白花马竹(玄参科)的生物学评价。

摘要

竹是玄参科的重要植物。本研究对日本马参二氯甲烷和甲醇粗提物的植物毒力、细胞毒力、抗真菌活性和抑菌活性进行了评价。二氯甲烷和甲醇提取物均抑制小莱姆纳的生长，并表现出明显的植物毒活性。二氯甲烷提取物具有最高剂量的细胞毒活性，LD50为513.04 μg/ml，甲醇提取物无细胞毒活性。二氯甲烷提取物对番茄赤霉病的抑制率为25%，甲醇提取物对犬小孢子菌的抑制率为30%。二氯甲烷和甲醇提取物对病原菌的抑制活性均不显著革兰氏阳性而且革兰氏阴性细菌菌株。植物化学测试表明该植物中存在皂苷。

关键字

妈祖对虾植物毒性，细胞毒性，LD50，浮萍属小L,皂甙。

简介

树木和植物对人类生活至关重要，不仅在现在，而且在遥远的过去也是如此。早期人类依靠它们来满足物质需求，如食物、住所、衣服、药物、装饰品、工具，以及精神需求，如魔法。

自古以来，草药一直被用于治疗目的。对天然产物的有组织的研究，开始于19年初^th世纪，一直是一个关键因素，在开发强有力的生物活性分子从植物。因此，植物不仅继续保持其历史意义，作为治疗癌症等疾病的新药的重要来源之一，获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)，疟疾和疾病心血管还有中枢神经系统，等等。由于这些原因，植物的生物活性分子总是可以作为促进传统医学发展的灵感来源，并使其准备好迎接未来的新挑战[1］．

从植物中分离出的大多数药理活性分子是次生代谢产物，它们是保护植物免受外界危险的复杂武器库。次生代谢产物具有重要的生态功能，包括对食草动物、细菌和真菌感染的防御。植物用于防御的许多化合物也可以被人类用于同样的目的。然而，对植物具有生态意义的次生代谢产物对人的影响却完全不同。例如，l -多巴从许多豆科植物中分离出来蚕豆根尖，作为一种拒食剂，但在人类中，它被用于治疗各种精神疾病[2］．

自从人类文明开始以来，植物就被用作药物。在古代中国、印度和其他文明的文本中都有植物药用的书面证据。印度有一段古老的传统医学实践的历史，主要基于阿育吠陀，悉达和Unani系统的药。药用植物一直是传统医学的主要成分。阿育吠陀基于近2000种栽培和野生植物的天然产物。阿育吠陀的书面记录，如Charaka Samhita, Shushruta Samhita等，包含8000多种草药。实际上，有数百万种植物、组合、传统和家庭疗法可以治疗各种疾病并促进健康。3.，4］．

玄参科(Scrophulariaceae)是一个大科，共有220属3000种，分布于世界各地[5，6］．玄参科的玄参属，产于东亚，主要产于中国。该属约有30种，分布于温带和亚热带地区。总的来说，温暖地区和低海拔地区的物种普遍存在。一些高海拔地区的物种在其活动范围内受到限制。在这些物种中，分布最广的是妈祖对虾，广泛分布于印度、中国、日本、南至菲律宾和爪哇的潮湿沼泽地区，是唯一分布于中国南部边界以外的品种[7，8，9］．

材料与方法

本研究于2012年1月至2012年12月在木尔坦Bahauddin Zakariya大学药学系天然产物化学实验室和植物化学实验室进行。材料和采用的方法简述如下。

植物的收集和鉴定

该植物材料于2012年3月从木尔坦Bahauddin Zakariya大学周围收集。这种植物被鉴定为妈祖对虾由Altaf Hussain Dasti博士，教授，纯粹和应用生物学研究所，Bahauddin Zakariya大学，木尔坦和分配目录编号。STW 653。

植物提取物的制备

为了实现高效提取，整株植物在阴凉处干燥30天，然后将其研磨成均匀的粉末并称重。采用简单浸渍法有效提取。提取液浸泡200g干粉末状植物材料妈祖对虾在密闭容器中加入测量体积的二氯甲烷，剧烈摇晃24小时，然后过滤。此程序用二氯甲烷进行了三次。用同样的方法用甲醇提取marc。采用旋转蒸发器对二氯甲烷和甲醇提取物进行浓缩。二氯甲烷和甲醇的提取物在不同的小瓶中分别命名为MJD和MJM。

植物化学成分的测定

进行植物化学研究以分析次生代谢产物的存在。生物碱采用Dragendorff试剂、Mayer试剂、Wagner试剂和Hager试剂检测。为了检测游离和结合的蒽醌苷，进行了Borntrager和改良的Borntrager试验。采用Keller Kiliani法测定心脏苷类。采用泡沫试验检测皂苷，单宁采用氯化铁、明胶和儿茶素试验[6，10，11］．

危害植物的毒性试验

植物毒性试验用小Lemna

制备无机(e介质)，加入KOH球团使pH值达到5.5-6.0。为了测试，每剂量准备10瓶(500,50,5 ppm，对照)。将15g提取物溶解在15ml溶剂中。将1000、100和10 μl溶液溶解到小瓶中，浓度分别为500、40和5 ppm，然后让溶剂蒸发一夜。2毫升e培养基，然后在每个小瓶中加入一株含有健康和绿色莲座的三叶植物。小瓶被放置在一个装有2厘米水的玻璃盘中。然后容器被密封。装有小瓶的培养皿在26°C和其他受控条件下放置7天。3天和7天后，计数并记录每瓶的叶片数量。最后用ED50计算机程序对数据进行对照百分比分析，以确定FI₅₀值及65%置信区间[12，13］．

细胞毒性试验

盐水-虾致死试验

二氯甲烷和甲醇提取物妈祖对虾用盐水虾(卤虫盐沼)致命性生物测定。为了这项试验，成熟的虾幼虫是通过将它们放在人工海水中生产出来的。为了测试，分别制备了浓度为1000、100和10 μg/ml的3个小瓶。然后，将20mg提取物加入2ml溶剂中。从这些溶液中分别将500、50、5 μl转移到浓度为1000、100、10 μg/ml的小瓶中。溶剂被允许蒸发。然后用巴斯德移液管在每个小瓶中加入5ml海水和10个虾仔。这些小瓶被放在照明下。24小时后，对存活的虾进行计数和记录，并用finney计算机程序分析数据并确定LC⁵⁰值及95%置信区间[12，14，15］．

抗真菌实验

琼脂管稀释法

以日本Mazus japonicus二氯甲烷和甲醇提取物对白色念珠菌、黄曲霉、犬小孢子菌、赤霉病菌和无乳念珠菌进行了抑菌试验。用供试物进行对照实验，评价提取物的抑菌活性。在DMSO中加入二氯甲烷和甲醇提取物制备原液。制备Sabouraud葡萄糖琼脂(SDA)，将已知体积转移到螺盖试管中，在121℃下高压灭菌15分钟，然后将试管冷却至50℃。测试样品从原液转移到未凝固的Sabouraud琼脂培养基中。然后在室温下固化管子。从7天培养的真菌中取出直径为4mm的接种物接种在每个试管中。在28±1°C下孵育7-10天后观察到真菌生长受到抑制[12，15，16］．

抗菌试验

琼脂扩散法

二氯甲烷和甲醇提取物妈祖对虾进行了测试枯草芽孢杆菌据国家反恐怖主义中心(8236),金黄色葡萄球菌据国家反恐怖主义中心(6571),伤寒沙门氏菌，大肠杆菌据国家反恐怖主义中心(10418),志贺氏杆菌flexenari而且铜绿假单胞菌(ATCC 10145)。用该方法测定已制备好的肉汤培养基的抑菌活性。从这些板上，使用无菌软木钻孔机切割所需数量的孔，并在周围和中心保持适当的分布。用0.1ml无菌移液管，将100μl二氯甲烷和甲醇提取物放入合适的溶剂中，将标准抗菌剂和溶剂分别倒入各自的孔中。这些平板放置在室温下2小时，以获得适当的样品扩散，并在37℃孵育24小时。抑制区的直径被测量到最接近mm [12，16，17］．

结果与讨论

初步植物化学测试

为了检测次生代谢物，进行了初步的植物化学试验。植物化学测试结果表明，皂苷作为一类主要的次生代谢产物的存在妈祖对虾．结果还表明，其中不含生物碱、心苷、蒽醌苷和单宁妈祖对虾。

据报道，皂苷通过中和活性氧，发挥强大的抗氧化活性，从而保护急性和慢性心脏病。皂苷的舒心作用是由于钙通道的阻塞。皂苷可显著降低血小板聚集。皂苷对中枢神经系统也有保护作用。较早报道皂苷可通过细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白、生长因子和蛋白激酶等间接抑制癌细胞增殖[18］．皂苷还表现出流产、抗合子和抗着床活性。皂苷还被发现参与通过细胞介导的免疫系统和抗体产生来增强免疫系统[19］．皂苷是植物中重要的一类次生代谢产物妈祖对虾．可以想象，皂苷具有广泛的治疗潜力，可以作为分离和纯化单个皂苷的先导，并可以进一步评估其治疗潜力。

植物性毒素的活动

的浮萍属小测定法是一种快速测定植物提取物毒性的方法[20.］．本文介绍了二氯甲烷粗提物和甲醇提取物的植物毒性测定结果妈祖对虾均在表二．

植物毒力测定结果表明，二氯甲烷浸膏对黄曲霉生长有抑制作用浮萍属小高剂量可达100%，中剂量可达70%，低剂量可达55%。而甲醇提取物对其生长有抑制作用浮萍属小L.高剂量时高达45%，中剂量时为25%，低剂量时为5%。几位工作者报告了各种药物的植物毒活性Abroma奥古斯塔种子油抑制了植物的生长浮萍属aequinoctialis［21］．据报道水蕨，五千层，金合欢，秋葵而且Alphitonia excelsa显示植物毒性浮萍属aequinoctialis［22］．Hussain等报道了正己烷、正丁醇、氯仿和水的组分荆芥juncea对其有不显著的植物毒作用l .小［23］．莱姆纳试验是一种快速测定植物毒性的方法。植物毒性生物测定是一种有效的除草剂研究的初级筛选方法。杂草是发展中国家农业生产力低下的主要因素之一。合成除草剂价格昂贵，有毒且无特异性。改良特性的天然除草剂前景广阔[12，24］．植物毒性天然产物既可以直接利用，也可以作为先导化合物用于除草剂的开发。此外，可以通过分离、纯化和结构测定来探索植物的植物毒性成分，从而开发出有效的除草剂。

细胞毒性的活动

卤虾(卤虫盐沼)采用致死性生物测定法，评价二氯甲烷和甲醇提取物的细胞毒活性妈祖对虾．卤虾结果(卤虫盐沼二氯甲烷粗提物和甲醇提取物的致死率生物测定妈祖对虾均在表3。

二氯甲烷提取物在LD的最高剂量下表现出细胞毒性₅₀513.04 μg/ml，甲醇提取物无细胞毒性，LD50为2894.93 μg/ml。盐水-虾致死生物测定法已广泛应用于监测所研究样品的细胞毒性。这是一种快速、廉价、内测的通用生物测定方法，用于筛选、分离和监测具有生理活性的天然产物[25］．

抗真菌活性

在体外采用抗真菌生物测定法评价其抗真菌活性妈祖对虾．采用琼脂管稀释法进行体外抗真菌测定。的结果在体外二氯甲烷粗提物和甲醇提取物的抑菌活性测定妈祖对虾均在表4．

二氯甲烷和甲醇提取物妈祖对虾显示出不显著的抗活性白色念珠菌，黄曲霉，犬小孢子菌，枯萎菌，无乳念珠菌．值得注意的是，与对照相比，二氯甲烷提取物在75mm处表现出25%的抑制作用，呈线性增长;只对腐皮镰孢霉菌与对照相比，甲醇提取物在70mm处有30%的抑制作用，呈线性增长;只对Microsporum犬属。

结果表明，该植物的抗真菌活性与其他芫荽科植物一致龟背［26),科迪亚alliodora［27),科迪亚linnaei［28),科迪亚morelosana［29),Arnebia euchroma［30.),Arnebia hispidissima［31),Trichodesma amplexicaule［32),Cynoglossum officinale［33］．其粗提物具有中等活性Onosma griffiithii反对黄曲霉(55%)和腐皮镰孢霉菌(40%)，而其正丁醇和乙酸乙酯提取物没有活性[34］．植物的水提取物和乙醇提取物均无抗真菌活性，Colendia procumbens进行了测试白色念珠菌［35］．水和甲醇提取物Anchusa斜体而且Trichodesma zeylanicum也没有显示任何活动[36］．

抗菌活性

在体外采用抑菌生物测定法评价其抑菌活性妈祖对虾．在体外采用琼脂管扩散法进行抗菌生物测定。的结果在体外二氯甲烷粗提物和甲醇提取物的抑菌生物测定妈祖对虾均在表5所示。

二氯甲烷和甲醇提取物妈祖对虾进行了测试Eschericha杆菌,枯草芽孢杆菌，志贺氏菌，金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌而且伤寒沙门氏菌采用琼脂管扩散法。两种提取物均无活性。

结论

目前的研究结果清楚地表明，该植物具有极好的植物毒性和细胞毒性活性潜力。对植物的生长抑制有抵抗作用Microsporum犬属而且腐皮镰孢霉菌经鉴定，该植物可作为抗真菌剂用于治疗不同的真菌疾病。在初步的植物化学筛选中，皂苷被确定为这种植物的主要次生代谢产物。因此，进一步纯化具有植物毒、细胞毒和抗真菌活性的活性成分，可以得到一种有应用价值的除草剂、细胞毒和抗真菌剂。可以想象，皂苷具有广泛的治疗潜力，并可能成为分离具有治疗活性的新型皂苷的先导。

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