Citotoxicity N-phenylmaleimide衍生品和抑制ofMelanoma增长在临床前小鼠黑色素瘤模型

文摘

抗肿瘤和antimetastatic N-Phenylmaleimide衍生品的影响(N-phenyl-maleimide (M2), 4-methyl-N-phenyl-maleimide (M5) 4-methoxy-N-phenyl-maleimide (M7和N-phenyl-ethyl-maleimide (M9))评估与B16F10黑素瘤细胞植入小鼠皮下注射。通过这种方法,我们评估实体肿瘤的生长和持久性,肺转移,肠系膜转移,生化和血液参数、硫代巴比土酸活性物质(TBARS)和非蛋白巯基物质(汽蚀余量)在肝匀浆。N-Pheneylmaleimides肺转移的数量减少和抑制肿瘤的生长。M5和M7显示低毒性的治疗因为轻微的改变在血液和生化参数观察,只有治疗M9提升强烈氧化应激以及改变一些肝酶。马来酰亚胺的影响所示这个工作可以与它们的化学结构特点,主要是由酰亚胺和芳香环之间的距离,和疏水性和电子芳环上的取代基组的特点,可以修改其亲脂性的属性。这些临床结果表明,治疗和M5 M7能有效治疗黑色素瘤表明这些化合物可能进一步导致开发新的抗癌药物。

关键字

黑色素瘤、马来酰亚胺、皮下肿瘤,肿瘤的生长。

介绍

黑色素细胞的黑色素瘤是一种恶性肿瘤,主要发生在全世界白种人的皮肤。原发性黑色素瘤,一旦发现,应手术切除,化疗和激进的区域淋巴切除术应该关注转移控制(1]。晚期黑色素瘤患者死亡的主要原因是在遥远的地点转移的形成。最常见的转移为黑色素瘤是小肠,肝、骨、脑和肺2]。以证据为基础的概述表明达卡巴嗪在单一疗法是最有害的治疗黑色素瘤[3]。

从叶子的生物碱phyllanthimide孤立菲sellowianus(大戟科)已经被用来作为前体合成的许多属于一类循环胺类似物(4]。循环胺是有机化合物形成的组CO-N (R)有限公司- R是一个氢原子的烷基或芳基,它所带来的潜在的生物活性和制药应用(5]。这些影响似乎相关尺寸和亲电酰亚胺环上的取代基组的特点,可以修改其空间属性。N-phenylmaleimides含有酰亚胺环,赋予疏水性和中性特征的分子(6]。

文献包含几个马来酰亚胺的抗肿瘤研究潜力。的抗增殖活动一系列heteroarylmaleimides和polyheterocondensed胺测试对人类肿瘤细胞(NCI-H460肺癌),和获得的IC50值范围从0.84到9μM [7]。一系列7-azaindazolyl-indolyl-maleimides和arylmaleimide衍生品显示细胞毒性和抗增殖效果在体外对各种人类癌症细胞系:K562和HL 60(白血病),A549(人类肺癌),eca - 109(人工食管的癌),KB(人类表皮样癌),smmc - 7721(人类肝细胞癌)、曲泽(人类前列腺癌)和国网公司- 7901(人类胃)。这些作品还显示适度的蛋白激酶C抑制活动和可能mitochondrial-mediated途径的凋亡参与一些马来酰亚胺KB细胞的抗增殖活动(8,9]。

然而N-Phenylmaleimides,我们最好的知识,从来没有对黑色素瘤的研究在活的有机体内。首先四个马来酰亚胺,包括N-phenyl-maleimide (M2), 4-methyl-N-phenyl-maleimide (M5) 4-methoxy-N-phenyl-maleimide (M7)和N-phenyl-ethyl-maleimide (M9) (表1)进行评估在体外。化合物的毒性在体外,他们在临床前小鼠黑色素瘤模型进行测试。

方法

材料

细胞培养基、血清和抗生素买来GIBCO(巴西圣保罗)。二甲亚砜(DMSO)和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)购买来自默克(Darmstad,德国)。JC-1 (5、5′, 6,6′-tetrachloro-1, 1′, 3、3′-tetraethylbenzimidazolocarbocyanine碘)从英杰公司购买。消息灵通的[N (2-hydroxyethyl) piperazine-N ' - (2 - ethanesulfonic酸)]钠盐、台盼蓝,胰蛋白酶,DTNB [5, 5 ' -dithiobis (2-nitrobenzoic酸)],并稍后通知(硫代巴比土酸)从西格玛化工有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国),和所有试剂都是商业可用的最高纯度的产品。

化合物

四个N-phenylmaleimide研究合成NIQFAR——伊塔雅伊瓦尔大学(UNIVALI),伊塔雅伊,SC、巴西。其结构经常规光谱方法,根据先前描述(5,10]。N-phenylmaleimide衍生品的合成是通过马来酸酐的反应与相应的胺在冰醋酸在室温下,产生相应的n -马来酰胺酸。马来酰胺酸中间体随后环化到相应N-arylmaleimides通过加热的乙酸酐包含催化量的乙酸钠(10,11]。马来酰亚胺的结构(M2、M5 M7和M9)所示表1。

中使用的化合物随着DMSO和不同浓度。控制并行运行监控可能干扰DMSO化验。最后DMSO浓度为0.1%在体外在化验和2%在活的有机体内化验。在这种情况下,溶剂不干扰测定。

肿瘤细胞系

B16F10小鼠黑色素瘤的肿瘤细胞系获得从写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,细胞在DMEM培养的细胞培养瓶75 cm2补充10%的不活跃的胎牛血清,100μg /毫升100 U /毫升青霉素,链霉素和10毫米玫瑰(pH值7.4)。每2 - 3天,细胞被清除90%的上层清液,通过更换新鲜培养基。这些细胞被培养在湿润的气氛中含5%二氧化碳在37°C,然后用胰蛋白酶收获:EDTA (0.05:0.03 w / v)的解决方案。

在体外分析

细胞毒性评价

细胞生存能力有或没有的化合物通过MTT测定[3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化),一个比色测定12]。这种细胞毒性的评估活动是基于能力的活细胞减少肝癌和黄色的产品蓝色甲瓒产品。B16F10细胞孵化24和48 h 96 - microwell板(3 x的密度104和1.5 x 104细胞/ 0.2毫升,分别)与马来酰亚胺的浓度范围10到100μM。接下来,这些细胞被小心翼翼地清洗,麻省理工的解决方案在新鲜培养基添加和进一步孵化2 h在37°C和5%的二氧化碳。中被删除,添加DMSO溶液溶解水晶甲瓒形成。活细胞的数量成正比的强度形成的蓝色的解决方案,定量测量的标在550 nm波长。结果表示为一个百分比的吸光度控制。控制细胞的细胞生存能力对应于100%,半抑制浓度称为集成电路₅₀。所有实验进行了一式三份。

线粒体潜在的测量

评估马来酰亚胺在线粒体膜电位的影响,亲脂性的阳离子探针荧光染料,58岁的6 68 - tetraethylbenzimidazolcarbocyanine碘(JC-1)使用。JC-1是膜电位去极化的绿色荧光单体或一个红色荧光J-aggregate超极化膜电位。细胞被镀在24-well 5 x 105细胞/好菜和治疗的马来酰亚胺1 h。随后,JC-1(10μg /毫升)添加和孵化20分钟在37°C(5%的二氧化碳)。细胞与PBS洗两次,在PBS resuspended,一个整除被用来测量荧光荧光谱仪(珀金埃尔默LS55)。JC-1的激发波长为488纳米,红色和绿色发射荧光检测在590 nm和527 nm,分别为(13]。线粒体潜力提出了590/527的比率荧光和与控制。电子传递链解偶联剂(FCCP 1μM)作为一个积极的控制。

体内试验

皮下在活的有机体内模型

马来酰亚胺的溶解在100% DMSO和PBS稀释在每只动物的最终浓度注入(马来酰亚胺= 0.27毫克/公斤体重)。瑞士的雌性老鼠,重约25克,老化是用于从6到8周在活的有机体内实验。老鼠在特定的无菌条件下维护。动物分别安置在通风笼在一个控制光周期(12 h光/ 12 h黑暗)在标准室温(22 - 24°C)和50 - 60%的相对湿度,被允许进入传统饮食和水在整个实验期间随意。动物被保存在这些条件下至少一个星期前的实验程序。

与动物实验进行按照道德准则的赫尔辛基宣言》(1975)和以前大学动物伦理委员会的批准使用在动物保健原则。

细胞悬液的分离与胰蛋白酶烧瓶。在胰蛋白酶失活与含有10%胎牛血清的DMEM,这些细胞被离心机和resuspended PBS。可行的细胞数和细胞悬液稀释在最后一个密度1.25 x10⁶细胞/毫升。

肿瘤形成了在小鼠皮下接种背地区2.5 x105 B16F10细胞悬浮在0.2毫升的磷酸盐(2]。这个过程是在所有的动物除了做的动物组1(负对照组)和组3,5,7,9,对应于四组(没有肿瘤)探索马来酰亚胺的固有毒性。

肿瘤细胞注射后14天,当固体出现(3毫米直径),动物被分为五组十个动物每个(组2,4,6,8,和10取决于治疗)。

所有动物都是之前和之后的治疗。组的详细分布是:治疗在隔日服用一个星期(4个政府),腹腔内的路线。计算考虑小剂量浓度评估在体外化验报告的一些马来酰亚胺普拉多博物馆等。6相对应的大约二十倍的IC50 M2的细胞毒性。

组被命名为:组1 (G1):消极的控制只有在PBS (2% DMSO)的车辆;组2 (G2):十背melanoma-bearing动物处理车辆(积极的控制);组3 (G3):五个动物对待M2的解决方案(0.27毫克/公斤体重);组4 (G4):十背melanoma-bearing动物对待M2的解决方案(0.27毫克/公斤体重);组5 (G5):五个动物对待M5的解决方案(0.27毫克/公斤体重);组6 (G6):十背melanoma-bearing动物对待M5的解决方案(0.27毫克/公斤体重);集团7国集团(G7):五个动物对待M7的解决方案(0.27毫克/公斤体重);组8国集团(G8):十背melanoma-bearing动物对待M7的解决方案(0.27毫克/公斤体重);组9 (G9):五个动物对待M9的解决方案(0.27毫克/公斤体重);集团10 (G10):十背melanoma-bearing动物对待M9的解决方案(0.27毫克/公斤体重)。

最后治疗动物麻醉后的第二天,从眼部穿刺静脉血液收集到肝素化丙烯管对血液和生化分析。随后,动物被杀,所有的器官切除和固定10%甲醛溶液进行组织病理学分析。肝脏的一部分被保留在生化分析制冷(TBARS和汽蚀余量)在同一天。

肿瘤切除很仔细,用测厚计测量他们的尺寸。整个过程被监控的文档、照片和肿瘤的特点是注释,包括血管生成过程,其特征是存在大量的肿瘤周围的血管。肿瘤被进行组织学分析。肿瘤生长抑制计算使用以下公式:抑制百分比(%)= 100 / (A - B),一个=肿瘤对照组的平均大小(G2)和B =肿瘤治疗组的平均大小。宏观的肿瘤结节中肠系膜和肺也清点和测量厚度测量器。

毒性观察——生物化学和血液分析

毒性指标如减肥、行为变化,和喂养模式不断被观察到在整个治疗。阐明潜在的副作用的治疗小鼠器官组织是化验分析协议下面描述。

离心机在血液样本3500 rpm 15分钟。剩下的血清是冻结在-20°C进行后续分析。生化参数确定:血清总蛋白(TP)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸aminotransaminase (ALT) gamma-glutamyl转移酶(GGT)、尿素和肌酐。生化参数评价自动化设备BS200 GoldAnalisa®系统诊断工具使用后,制造商的描述。

血液分析包括总白细胞计数(WBC)和微分白细胞计数和红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)浓度、平均微粒体积(MCV)、平均微粒血红蛋白浓度(MCHC)使用标准的血液进行了分析方法如Dacie和刘易斯所述14]。血细胞比容(Hct)是由micro-capillary离心800 g×10分钟和评估刻度尺沉降后红细胞。

的水平非蛋白巯基物质(汽蚀余量)

汽蚀余量确定物质如Ellman所述15]。组织分数均化后得到1体积的12%三氯乙酸离心紧随其后。整除的上层清液加入磷酸盐缓冲剂(在800年最终浓度更易在pH值7.4)/ l和500年μmol / DTNB (Ellman试剂(5 5 ' -Dithiobis - (2-Nitrobenzoic酸))。DTNB之间产生的显色反应和硫醇在5分钟达到最大并保持稳定超过30分钟。计算的汽蚀余量物质在组织样本,使用谷胱甘肽标准曲线是平行的。

硫代巴比土酸测定活性物质(TBARS)水平

TBARS在上层清液测定的方法Ohkawa et al (16),丙二醛;脂肪酸过氧化反应的主要成品与硫代巴比土酸反应生成有色复杂。短暂,样本为60分钟在100°C的环境介质包含duodecyl硫酸钠0.45%,100毫米盐酸,1.4 M醋酸,pH3.4和0.6%的硫代巴比土酸。离心分离反应产物后决心在532海里。

组织学研究

器官肿瘤,从动物被删除后,在PBS清洗,中性缓冲福尔马林固定在10%在梯度酒精脱水处理24小时,然后根据组织病理学协议。4的组织学分析μm部分与苏木精和伊红染色和病理学家观察到盲目的方式。分析了80随机选择字段已识别的组织学损害奥林巴斯BH2-RFCA显微镜的放大200或400 X。

统计Analisys

数据被表示为意味着±S.E.M.所有数据被方差分析统计评估。事后比较个人意味着与控件使用Dunnett多重比较检验完成。P < 0.05的值被认为是重要的。

结果

Antitumoral马来酰亚胺的活性

体外细胞毒性的评价活动

诱导显著细胞毒性测试的四个马来酰亚胺B16F10黑素瘤细胞,呈现相对较低的IC50值(低微摩尔的范围)后进步孵化的时候;24、48和72小时(表1)。这种细胞毒性分析活动是基于能力的活细胞MTT具降低线粒体脱氢酶。随着化合物抑制肝癌细胞减少,这表明它们是通过线粒体作用。下一步是研究该化合物是否会干扰线粒体膜电位。

线粒体膜电位的体外评价

线粒体膜电位是线粒体功能的一个重要参数,用作标记不同的细胞死亡机制,包括细胞凋亡。亲脂性的阳离子探针JC-1,用来检测线粒体的改变潜力B16F10细胞接受马来酰亚胺。

马来酰亚胺显著降低线粒体膜电位在10μM浓度(图1),

类似于一个carbonylcyanide-ρ-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP),一个质子离子载体和有力的解偶联剂线粒体的氧化磷酸化。线粒体膜电位的损失是主要的事件与MTT试验中观察到的细胞毒性。

体内antimelanoma活动的评价

所有的动物都容忍黑色素瘤细胞的皮下注射和腹腔内注射马来酰亚胺。小鼠生长和发育正常,没有死于实验。时间的测定是21天。第一天,小鼠黑色素瘤细胞接种,15天之后,有一个明显的肿瘤结节背地区的动物。老鼠被分离在各自组,然后开始治疗。

宏观上,黑色素瘤肿瘤显示圆形或卵圆形形态不规则多结节表面和定义良好的薄胶囊结合的外观(图2 a-2f)。一些肿瘤高度色素而另一些包含变量或无黑色素的色素沉着。此外,一些小鼠黑色素瘤细胞渗透在邻近组织,肌肉,皮肤和脂肪,使他们很难单独进行分析。这种现象是动物最明显的G2和G4,呈现肠系膜转移。

不同反应的恶性黑色素瘤治疗的马来酰亚胺衍生物被观察到在活的有机体内化验。比较了马来酰亚胺的影响在体外测试和在活的有机体内测试,观察到,尽管IC50 M5和M7高与M2和M9相比,他们更有效在活的有机体内(图2)。治疗与M5 (G6)显著降低肿瘤大小(3.73±0.4毫米,肿瘤大小减少67%),而且只有37±2%的小鼠肿瘤发展。同样,治疗M7 (G8)抑制肿瘤生长的32%(7.59±0.61毫米),而且只有42±4%的小鼠肿瘤发展。简单地说,肿瘤生长明显减少治疗平方米,M5和M7但不是M9 (图2我),组织收到M5和M7显示显著减少小鼠肿瘤的数量图2。

肺部(图3 e和f)和肠系膜(图3 g和3 h)从小鼠接种B16F10细胞和马来酰亚胺处理进行尸检。宏观和微观肺和肠系膜结节进行了分析和比较。宏观上可见,肿瘤结节显示黑色的色素斑点的大约1 - 3毫米的直径和趋于融合。

二次转移在肺部和肠系膜更频繁地出现在阳性对照组(G2) (图3 a, 3 c, e和3 i),相反,与M5 (G6)治疗,M7 (G8)大幅减少肺转移(图3 b和3 f)和肠系膜转移(图3 h)。

G2动物的肺显示明显的肿瘤结节,细胞表现出突出的核仁,细胞内的黑色素沉积,坏死和明确的地区也被检测到。平方米(G4)抑制10%的治疗肺转移的发展,和几个点的肠系膜转移只观察到宏观上与这种治疗(图3 g显微镜下确认)(图3 d)。在动物对待M5,只有两个显示肺转移显微镜下,但并不是宏观上。只有M7 (G8)逆转治疗黑色素瘤肿瘤引起的肝脾肿大图3。

毒性评价

生物化学和血液分析

马来酰亚胺产生的毒性评价,确定动物的血液概要文件并与各自的价值观为对照组(G1)获得。动物的血液参数的结果所示表2。

血液参数表明,马来酰亚胺不能促进重大的改变,因为血液异常发生只在组与肿瘤(+)组。(+)组的动物相比,血红蛋白、白细胞显著变化(-)组;这些变化是由于肿瘤的发展而不是马来酰亚胺。从小鼠的生化研究结果进行了总结表3。

只有治疗M9显示可能的肝毒性。ALT的酶活性值(165.3 IU / l), AST (237 IU / l)改变了治疗M9与相同的酶的活动值相比G1, 131 IU / l和171 IU / l,分别。M5 ALT值的增加与G2 (146.3 IU / l)。其他参数没有出现显著的变化,这可能代表了马来酰亚胺的低毒性。

动物体重变化

在实验的最后,小鼠体重和体重的变化是评价。有统计上显著增加小鼠的体重治疗M2 (G4)。动物的重量M7 (G8)处理增加了2 - 3 g,但这种积极的重量差异显著不同于八国集团,G1, G2的老鼠,会导致体重增加在整个实验图4。

氧化应激与马来酰亚胺治疗后肝脏

硫代巴比土酸活性物质的水平(TBARS)增加小鼠的肝脏中轴承和治疗黑色素瘤肿瘤治疗,而这只能通过治疗效果是恢复M5 (G6) (图5一个)。老鼠接受M7 (G8)和M9 (G10)增加TBARS水平(分别为20、15 nmol / g组织)相比,G1 (2.81 nmol / g组织)。似乎这些马来酰亚胺引发氧化应激,这可能是他们作为Antitumoral的作用机理。此外,M9也诱导改变肝酶(ALT和AST),这是一个指示性的肝毒性。

然而,肝脏组织学没有透露任何证据的退行性变化,脂肪变性或坏死。事实上,显微分析所选的器官没有透露任何治疗相关的毒性作用。然而,在一些老鼠M7(八国集团)和处理所有的老鼠接受M9 (G10),组织学分析显示,脾脏巨核细胞的细胞。

氧化应激水平的代谢物汽蚀余量在肝脏被显著降低。显示了生成的结果图5 b;动物对待M5 (G6)(0.45毫米),M7(八国集团)(0.21毫米),M9 (G10)(0.24毫米)与G1和G2动物(分别为0.71毫米和0.63毫米)图5。

可按

酰亚胺衍生物是一种重要的生物活性化合物显示激素受体拮抗,抗炎,抗焦虑药,抗病毒,抗真菌,抗菌,抗肿瘤性质,主要治疗癌(5,6,10]。等合成循环胺N-phenylmaleimide很容易获得高收益率和现在满意的药理作用(11]。这些化合物是疏水和中性的,因此能够穿过生物膜。相关的一些药理礼节N-phenylmaleimides大小和取代基的亲电特征组酰亚胺环和芳香环,可以修改他们的空间属性或亲油性5,6]。

在目前的工作,采用小鼠黑色素瘤B16-F10的应变;它是有用的在体外黑色素瘤模型和肿瘤发生的在活的有机体内。这种类型的肿瘤生长自发在小鼠和大开发转移的能力。中给出的结果表1表明,马来酰亚胺能诱导细胞死亡在低浓度(在18岁和11μM),而IC50值48 h后孵化8至12μM, 72 h后更低(在8.5和4.5之间μM)。在胺M2和M9,虽然呈现良好的细胞毒性在体外在临床试验中,他们提出了不同的行动模式。酰亚胺M9显示无法减少肿瘤大小(图2),这可能是由于M9的结构特征,它包含一个imidico乙基环,而M2没有这样的组织。在临床前测试的影响M2, M5和M7减少皮下肿瘤相似,尽管它们之间的结构差异。因此,它表明,甲基组的存在,一个电子捐赠组织苯基并不影响这些胺抗肿瘤的性质。类似的结果在研究由普拉多博物馆等。6),显示一个重要细胞株的细胞毒性效应类似胺,在体外和在活的有机体内。

值得注意的是,虽然复合M9的细胞毒性,这不是同样有效在活的有机体内。然而,涉及的药效学和药物动力学的几个因素给定的化合物可能会干扰其性能在活的有机体内这个事实不应该奇怪,也不使结果无效在体外。药物的生物转化往往影响其效果的大小在活的有机体内以及它的吸收、分布和排泄17]。因此,胺的研究取得了可喜的成果在体外,并不意味着他们可以起到这样的作用在活的有机体内。然而,当化合物也有效在活的有机体内所示的是这项工作我们会建议一些聚亚醯胺,包括M5和M7为抗癌药物可能是有前途的候选人。

线粒体是不可或缺的能源生产和监管机构是至关重要的细胞死亡,主要是在细胞凋亡的内在途径(18]。线粒体膜电位的变化观察与N-phenylmaleimides当B16F10细胞治疗,和证明解偶联剂的效果可以与细胞死亡的作用机制引起的这些化合物(图1)。奇怪的是,M9,提出更高的细胞毒性在体外没有显示antitumoral活动在活的有机体内化验。

普拉多博物馆等。6),还显示,一些N-phenylmaleimides抑制耗氧量的二磷酸腺苷(ADP),这个效果是呼吸链酶复合体的抑制有关。马来酰亚胺引发的线粒体的变化可能是一个非常有趣的结果,因为线粒体参数的改变可能与细胞凋亡有关。

氧化应激增加观察TBARS和汽蚀余量的分析表明,黑色素瘤肿瘤诱发的生产活性物种,导致脂质过氧化作用随之增加。越来越多的证据表明,癌细胞一般正在增加氧化应激与正常细胞相比,其中包括增强活性氧(ROS),增加积累ROS-mediated反应产品和抗氧化酶的表达13]。

M7强烈诱导脂质过氧化反应的治疗,表明这一效应相关的作用机制。增加细胞氧化剂可能涉及一些信号转导途径,最终导致肿瘤细胞的敏感性增强。在先前的研究中,我们已经表明,细胞质和线粒体谷胱甘肽耗竭和自由基生成在肿瘤细胞可能与氧化还原电位改变诱导细胞死亡的凋亡,可能通过细胞色素c的释放19- - - - - -21]。化合物诱导黑素瘤细胞的氧化应激可能提供一个候选目标的治疗目的。活性氧的生产和激活caspase-9和3发生后凋亡过程中经常报道结果的氧化还原平衡22]。

诱导的氧化应激可能与激活还存在,因此细胞凋亡有关,因为还存在一些研究报告,azaindazolyl-Indolyl-maleimides能够激活3和7,促进减少bcl - 2表达和伯灵顿的增加表达几种类型的人类癌症线(8,23]。王等人。24)报道,n - 1 - adamantyl马来酰亚胺促进改变细胞粘附分子ICAM-1和beta 1整合素,这种效应可能与马来酰亚胺的能力有关M5和M7减少肺和肠系膜转移(Figure.3B 3 f和3 h)。

根据本文中所示的结果,治疗与M5和M7和M2比治疗更有效,M9模型中使用在这项研究中,因为M5和M9有效减少肿瘤大小和转移过程。行动的马来酰亚胺机制的差异可能是由于不同的化学结构。M2是一个未被取代的N-phenylmaleimide, M9乙基之间的酰亚胺环和芳环和M5 M7芳环取代基组,与疏水和给电子体特征。

类似的效应被男观察et al。25)与N-aryl马来酰亚胺抑制Bfl-1表达式,bcl - 2家族的一个抗凋亡蛋白。结构与活性关系的分析显示得环上的取代和马来酰亚胺环系统中胺的变化,一个氯取代基的必要性以及一个双键的马来酰亚胺环结构方面主要是抑制Bfl-1 [25]。

先前的研究与马来酰亚胺表现出强烈的真菌的活动对标准化的白念珠菌临床分离株和non-albicans念珠菌,这活动是依赖于每个马来酰亚胺的化学结构。作者还提出了一个研究马来酰亚胺稳定水介质和证明这些分子是稳定的11]。

根据马来酰亚胺的结构,酰亚胺环和芳香环之间的距离,引入不同的取代基不同,可能与他们的活动的一个重要因素。一些作者表明,酰亚胺环和芳香环之间的距离直接相关的抗真菌和抗菌活性和其他生物效应这些分子(6]。

马来酰亚胺的抗菌活动报道Cechinel-Filho et al。26)表明,环酰亚胺双键是活动的一个重要因素。电子基,吸电子取代基的芳环N-phenylmaleimides减少这些化合物的活性,表明立体效果的可能性。芳香和酰亚胺环之间的距离相隔不会影响抗菌活性亚甲基组。从我们的结果,似乎必须直接连接到芳环酰亚胺环,以及取代基可以绑定到芳环,如甲基在M5,赋予更多的亲油性。考虑到我们的有前景的结果和研究活动的物理化学参数的重要性,我们的研究小组计划的延续这些研究寻找其他相关化合物的生物评价和应用不同的结构活性关系的方法。

此外,拥有一种环状α的马来酰亚胺,β-unsaturated酮都进行了广泛的探索抗肿瘤药物,因为这通常化工集团增加细胞毒性,DNA结合和拓扑异构酶抑制和行为thiol-alkylating代理拓扑异构酶ⅱ(27]。

证实这一假设,一些报告状态,马来酰亚胺与疏水性最好交互领域基于失活的酶的巯基组织大大地受侧链长度的衍生品8,28]

血液参数是一个有价值的工具,用于评估损伤肝脏,脾脏和骨髓,是由某些物质引起的,和血清转氨酶活动被称为肝毒性的标志。这些酶的活动的增加表明可能的毒性肝炎。本研究的结果显示明显海拔AST和ALT活动老鼠接受M9。马来酰亚胺造成血液中的一些改变参数,一个非常好的迹象与常规化疗相关的严重副作用。

通常,肝细胞损伤的特点是增加等离子体酶(AST、ALT、LDH、GGT、等等)。高浓度的AST出现在许多组织(肝脏、肾脏、心脏和胰腺)。然而,ALT主要是局部肝细胞的胞质。因此,这种酶被认为是一个良好的肝细胞损害的标志(29日]。因此,增加肝酶由M9治疗可能表明这种化合物可能的肝毒性,尽管肝脏的显微镜检查显示没有变化。

脾肿大肿瘤是一种常见的病理变化状态和可能与激活体液免疫(30.]。melanoma-tumor-bearing小鼠的脾肿大观察只有M7治疗逆转。然而,根据文献,肿瘤小鼠的脾肿大可能表明Th2-related体液免疫,增强,减少了治疗涉及下调的Th2反应没有影响巨噬细胞的功能和/或自然杀伤细胞(30.]。

结论

总之,我们首次显示,N-phenylmaleimide衍生品相关药理性质在活的有机体内显然,包括antitumoral活动和轻微的毒性。治疗N-phenylmaleimides造成一些改变小鼠的体重增长和。重要方面相关的结构和抗肿瘤活性也显示,尽管传达SAR研究已经完成。antitumoral效果观察N-phenylmaleimides指出本研究的应用前景,但还需要进一步的研究来阐明antimelanoma活动机制,定义其他更积极的使用特别是M5和M7为模型化合物。

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