其他工程也正在这个区域中完成 产生不同碳和氧浓度 和各种温度,pH条件 百分比染色去色化 |
公有化 |
| 非常感谢两位同事全心全意支持整个研究工作友向 先生苏吉特KSingh给我机会去他有声望的实验室工作论文第二合写者Ms.舒班吉舒克拉也在实验室工作时帮助我很多最后但并非最不重要的一点是,我的家人随时随地为我提供道义支持特别感谢IIT-Madras在样本分析部分提供的宝贵支持 |
引用 |
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