研究和评论:植物科学杂雷竞技苹果下载志》上
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ISSN: 2320 - 0189
+ 1-845-458-6882国立嘉义大学食品科学系,300 Syuefu Rd。嘉义城60004,台湾,中华民国
部门食品和营养,200年普罗维登斯大学崇基路,临近夏鲁寺、台中市43301年,台湾,中华民国
国立嘉义大学兽医系,300 Syuefu Rd。嘉义城60004,台湾,中华民国
收到日期:12/10/2015接受日期:09/02/2016发表日期:12/02/2016
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花青素是盛产的种皮黑大豆(BS)(大豆(l)美林),导致氧化和anti-antiinflammatory活动。它含铅我们调查BS的保护作用与强氧化剂四氯化碳(亚兰)诱导大鼠肝损伤。b在130°C烤5分钟,然后就淹没在100°C热水20分钟产生花青素丰富茶/汤(BST)。BST CCl4-induced对肝损伤的保护作用Sprague-Dawely老鼠了六组:实验控制,高BST(每公斤体重1克BS),亚兰(0.5毫升20%亚兰),亚兰+水飞蓟素(0.2克/公斤体重),亚兰+低BST(每公斤体重0.1克BS)和亚兰+高BST(每公斤体重1克BS)。BST增强谷胱甘肽和GSSH内容以及抗氧化酶活动(超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及谷胱甘肽还原酶(GR)活动)在正常大鼠的肝组织。BST也减毒的血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶(了)和谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)水平亚兰治疗老鼠。肝脏组织病理学显示BST减少脂肪肝和肝纤维化引起的亚兰。建议花青素的种皮黑大豆王亚南等导致。
黑大豆、茶、抗氧化剂、肝保护、四氯化碳。
黑大豆(大豆(l)美林)是常用的药材在东方国家食品和草药。它具有抗炎活性,抗增殖效果,以及抗氧化能力,能够降低癌症的风险(1- - - - - -4]。黑大豆的生理功能主要是与花青素成分,丰富的黑大豆的种子外衣(5- - - - - -8]。据报道,花青素提取从黑色米糠对碳王亚南tetrachloride-induced肝损伤小鼠和提取黑米可以抑制饮酒导致的慢性肝损伤大鼠(9,10]。此外,发现cyanidin-3-O-glucoside (C3G),花青素常发现在许多天然植物,显示,四氯化碳对小鼠(王亚南函数11]。自黑大豆种皮含有大量的花青素,花青素主要种皮C3G,它使我们认为黑大豆也表现出这种王亚南功能。因此,在这项研究中,我们评估碳tetrachloride-induced肝损伤保护作用的黑大豆使用Sprague-Dawely (SD)大鼠动物模型5]。
CCl四氯化碳(4)是一种强氧化剂的化学肝脏损伤(12,13]。创新领导力4是转化为三氯甲基自由基和活性自由基能攻击细胞脂质等大分子蛋白质和DNA (14,15]。据报道,三地4可以减少大鼠的肝脏抗氧化酶活动,包括超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶活动(16,17]。CCl中毒4导致细胞坏死、氧化应激和炎症,从而导致肝损害,如肝纤维化、肝硬化,萎缩(18]。
预热发现了治疗提高提取物的抗氧化活性黑大豆。黑色的水提取物大豆在130°C烤5分钟显示总花青素含量和较高的抗氧化活性高于水提取物un-preheated黑大豆(19]。这样的预热过程被认为增加花青素的提取性从黑大豆。在这项研究中,预先准备的5分钟(130°C)整个黑大豆浸在100°C热水产生煎煮20分钟。黑大豆汤的肝保护作用是评估使用四氯化碳治疗SD大鼠。
化学物质
CCl四氯化碳(4)和水飞蓟素从σ购买有限公司(圣路易斯,密苏里州)。二硫化谷胱甘肽(GSSG)、谷胱甘肽还原酶(GR)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、谷胱甘肽(GSH)和N-ethylmaleimide和光纯购买kouichi化学工业公司(日本大阪)。Hydrodrogen过氧化氢过氧化枯烯和购买的阿尔法蛇丘(英国希舍姆)。总蛋白双缩脲试剂购自热(美国罗克福德,IL)。
制备黑大豆茶(BST)
黑大豆(大豆(l)美林,台南不。3)购买从一个当地的农民在嘉义县,台湾,中华民国。洗后,整个黑大豆放入一个铝锅(20 * 15 * 1.5厘米)和预热烤箱(Sunpentown模型——1199年,台北,台湾)在130°C 5分钟。数码口袋温度计(模型DGS-A9SA-ST9215C,多格有限公司台北,台湾)是用于监视周围的环境温度黑大豆。预热黑大豆被淹没在10倍(w / v)的100°C的热门蒸馏水20分钟。删除bean后,汤是动物治疗作为示例。
实验动物
六个月的老男Sprague-Dawely (SD)老鼠从Biolasco购买台湾有限公司有限公司(台湾宜兰)。不锈钢wire-bottom笼子里的老鼠被安置一个环境可控的房间(22±2°C, 65±5%相对湿度)12小时的夜晚和黑暗周期。在老鼠实验中,美联储与常规饮食(Fu-So颗粒食物,台中,台湾)和水随意。身体重量每周记录。本研究动物研究伦理委员会批准的协议是在普罗维登斯大学,台中,台湾中华民国。
48大鼠随机分为6组,八大鼠。他们是:控制(常规饮食),高BST(每公斤体重1克BS),三地4(CCl 0.5毫升20%4CCl /橄榄油)4+水飞蓟素(CCl 0.5毫升20%4/橄榄油+水飞蓟素0.2克/公斤体重),三地4+低BST (CCl 0.5毫升20%4在0.1 g /橄榄油+ BST CCl bw)和BS /公斤4+高BST (CCl 0.5毫升20%4在1 g /橄榄油+ BST BS /公斤体重)。CCl的团体4CCl要求(4CCl +水飞蓟素,4+ CCl低BST4+高BST),老鼠收到CCl 0.5毫升的腹腔内注射4CCl (20%4/橄榄油)9周的每周两次。CCl的控制和49周组每天蒸馏水;而高BST,三地4CCl +水飞蓟素,4+ CCl低BST4+高BST组收到了BST(每公斤体重1克BS),水飞蓟素(0.2克/公斤体重),BST(每公斤体重0.1克BS)和BST每天(1 g b /公斤体重),分别。
周1、3、6和9,在血管收集血液样本,然后在4°C离心机离心10分钟。之后,上层清液的收集血液生化分析。9周后,老鼠通过颈椎脱位禁食24 h和牺牲。肝脏是立即收集,清洗和加权。对于抗氧化剂酶活性测试,1 g的肝组织均质1毫升0.05磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)在4°C, 13000转10分钟。立即解剖肝脏都固定在6%甲醛样品制备和组织化学染色分析。
测定超氧化物歧化酶(SOD)活性
超氧化物歧化酶(SOD)活性测定Marklund报告的使用方法和Marklund[稍微修改一下20.]。一百毫升的肝脏上层清液混合和mL 0.05 Tris-HCl和7μl预示mM焦棓酸,然后孵化25°C 10分钟,然后活动与分光光度计测量325海里(模型u - 2800,日立)。一个单位确定的氧化的酶抑制焦棓酸50%。
测定过氧化氢酶(CAT)活性
猫试验是由Aebi[报告的方法21]。肝匀浆从所有组都用1.9毫升的磷酸盐缓冲剂(pH值7.4),和反应是由增加的1毫升的H2O2(30毫米)。空白没有肝匀浆制备2.9毫升的磷酸盐缓冲剂和1毫升的H2O2。光密度的减少由于分解H2O2测量1分钟结束时对空白在240海里。
测定谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活动
谷胱甘肽过氧化物酶的活性被修改的方法测量屋和情人节22]。NADPH的氧化是记录为吸光度下降在340 nm的分光光度计(模型u - 2800,日立)。分析混合物含有620μl 0.25磷酸盐缓冲剂(pH7.4), GR 200μl 5单位/毫升、谷胱甘肽50μl 40毫米,100μl肝脏上层清液,10μl 20毫米NADPH和20μl氢过氧化枯烯15毫米。
测定谷胱甘肽还原酶(GR)活性
GR活性测定是由屋和情人节的修改方法22]。分析混合物包含30μl肝匀浆,750μl GSSG and150μl NADPH,然后活动与分光光度计测量340海里(模型u - 2800,日立)。
测定谷胱甘肽和GSSG内容
谷胱甘肽的内容被修改的方法确定Hissin和自己23]。0.5毫升10000 g的上层清液,4.5毫升的phosphate-EDTA缓冲区,pH值8.0,增加了。最后分析混合物(2.0毫升)稀释的含有100μl组织上层清液,1.8毫升phosphate-EDTA缓冲区,和100年μl选择的解决方案,包含100μg选择。彻底的混合和孵化后在室温下15分钟,解决方案被转移到一个石英试管。在420纳米荧光决心与激活350海里。
GSSH Hissin报告的内容也决定使用方法和自己23]。0.5毫升的部分最初的10000 g上层清液在室温下孵化与200年的0.04 NEMμl 30分钟与谷胱甘肽存在于组织中。这种混合物,4.3毫升0.1 N的氢氧化钠是补充道。这种混合的一部分(100μl)被测量GSSG,对谷胱甘肽测定使用上述过程,除了0.1 N氢氧化钠是用作稀释剂而不是phosphate-EDTA缓冲区。
测定丙二醛(MDA)含量
MDA测定的方法执行泰特姆et al。24]。肝匀浆,0.4%稍后通知和75年μl 0.2%二叔丁基对甲酚补充道,然后混合在漩涡大力搅拌,放置在沸水浴45分钟。冷却后,500μl浮层10000克、1000μl正丁醇是补充道。彻底的混合和孵化后在室温下10分钟,混合物在10000 g离心10分钟。上层清液被转移到一个石英试管。在550纳米荧光决心与激活515海里。
蛋白质浓度测定组织
组织蛋白浓度估计根据洛瑞等人的方法使用牛血清白蛋白作为标准(25]。
组织病理学分析
肝脏组织学分析样本石蜡包埋。Hematoxylin-eosin(他)染色。
统计分析
单向方差分析(ANOVA)是使用一个包(SAS研究所Inc .卡里,NC)。邓肯的多个范围测试是用来确定不同治疗之间的显著差异。
CCl的影响4和BST SD大鼠的体重和肝脏重量
图1一个显示在SD大鼠体重的变化9周实验时间。这是发现创新领导力4组比对照组显著降低体重在3周后。在这项研究中,三地4作为强氧化剂诱导SD大鼠肝损伤。因此,体重的下降被认为是CCl诱导的损害4。许等人使用CCl 8%4CCl(1毫升4/公斤体重)在雄性Wistar鼠诱发肝损伤,他们发现体重CCl之间无显著差异4治疗和正常大鼠(18]。然而,李等人,CCl林等人说4显著降低雄性Wistar鼠的体重26,27]。在我们的例子中,我们发现三地4治疗SD大鼠腹泻问题,可能会导致体重的下降。管理在每公斤体重1克BS BST单独或co-treatment BST的每公斤体重0.1克BS CCl或每公斤体重1克BS4导致体重概要文件与对照组相似,表明co-treatment CCl BST能减少造成的伤害4。
图1所示。体重的变化(A)在SD大鼠饲料不同experimeral 9周(
控制,
高BST (1 g b /公斤)
亚兰,
亚兰+水飞蓟素(0.2克/公斤体重,
亚兰+低BST (0.1 g b /公斤),
亚兰+高BST(每公斤体重1克BS)和SD大鼠的肝脏重量(B)星期9。
9月底周实验周期,SD大鼠被牺牲和肝脏组织进行检测。CCl SD大鼠的肝脏重量显著增加了4治疗。CCl发现肝脏重量4组是对照组的两倍(图1 b)。我们的数据表明,co-treatment BST的每公斤体重0.1克BS CCl或每公斤体重1克BS4减少肝脏重量,并与对照组没有显著差异。
CCl的影响4和英国有和GPT SD大鼠的水平
肝损伤的直接证据的增加与血清和CCl GPT水平4治疗SD大鼠。与对照组相比,CCl水平4组增加了26%,66%,223%和402%,周1、3、6和9,分别为(表1)。GPT CCl水平4组织还增加了26%,74%,275%和805%在第一周,3、6和9,分别。同的数据显示4诱导SD大鼠严重肝损伤在星期6和9。然而,co-treatment BST在每公斤体重0.1克BS或每公斤体重1克BS完全恢复了和GPT的水平;没有明显差异(p > 0.05),在那些co-treatment组和对照组之间的水平。BST的复苏效果是类似于众所周知的肝保护剂,CCl水飞蓟素,在0.2克/公斤体重4治疗SD大鼠。
| 治疗 | 有(U / L) | |||
|---|---|---|---|---|
| 星期1 | 星期3 | 第6周 | 9周 | |
| 控制 | 141.4±10.05c | 134.0±5.03b | 130.6±13.70b | 97.1±9.75b |
| 高BST | 133.9±9.34c | 121.0±11.25b | 126.1±10.02b | 76.6±6.53b |
| 创新领导力4 | 178.6±12.62一个 | 222.3±40.79一个 | 420.6±107.15一个 | 487.7±76.32一个 |
| 创新领导力4+水飞蓟素 | 148.3±14.28公元前 | 138.4±5.29b | 151.0±5.16b | 103.3±13.14b |
| 创新领导力4+低BST | 159.9±27.72b | 138.6±7.09b | 147.9±7.90b | 105.7±11.21b |
| 创新领导力4+高BST | 141.1±7.99c | 139.7±28.56b | 149.0±7.05b | 104.0±10.39b |
| 治疗GPT (U / L) | ||||
| 星期1 | 星期3 | 第6周 | 9周 | |
| 控制 | 49.9±9.92b | 43.6±3.69c | 45.9±3.89b | 34.3±2.14b |
| 高BST | 47.1±7.20b | 43.0±3.61c | 41.9±4.45b | 32.1±2.41b |
| 创新领导力4 | 62.6±8.79一个 | 75.1±19.66一个 | 169.6±57.87一个 | 308.6±47.82一个 |
| 创新领导力4+水飞蓟素 | 52.0±12.69ab | 61.0±10.58b | 58.1±6.20b | 43.3±5.71b |
| 创新领导力4+低BST | 53.6±9.16ab | 61.0±10.39b | 54.4±8.50b | 44.9±7.13b |
| 创新领导力4+高BST | 53.3±8.79ab | 63.3±11.87ab | 52.3±4.11b | 45.6±7.89b |
所有的值表示为平均数±标准差。n = 8
得了意味着在同一列后跟不同字母明显不同(p< 0.05)
表1:BST对CCl血清有和GPT的活动4治疗大鼠在1、3、6和9周。
CCl的影响4和BST SD大鼠的血脂
CCl的影响4和BST在SD大鼠血清甘油三酯和胆固醇水平所示表2。与对照组相比,创新领导力4导致甘油三酯水平降低32%在9周。CCl,4减少的形成非常低密度脂蛋白(VLDL)在肝脏内质网,因此它在阻止甘油三酯的转移血液和血液中导致低血清甘油三酯水平系统[28]。BST的co-treatment 0.1 g b /公斤或每公斤体重1克BS恢复CCl的甘油三酸酯水平4治疗SD大鼠。许等人也发现三地4减少28%的甘油三酸酯水平在雄性Wistar鼠(16]。然而,我们的数据显示,三地4没有在SD大鼠胆固醇水平不同。BST还显示无显著影响胆固醇水平正常或创新领导力4治疗SD大鼠。
| 治疗 | 胆固醇(mg / dL) 1 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 星期1 | 星期3 | 第6周 | 9周 | ||
| 控制 | 85.5±11.05 | 75.4±8.19 | 68.5±5.98 | 61.0±11.34 | |
| 高BST | 94.4±13.65 | 81.8±11.07 | 73.8±14.85 | 59.9±5.17 | |
| 创新领导力4 | 85.3±17.77 | 75.5±10.03 | 70.4±23.26 | 73.9±13.38 | |
| 创新领导力4+水飞蓟素 | 91.1±18.60 | 74.9±6.10 | 61.3±7.25 | 66.9±6.77 | |
| 创新领导力4+低BST | 95.8±13.13 | 76.3±6.32 | 69.6±10.93 | 70.3±13.02 | |
| 创新领导力4+高BST | 84.1±15.16 | 74.9±11.95 | 67.6±4.34 | 64.4±12.15 | |
| 治疗 | 甘油三酸酯(mg / dL) | ||||
| 星期1 | 星期3 | 第6周 | 9周 | ||
| 控制 | 107.9±54.46一个 | 135.6±101.86一个 | 104.0±17.55一个 | 76.8±16.45ab | |
| 高BST | 101.8±34.69ab | 141.6±43.06一个 | 112.8±10.81一个 | 86.8±5.39一个 | |
| 创新领导力4 | 72.3±17.62ab | 95.3±45.27ab | 102.9±18.67ab | 52.4±9.10c | |
| 创新领导力4+水飞蓟素 | 101.4±42.93ab | 87.3±21.48ab | 90.4±9.59公元前 | 68.9±19.33b | |
| 创新领导力4+低BST | 67.8±19.83b | 57.0±16.52b | 80.3±6.88c | 63.3±15.40公元前 | |
| 创新领导力4+高BST | 75.6±25.15ab | 64.0±14.71b | 90.8±2.43公元前 | 67.0±13.16公元前 | |
所有的值表示为平均数±标准差。n = 8
1同一列中的所有值不明显不同(p >0.05)
得了意味着在同一列后跟不同字母明显不同(p <0.05)
表2:BST对CCl血清胆固醇和甘油三酯的活动4治疗大鼠在1、3、6和9周。
CCl的影响4和BST SD大鼠的抗氧化状态
SD大鼠的政府BST独自在每公斤体重1克BS更高的SOD、GPx和GR活性比对照组肝组织,但没有发现显著差异在过氧化氢酶活动(图2 a-2d)。然而,同4治疗拒绝SOD、GPx GR和过氧化氢酶在肝脏组织的活动。Co-treatment BST的0.1 g b /公斤或每公斤体重1克BS增加所有CCl的肝组织抗氧化酶活动4治疗SD大鼠。BST的数据表明,政府在CCl正常和增强抗氧化酶活动4治疗SD大鼠的肝组织。
图2。超氧化物歧化酶(SOD)活性(A),过氧化氢酶(CAT)活性(B),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活动(C)、谷胱甘肽还原酶(D) (GR)活动正常的肝组织和liver-damaged SD大鼠饲料不同实验9周。
谷胱甘肽和GSSH内容在SD大鼠肝组织中所示图3一和3 b分别。管理的BST独自住在每公斤体重1克BS显著增加肝脏中谷胱甘肽和GSSH内容组织比对照组。的利率增加谷胱甘肽和GSSH的分别为77%和72%,分别。CCl使用4诱导肝损伤,发现谷胱甘肽和CCl GSSH内容4组只有31%的对照组。CCl相比4集团的co-treatment BST显示显著的肝脏中谷胱甘肽和GSSH水平更高,不管每公斤体重0.1 g b的浓度或每公斤体重1克BS。BST单独的数据表明,政府增强肝脏中谷胱甘肽和GSSH内容,BST也可以提高谷胱甘肽和GSSH CCl肝组织的内容4治疗SD大鼠。众所周知,谷胱甘肽和GSSH在氧化应激的防御系统中发挥了重要作用;我们的研究结果表明,BST可以提高SD大鼠的肝组织抗氧化状态。
图3。谷胱甘肽含量(A), GSSG内容(B)和丙二醛(MDA)含量(C)在正常的肝组织和liver-damaged SD大鼠饲料不同实验9周。
CCl的自由基4可能会引起膜脂质过氧化反应和随后破坏细胞膜的完整性(19]。丙二醛含量的测量通常是作为脂质过氧化的索引在细胞或动物模型。CCl的丙二醛水平4组是对照组的两倍(图3 c)。,co-treatment BST的0.1 g b /公斤或每公斤体重1克BS显著降低CCl的肝组织中丙二醛水平4治疗SD大鼠。
CCl的影响4和BST SD大鼠的肝脏组织病理学
肝脏组织病理学显示控制和BST治疗大鼠肝部分显示正常肝的架构,但三地4引起严重的脂肪肝和肝纤维化在SD大鼠(图4)。Co-treatment BST的0.1 g b /公斤或每公斤体重1克BS阻止CCl引起的组织病理学变化的发展4。肝脏中脂肪的百分比锐利的控制组,BST单独组0%,三地4组33 ~ 66%,co-treatment水飞蓟素或BST在每公斤体重0.1克BS或每公斤体重1克BS不到10%。同的数据显示4组显示严重的脂肪肝,而co-treatment水飞蓟素或BST组轻微脂肪肝。Metavir CCl分数显示,肝纤维化的程度4治疗SD大鼠是刚性的,而另一组没有任何纤维化的迹象。
图4。部分SD大鼠的肝脏与Hematoxylin-eosin染色(他)(×600)。
我们的结果表明,co-treatment BST可以减少脂质过氧化,增强抗氧化酶活动,恢复血清和GPT水平,减少肝脏重量和CCl增加的体重4治疗SD大鼠。组织病理学分析还表明,co-treatment BST可以显著恢复CCl脂肪肝和肝纤维化4治疗SD大鼠。它演示了,第一次,BST CCl能减少造成的肝损伤4。单独治疗BST也增强谷胱甘肽和GSSH内容、以及抗氧化酶活动(SOD、GPx和GR活动)在肝脏组织,同时保持正常肝重量和体重,正常和GPT水平和正常肝架构。一般来说,BST的保护作用是类似于水飞蓟素在0.2克/公斤体重。因此,BST可以被视为一个潜在的肝保护剂。
值得提及的是,BST准备通过崛起预热黑大豆在100°C热水20分钟。本研究中使用的浓度的BST 0.1 g b /公斤,每公斤体重1克BS, BST的数量是基于整个黑大豆的重量,没有从黑大豆提取物的重量。可能从黑大豆提取物可能比BST更好的肝保护作用;换句话说,低浓度可能足够BST的提取来实现同样的效果。因此,适当的萃取技术的应用得到活性化合物在黑大豆是重要的,需要进一步调查。
花青素是主要的生物化合物的种皮黑大豆目前收到许多关注。和cyanidin-3-O-glucoside (C3G)是主要的花青素的种皮黑大豆(12]。据报道,政府的纯C3G变弱的水平血清天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶和CCl减少肝脏病变的发生率4治疗的老鼠。C3G显然CCl保护肝脏免受4全身的肝损伤通过抗氧化和抗炎机制11]。在这项研究中,对三地BST显示显著的保护作用4诱导小鼠肝损伤。CCl BST会释放4诱导氧化应激通过提高抗氧化酶的活动。这可能是由于C3G的抗氧化活性。
这项研究部分由科技部支持,台湾,中华民国。102 (NSC - 2313 - b - 415 - 009)。
