0.3%蜂胶、10%楝树、10%三倍子和5%次氯酸钠对根质上形成的白色念珠菌和粪肠球菌生物膜的抗菌效果比较:inÃⅱÂ ' Â '体外研究

摘要

介绍:白色念珠菌和粪肠球菌是最常见的微生物分离失败的根管病例。由于用于根管消毒的合成药物耐药菌株和副作用的不断增加，促使研究人员寻求草药或其他天然替代品。目的:评价并比较0.3%蜂胶、10%楝树、10%三倍草和5%次氯酸钠作为根管灌洗液对白色念珠菌和粪肠球菌生物膜的抗菌效果。材料与方法:将50颗拔除的人下颌前磨牙进行生物力学制备，垂直切片，置于根管表面暴露于分别用Sabouraud葡萄糖琼脂和脑心灌注汤培养的白色念珠菌和粪肠球菌的组织培养孔中形成生物膜。2周结束时，将标本随机分为4组，每组试验组10个标本，对照组5个标本。实验组标本用5 ml试验液处理10分钟后，刮除根管部分的牙本质，接种于各自的培养基上，37℃孵育24小时。采用数字方法统计菌落形成的数量，所得数据采用单因素方差分析进行统计分析，然后进行事后检验。结果:实验组微生物计数明显低于对照组，p值<0.001。组间比较显示，印楝、三倍体和次氯酸钠对白色念珠菌的抗菌活性无差异，而蜂胶的抗菌活性较低。对于粪肠球菌，三帕拉和次氯酸钠之间无静态显著性差异，而蜂胶和楝树则无效。 Conclusion: Triphala and NaOCl show best antimicrobial activity against both Candida albicans and Enterococcus faecalis, whereas Neem is effective against C. albicans and Propolis against E. faecalis.

关键字

白色念珠菌，粪肠球菌，次氯酸钠，蜂胶，三帕拉，楝树。

简介

在长期根尖周感染或再治疗病例中最常见的微生物是白色念珠菌而且粪肠球菌．由于生物膜的形成，这两种微生物都能在恶劣条件下生存，它们的物理化学性质可以根据环境和营养条件改变它们的流行情况[1］．

次氯酸钠已被广泛用作消除这些微生物的冲洗剂，但需要小心处理，因为有几个因素与它的安全问题有关。它的主要缺点是味道不好，毒性大，对仪器有腐蚀性。2]无法去除涂抹层及牙本质弹性模量及弯曲强度降低[3.］．这些缺点促使研究人员寻找其他替代品。

蜂胶是一种褐色树脂物质，主要由蜜蜂从植物中收集，用于加固蜂箱，保持环境无菌。由于黄酮类化合物、酚类化合物和其他芳香族化合物的存在，它是一种有效的抗菌、抗氧化和抗炎剂[4］．

印楝汁有广泛的治疗作用。Neem阐述了大量化学多样性和结构复杂的生物活性化合物。印楝叶及其成分已被证明具有免疫调节、抗炎、抗真菌、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗诱变和抗癌特性[5］．

Triphala是一种印度阿育吠陀草药配方，由三种药用植物的干果和粉末组成(榄仁树属bellerica，榄仁树属chebula而且兰officinalis)．具有潜在的抗菌活性和抗炎活性[6］．

本研究的目的是评价市售0.3%蜂胶、10%印楝、10%三倍子的抗菌效果，并与5%次氯酸钠作为根管冲洗剂进行比较粪大肠而且白念珠菌拔除的人牙根管牙本质上形成生物膜。

经检验的原假设是，所测试药物的抗菌功效没有差异。

材料与方法

白念珠菌而且大肠fecalis文化的准备

纯正的文化白念珠菌[ATCC 10231]在Sabouraud葡萄糖琼脂中生长，用无菌脑心灌注肉汤和调整到最佳密度粪大肠[ATCC 29212)]在Muller - Hilton琼脂中培养，用无菌Muller - Hilton肉汤调整至最佳密度，分别在37°C下培养过夜。

测试解决方案

本研究测试了下列市售产品:

1.印度楝树10%(生物绿色保健，孟买)

2.Triphala Ras 10%(生物绿色保健，孟买)

3.蜂胶0.3% (Herb Pharma，美国)

4.5%的次氯酸钠。(Nice Chemicals, Kochin)。

牙齿样本制备

50颗单根人前磨牙在牙釉质-牙釉质交界处以下进行切片，以获得8毫米的标准化牙长。牙齿表面的碎屑、牙石、组织标签被清洗干净，并储存在生理盐水中。

然后使用冠下技术和旋转仪器将根管固定到ProTaper F3的根尖大小。在清洗和整形过程中，每个仪器之间使用EDTA和盐水。

将所有牙齿沿中矢状面垂直切成两半，在121℃下蒸压两次30min，以确保完全灭菌。将凹形牙面进行最小程度研磨，使其表面平整，以便放置于组织培养孔中，使根管表面暴露于白念珠菌而且粪大肠形成生物膜。为了在牙本质小管中为细菌生长提供一个丰富的环境，使用了Sabouraud葡萄糖琼脂和脑心输液(BHI)培养基。之后，样品在37°C下孵育2周。

分组及评估方案

将样本分为4个实验组，每组10个样本，另设阳性对照组和阴性对照组，每组5个样本:

1.第1组- 0.3%蜂胶

2.第二组- 10%印楝

3.第三组- 10%三帕拉

4.组4 - 5%次氯酸钠

5.第5组-阳性对照

6.第6组-阴性对照

5个被微生物污染但未接触抗菌药物的样品作为阳性对照，5个未被微生物污染的样品作为阴性对照。

在第二周结束时，所有组都浸泡在5毫升的测试溶液中10分钟。

将根管部分的牙本质刮除并接种于Mueller - Hinton和BHI板上，在37℃下孵育24小时，然后对菌落计数进行数字分析。

然后对数据进行统计分析，采用单因素方差分析，然后进行事后检验进行比较。

结果

实验组微生物计数显著低于对照组，p值<0.001 (表1而且2)．

表1;组间微生物计数比较白色念珠菌．

表2:组间微生物计数比较粪肠球菌．

次氯酸钠、楝树和三苯三酚的抑菌活性差异无统计学意义，而蜂胶对次氯酸钠的抑菌活性较低白念珠菌．

各组疗效排序如下(表3)．

表3:微生物计数的分组比较白念珠菌．

NaOCl ~_ Triphala ~_ Neem >蜂胶

三氯酸钠和次氯酸钠的抑菌活性差异无统计学意义粪大肠而蜂胶的效果较差，楝树也没有效果。

各组疗效排序如下(表4)．

表4:微生物计数的分组比较粪大肠．

Triphala ~_ NaOCl >蜂胶>楝树

讨论

本研究是在白念珠菌而且大肠fecalis生物膜，因为这些微生物在根管感染或根尖周炎的再治疗中经常遇到。结果表明，底物的化学性质影响生物膜的形成能力和结构组织。在聚碳酸酯或玻璃基质上进行的生物膜实验将不能提供细菌-基质相互作用的真实指示。因此，根据Kishen等人的方法，在研究中使用了在牙齿基底上形成的生物膜。[7和Prabhakar等人。[8］．

在本研究中测试的所有抗菌药物的微生物计数都有显著降低，这些药物的抗菌效果存在差异。因此，本研究中检验的原假设被拒绝。

次氯酸钠是一种历史悠久，久经考验的有效根管灌溉剂，被认为是金标准。因此，Triphala, Neem和蜂胶的抗菌效果与次氯酸钠进行了比较。

在本研究中，三帕拉与次氯酸钠同样有效白念珠菌而且粪大肠生物膜。Pujar等人进行的研究[6]和普拉哈卡尔等人[8]也证明了Triphala对粪大肠生物膜。然而，文献中没有Triphala测试的研究白念珠菌．Triphala的抗菌活性归因于其配方中含有三种不同的药用植物，比例相等榄仁树属bellerica，榄仁树属chebula，兰officinalis产生附加的或协同的积极效果的强抗氧化活性可能是许多生物特性的部分原因[9］．

研究中测试的蜂胶具有良好的抗菌作用，但不如次氯酸钠和三苯二甲酸。这与Mattigatti等人在研究中的观察结果相似。[10］．但在Garg等人进行的一项研究中。5]和Tyagi等人。[11］．蜂胶与NaOCl和Triphala同样有效。这可能是由于蜂胶浓度的差异，其中使用了11%的酒精提取物，但在本研究中，商业上考虑的是水溶液中的0.3%蜂胶。蜂胶的抗菌成分的性质尚未阐明，尽管它们属于类黄酮和咖啡酸的各种酯[12］．行动方式需要澄清。蜂胶中一种未知的水溶性紫外线吸收成分已被证明能抑制细菌DNA依赖的RNA聚合酶[13］．同样必须注意的是，不同产地的蜂胶具有不同的成分和抗菌活性。蜂胶的成分变化很大，其原植物与其他药用植物一样需要标准化[14］．

楝树是本研究中测试的另一种草药提取物，其抗菌效果与NaOCl和Triphala类似白念珠菌生物膜，但对粪肠球菌无效。这与Paridhi等人的研究一致。[5两项研究都使用了印度楝树的水提取物。Tyagi等人[11]也观察到印楝有良好的抗菌作用白念珠菌．Bohora等人[15他观察到印楝叶提取物对这两种细菌都有显著的抗菌作用白念珠菌而且粪大肠．这可能是由于楝树所用的方法和溶剂，以及浓度和制备方法的差异。印楝具有抗菌特性，因为它含有生物碱、糖苷、黄酮类化合物、类固醇、蒽醌和单宁酸。

在查阅文献后，我们的一般观察是，对各种微生物进行测试的各种草药制剂的提取，以及溶剂和产品的浓度，都没有标准化的方案。因此，在我们的研究中，我们使用了市售产品。然而，强烈推荐一种标准的草药制剂提取方案，以利用其在根管学中作为根管消毒剂的好处。

结论

在本研究的限制下，我们得出结论，三倍体与次氯酸钠在抗粪大肠而且白念珠菌根本质上形成生物膜。

考虑到一些可取的特性，使用草药替代品，如三根草作为根管灌溉可能被证明是有利的。需要进一步的研究来最终推荐草药溶液作为根管灌溉剂。

确认

我要感谢Trivandrum Biogenix研究中心的Rajesh博士和孟买Biogreen卫生保健公司的Tendulkar先生，该中心进行了微生物评估。

参考文献

1. Waltiom TM，等。根管酵母菌感染的临床研究。endd Top, 2004;9:66-78。
2. 次氯酸钠在牙髓学中的应用。中国科学院学报，2008;29:329-341。
3. Sim TP，等。次氯酸钠对牙本质力学性能及牙面应变的影响。(1)张志强。
4. Kandaswamy D，等人。用2%洗必泰凝胶、蜂胶、森达叶汁、2%聚维酮碘、氢氧化钙消毒牙根小管。清华大学学报(自然科学版)，2010;
5. Garg P，等。蜂胶、印楝、印楝、绿茶多酚和5.25%次氯酸钠抗菌效果比较肠球菌fecalis生物膜。沙特牙髓病杂志2014;4(3):122-127。
6. Pujar M，等。三倍子、绿茶多酚和3%次氯酸钠的抑菌效果比较粪肠球菌牙基质上形成生物膜:在体外．JIOH。2011; 3:23-29。
7. Kishen A，等。Enterocossusfaecalis药物生物矿化生物膜在根管牙本质的体外形成。中国生物医学工程学报，2006;
8. Prabhakar J，等。评价草药替代品(三倍子和绿茶多酚)、MTAD和5%次氯酸钠对粪肠球菌牙基质上形成的生物膜:体外研究。J endd . 2010;36:83-86。
9. 药用植物抗糖尿病活性及其与抗氧化性能的关系。乙醇药理学杂志，2002;81:155-160。
10. Mattigatti S，等。常规根管药物蜂胶的抑菌效果肠球菌facalis，金黄色葡萄球菌而且白色念珠菌．中华实用医学杂志，2010;13(3):305-309。
11. Tyagi SP，等。蜂胶、印楝、印楝和5%次氯酸钠对牙底形成的白色念珠菌生物膜的抗菌效果比较。生态学报，2013;16(6):532-535。
12. Grange JM和Davey RW。蜂胶(蜂胶)的抗菌性能。中华医学杂志。1990;83:159。
13. Simuth J，等。蜂胶紫外线吸收成分对细菌DNA依赖性RNA聚合酶和限制性内切酶的抑制作用。Phaemazie。1986;41:131 - 132。
14. Bankova .蜂胶的化学多样性和标准化问题。中华民族药物学杂志，2005;10(1):1 - 7。
15. Bohora A，等。印楝叶提取物与2%次氯酸钠抑菌效果比较粪大肠，白念珠菌和混合培养-体外研究。牙髓。2010;22(1):8 - 12。