不同产地缬草石油提取物对小鼠抗焦虑活性的比较

摘要

Valeriana jatamansi Jones。(科-缬草科)是一种多年生草本植物或灌木，具有短的，通常气味强烈的根茎。广泛分布于喜马拉雅西北部至不丹的温带寒冷地区，海拔1200-3000m。本研究的目的是测试缬草的抗焦虑作用。它生长在印度和巴基斯坦。以75、150和300 mg/ kg剂量的硫喷妥钠诱导小鼠睡眠为实验对象，用行走活动、升高+迷宫、自发运动活动、运动协调活动来评价两种提取物的石油醚提取物。在行走和升高的迷宫试验中，提取物均产生显著的剂量依赖性活性。使用光强计测量的自发运动活动计数，在给药后120分钟，两种提取物均显著降低。所有提取物均未产生骨骼肌松弛作用。两种提取物都对硫喷妥钠睡眠时间产生显著的剂量依赖性延长，其中巴基斯坦缬草提取物比印度缬草更有效。由此可见，巴基斯坦缬草比印度缬草具有更高的抗焦虑潜力。

关键字

行走活动，高架加迷宫，自主运动，运动协调，硫喷妥钠诱导睡眠。

简介

全世界十分之一的人患有焦虑症。1这是一种对生活质量有重大负面影响的疾病。众所周知，治疗焦虑最常用的是苯二氮平类化合物(BDZ)，但不幸的是，这类化合物的安全边际非常窄，这引发了许多研究[2］．我们有幸拥有世界各地丰富的自然动植物资源，这重新激发了人们对传统药物的兴趣和需求。3.］．

缬草属属于缬草科，有250多种，原产于欧洲和亚洲。在世界各地，缬草因其镇静特性而被用于传统医学[4］．这些品种已被发现对治疗高血压、抽搐、肠易激综合症和焦虑有用[5］．

Valeriana jatamansi Jones。是一种多年生草本植物，分布在从巴基斯坦到不丹的喜马拉雅山脉，海拔1800 - 3000米之间。这种植物的根和根状茎富含芳香挥发油和缬氨酸。根中还含有生物碱，即几丁氨酸和缬氨酸[6］．不同来源的植物、不同的生长条件、不同的采集和贮藏条件下植物的植物成分存在很大的差异。因此，我们对印度和巴基斯坦种植的两种缬草的抗焦虑潜力进行了研究。

材料与方法

植物材料

印度和巴基斯坦品种Valeriana jatamansi Jones的干根和根茎均购自Natural偏方有限公司。班加罗尔。这两个样本都由新德里国家科学传播和信息资源研究所植物标本室和原材料主管部门H.B Singh博士鉴定，凭证标本(NRVA-01/08-09)和(NRVP-01/08-09)保存在卡纳塔克邦Ligayat教育协会Hubli药学院生药学和植物化学系，以备将来参考。

植物材料加工

用石油醚(40-60)在40°C下回流提取印度和巴基斯坦缬草的根和根茎。萃取物在旋转闪蒸器中减压过滤浓缩。印度和巴基斯坦品种的百分率分别为0.35和1.1%。

动物

从CPCSEA批准的注册育种商购买20-25克白化小鼠，用于急性毒性研究和镇静活性。实验开始前，动物在室温(27±2?C)下饲养一周，以适应实验室条件;他们被免费提供水和标准的老鼠饲料。实验方案得到了机构动物伦理委员会(KLESCOPH / IAEC)的批准。Clear / 2008-09 / Ph.D date 28/01/2009)。

急性毒性研究

急性毒性研究根据OECD指南进行，在评估每种提取物的镇静活性之前采用上下法。

药理评价

治疗计划

采用行为学研究、行走活动、升高+迷宫、自主运动活动、运动协调活动和硫喷妥钠诱导睡眠试验检测其抗焦虑活性。动物被分为8组，每组由6只白化小鼠组成。第一组接收车辆(Tween-80);2组给予标准药，3 ~ 5组给予印度缬草石油醚提取物，剂量分别为75、150、300 mg/kg BW;6 ~ 8组分别以75、150、300 mg/kg BW剂量注射巴基斯坦缬草石油醚提取物。

行为的影响

使用Achliya等人2005年描述的方法评估行为效果。给药30分钟后观察动物行为变化，直至2小时。观察参数包括体位、运动、后仰、呼吸、伸直反射和流泪[7］．

非固定的活动

根据ganzales -trujano M.E et al 2007年发表的方法研究了游离活性。灌服缬草提取物60分钟后，将每只小鼠放入分成12格(4 × 4厘米)的笼子中。每只老鼠在2分钟的时间间隔内探索的方块数量被记录为走动活动[8］．

增加迷宫活动

在本研究中使用的高架加迷宫装置包括四个臂，高出地面40厘米。两支敞开的手臂(25 X 5厘米)，面对面，两支封闭的手臂(25 X 5 X 15厘米)，开放的屋顶和墙壁。每只鼠标分别放置在中央平台上，面向张开的手臂。在5分钟内观察进入任何一组的次数以及在两组中每一组所花费的总时间。实验在上午9点至下午16点之间进行[9］．

自发运动

在自发运动活动中，给药30分钟后，使用活动笼(INCO, Medicraft Mumbai)记录自发运动活动，并自动计数动物在笼底的运动。记录每只动物的运动计数，每隔30分钟记录5分钟，持续2小时。将结果与标准地西泮(5mg /kg p.o)进行比较[10］．

运动协调活动

Rota棒装置由一个基础平台和一个直径3厘米、长30厘米的铁棒组成。这根棒子被两个圆盘分成三个相等的部分。这使得三只老鼠可以同时在杆子上行走。动物被训练在以30转/分钟的速度旋转的杆上停留5分钟。第二天，分别口服标准或缬草提取物，并在治疗前和治疗后30分钟评估其在旋转杆上的保留能力。记录每只动物从杆子上脱落的时间[11］．

对硫喷妥钠诱导睡眠的影响

使用Rakotonirina等人2001年描述的方法。用100mg /kg硫喷妥钠处理小鼠，研究了缬草提取物的睡眠诱导或增强作用。在注射硫喷妥钠前30分钟给药试验组和对照组的吐温-80 (5% w/v)的不同提取物。计算服用硫喷妥钠后睡觉的小鼠数量。通过观察矫直反射的恢复来测量睡眠时间[12］．

统计分析

所有数值均以均数±SEM表示。采用单因素方差分析(ANOVA)和Dunnett检验，将提取液与标准药物和对照组的上述参数值进行比较。P<0.05、P<0.01、P<0.001为组间差异有统计学意义。

结果

急性毒性研究

从印度和巴基斯坦提取的缬草石油醚提取物经口服剂量达到2000 mg/kg体重后是安全的。在此剂量24小时内未观察到死亡。

行为评估

口服缬草提取物后观察2 h。这两种提取物都显示出对触摸和刺激的警觉性、运动和反应性降低。治疗组呼吸正常。实验动物体位、运动、呼吸和返流正常。

走动和升高加上迷宫活动

在提取物治疗组观察到剂量依赖性的活动下降。印度和巴基斯坦缬草提取物在300 mg/kg时，动物走过的方格数量显著减少(P > 0.001)。活动活性的降低与标准地西泮(1 mg/kg)相同。

在高架+迷宫试验中，300mg /kg的巴基斯坦缬草石油醚提取物在开放臂中花费的时间显著增加(201.19±11.58秒)。用同样剂量的印度品种处理的动物在开放侧臂中停留时间为181.37±11.9秒。以1毫克/公斤标准安定治疗的组如预期的那样，在张开手臂上花费的时间显著增加。结果描述在表1．

自发运动

与对照相比，印度和巴基斯坦品种缬草的石油醚提取物在300 mg/kg时，其自发运动能力显著降低(P>0.001)。地西泮组动物的运动能力也显著下降(P>0.001)。观察结果已给出表2．

运动协调

在300 mg/kg剂量水平下，两种缬草提取物均未引起动物运动不协调。与对照动物相比，标准地西泮(5mg/kg p.o)表现出明显的运动协调性降低。(数据未显示)。

对硫喷妥钠诱导睡眠的影响

如表3巴基斯坦品种提取物(300 mg/ kg)预处理可延长硫喷妥钠诱导小鼠睡眠的持续时间。300毫克/公斤的印度缬草提取物和150毫克/公斤的巴基斯坦品种显示出中等活性，而其他组显示出较低的活性。

讨论

大多数焦虑障碍的病因尚不清楚。近年来，情况变得有些明朗了。在用于治疗精神病的药物中，苯二氮卓类化合物是最常见的，尽管它们有不良反应。γ氨基丁酸(GABA)在焦虑中的作用已得到证实[13］．

草药抗焦虑药的gaba能作用已在文献中报道过[14］．存在于挥发油中的单萜对GABAA受体的几种亚型有活性[15］．(+)冰片，一种双环单萜已被报道对GABA受体有正向调节[16］．

在我们的研究中，这两种缬草的石油醚提取物表现出低毒性，这反映在高LD50值上。在给药后30分钟，用两种提取物的石油醚处理的小鼠观察到显著的中枢神经系统依赖作用，如警觉性降低、运动和对外部刺激的反应减弱。

两种缬草提取物均可降低小鼠的活动能力，这说明两种提取物均含有镇静成分。150mg / kg的巴基斯坦缬草石油醚提取物显示出比标准地西泮(1mg / kg)更好的动态活性。

在正迷宫的张开臂中停留的时间是抗焦虑活性的代表性指标。结果表明，两种提取物在升高+迷宫试验中均表现出显著的剂量依赖性活性。在所有测试剂量中，巴基斯坦缬草提取物均表现出比印度缬草更好的活性。

这两种提取物都能诱导通过自发运动活动获得的运动抑制剂效应。150毫克/公斤的巴基斯坦缬草在给药90分钟后，运动能力显著下降。在给药后120分钟，两组均记录了剂量依赖的运动活动。

由作用于中枢神经系统的药物产生的运动功能受损使用罗塔棒测试进行预测。这两种提取物都不能使动物的骨骼肌松弛。

对印度缬草和巴基斯坦缬草挥发油进行了气相色谱质谱分析。巴基斯坦缬草挥发油中冰片的含量高于印度品种。(数据未显示)。

生态、环境和遗传因素被认为在决定植物中存在的植物成分的本质方面起着重要作用。两种品种的比较表明，在实验模型中，巴基斯坦缬草石油醚提取物比印度缬草具有更强的抗焦虑反应。结果表明，缬草提取物的抗焦虑作用可能与(+)冰片的存在有关。需要进一步研究缬草提取物的确切作用机制以及负责抗焦虑活性的活性成分。

确认

作者非常感谢KLES药学院院长B. M . Patil博士和自然疗法私人有限公司研发总监Amit Agrawal博士。班加罗尔为这项研究的开展提供了技术支持。

参考文献

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2. 哈德曼·乔尔，林伯德。李,2011年。古德曼和吉尔曼的《治疗的药理学基础》，麦格劳希尔，纽约。
3. Kokate CK。Purohit AP.和Gokhale, s.b.， 2011。生药学，第41届，Nirali Prakashan，浦那。
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