比较四种快速诊断试剂盒的免疫层析法检测甲型和乙型流感病毒

文摘

摘要目的:的目的是比较四个商业快速流感病毒抗原检测的性能测试工具,即QuickNavi-Flu (Denka Seiken,东京,日本),Alere BinaxNOW流感方式测定(Alere斯卡伯勒,斯卡伯勒公司,斯卡伯勒,我,美国),KaiBiLi创世纪流感方式抗原测试(创世纪、杭州、中国)和Actim流感方式(Medix加压,Kauniainen,芬兰)。

方法:帽熟练测试标本和正常人类肺成纤维细胞细胞的超声溶解产物(MRC-5 2.9×106 /毫升)作为标本。甲型和乙型流感的上层清液作为股票的解决方案,而且,使用生理盐水,是1:10稀释,然后连续稀释至1:10 0,1∶1:400,1:800 1:1600,1:3200。稀释的分别测试来评估这些工具的敏感度。呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒2型和MRC-5细胞作为样本来评估这些工具的特异性。甲型流感(H1N1)的稀释1∶甲型流感(H3N2) 1:10 0的稀释和乙型流感在稀释1:10 0被用来检测重现性。每个样品测试9倍。

结果:在这个实验中,四个商业工具显示相同的检测极限甲型流感(H3N2),所有的包不能给稀释阳性结果低于1:10 0。相反,不同的检测限制了甲型流感(H1N1)和甲型流感(H1N1)流感b,积极的结果可以用稀释在1:800快速获得纳流感还积极的结果只能获得1:200使用稀释的其他三个包。所有结果表明,及时发现了更好的灵敏度比延迟检测除了检测甲型流感(H1N1)阿勒尔BinaxNOW装备公司的干标本给更高的灵敏度。Actim装备显示阳性结果为乙型流感检测超声波MRC-5细胞溶解产物时,说明假阳性结果可以获得当检测标本含有相关组件MRC-5细胞使用Actim工具包。没有非特异性大其他三个包。一般来说,这些工具提供了良好的再现性,除了甲型流感(H1N1)检测结果阿勒尔BinaxNOW公司使用工具是不一致的。

结论:各种性能的检测发现了甲型和乙型流感病毒使用四个快速免疫色谱法诊断工具在中国最常用。

关键字

甲型、乙型流感快速诊断敏感性,特异性

介绍

背景

流感病毒是一种包膜RNA病毒和科的一员。它可以感染人类和多种动物。流感病毒感染是负责重要的儿童和成人人口的发病率和死亡率在世界范围内,尤其是流感病毒A和B (1- - - - - -3]。快速诊断试剂盒可以检测甲型和乙型流感病毒的免疫层析法由不同的制造商,虽然有助于早期诊断,可能相差很大的敏感性和特异性2,4]。在这项研究中,我们比较四个快速流感诊断工具的性能目前在中国使用为了给见解和建议流感在医院实验室筛查工具的选择。

目标

的目的是比较四个商业快速流感病毒抗原检测的性能测试工具,即QuickNavi-Flu (Denka Seiken,东京,日本),Alere BinaxNOW流感方式测定(Alere斯卡伯勒,斯卡伯勒公司,斯卡伯勒,我,美国),KaiBiLi创世纪流感方式抗原测试(创世纪、杭州、中国)和Actim流感方式(Medix加压,Kauniainen,芬兰)。这项研究是在高等教育和教学医院的临床实验室在北京,中国。

研究设计

标本

帽熟练测试标本(重组与2毫升无菌蒸馏水和冰箱储存在-70°C)包括甲型流感、新喀里多尼亚/ 20/99 (H1N1, VR1-15, 2012),甲型流感,威斯康辛州/ 67/05 (H3N2, VR1-08, 2015),乙型流感,佛罗里达/ 04/06 (VR1-04, 2015)、呼吸道合胞体病毒(VR1-18, 2015),腺病毒(VR1 - 17, 2015),和副流感病毒病毒2型(VR1-14, 2015)在本研究中进行了测试。超声溶解产物正常的人类肺成纤维细胞(写明ATCC ccl - 171 MRC-5或美式文化收藏、马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)浓度为2.9×106 /毫升也测试控制。

方法

检出限和稳定性评估干标本

甲型和乙型流感的标本从-70°C的冰箱里,然后检索在2000转离心5分钟后完全融化和混合。甲型和乙型流感的上层清液作为股票的解决方案,而且,使用生理盐水,是1:10稀释,然后连续稀释至1:10 0,1∶1:400,1:800 1:1600,1:3200。股票和稀释溶液作为样品和检测到的四个并行测试套件。Manimulations执行的所有样品都是在生物安全柜(美国贝克公司杂志加尔省III)。50 ul的每个样本都被添加到测试仔细拭子和棉签彻底被允许吸收液体。两个棉签准备每个测试在同一时间。的拭子样品后立即测试之外,另抽汲测试30分钟后在生物安全柜空气干燥。化验是根据每个制造商的指令执行。

特异性评估

标本呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒病毒2型和超声溶解产物正常人类的肺成纤维细胞(MRC-5)细胞从-70°C的冰箱里,然后检索漩涡后完全解冻。这些标本是作为样品和测试没有进一步稀释。50 ul的每个样本都被添加到测试仔细拭子和棉签彻底被允许吸收液体。然后拭子样品后立即进行了测试。所有的样品操作已完成内部生物安全柜和化验根据每个制造商的指示进行。

再现性评估

甲型流感(H1N1)的稀释1∶甲型流感(H3N2)在1:10 0的稀释,稀释的乙型流感1:10 0的再现性作为样本来检测这四个测试套件。50 ul的每个样本都被添加到测试仔细拭子和棉签彻底被允许吸收液体。三个棉签准备和测试立即为每个测试在同一时间。另外三个棉签准备和测试30分钟后,三个进一步拭子在60分钟后准备和测试。每个样品测试9倍。

结果

检出限和稳定性评估干标本的结果

在这个实验中,四个商业工具显示相同的检测极限甲型流感(H3N2),所有的包不能给稀释阳性结果低于1:10 0。相反,不同的检测限制了甲型流感(H1N1)和甲型流感(H1N1)流感b,积极的结果可以用稀释在1:800快速获得纳流感还积极的结果只能获得1:200稀释的使用其他三个包(表1)。

表1:检测极限和稳定评估的结果为干标本,注意:w +,弱阳性;大众+非常弱阳性。

为稳定评估干标本,所有结果表明,及时发现了更好的灵敏度比延迟检测除了检测甲型流感(H1N1)阿勒尔BinaxNOW装备公司的干标本给更高的灵敏度。

特异性评估结果

Actim工具包在这个实验中,显示阳性结果为乙型流感检测超声波MRC-5细胞溶解产物时,说明假阳性结果可以获得当检测标本含有相关组件MRC-5细胞使用Actim工具包。所示表2,没有非特异性大的其他三个包在这个实验中。

表2:特异性的结果评估,注意:w +,弱阳性。

再现性评估结果

一般来说,这些工具提供了良好的再现性,除了甲型流感(H1N1)检测结果阿勒尔BinaxNOW公司使用设备是不一致的表2和3显示。

表3:结果重现性的评估;注意:w +,弱阳性;大众+非常弱阳性。

讨论

新的H1N1大流行性流感病毒出现在2009年4月在墨西哥,蔓延到中国2009年5月5]。2月28日病毒造成793人死亡,2010(中国疾病预防控制中心官方数据)。从那时起,这种病毒筛查患者疑似流感症状被广泛在紧急进行实验室或中国很多医院的急诊室,这对神经氨酸酶抑制剂治疗和医院的目的感染控制等的决心与疑似流感感染孕妇是否可以与其他孕妇在同一个病房住院。快速流感诊断测试(RIDTs)是易于使用和快速的周转时间。然而,RIDTs已被证明有灵敏度不佳(40 - 70%)相比,rt - pcr或病毒文化(6- - - - - -10]。尽管RIDT证明变量敏感性,他们仍然选择在大多数的考验临床病毒学世界各地的实验室由于速度在试验过程中获得的结果和简单11]。调查包括240年美国医院实验室RIDT是唯一可用的诊断测试在67%的流感实验室(12]。

在中国,目前有超过30种国内流感快速检测盒和超过10种进口流感快速检测盒CFDA批准。然而,这些工具的品质参差不齐。POCT流感检测试剂盒灵敏度低的问题,因此,选择的包质量好(敏感性和特异性)和合理的价格是非常重要的。大部分的实验室从事流感筛选流感实验室和不专业的方法可以使用选择工具是有限的,有时是盲目的选择或随机。在这项研究中使用的方法很简单但是很有效,并且可以推荐综合医院的实验室。如果VR1帽EQA标本并不可用,实验室也可以使用PCR-confirmed流感积极或消极的标本。在这项研究中,我们没有使用最近的病毒隔离测试有两个原因。第一个原因是我们最近没有上述病毒的隔离。第二个原因是,VR1 PT样本的结果可靠,因为这些结果来自200多个结果病毒学实验室参与全世界帽熟练测试。在这项研究中,我们也要确定是否有任何可能性,流感病毒的快速免疫色谱法诊断工具可以与正常细胞有交叉反应。我们正常细胞BGMK、维罗HEp-2,真品,Hela229 MRC-5在我们的实验室。MRC-5细胞系是人类胚胎肺成纤维细胞细胞和可能更接近人类的呼吸道上皮组织因为呼吸道样本通常是收集的流感病毒测试。

评估不同的包,选择灵敏度最高的设备是非常重要的,因为有大量的病人发烧门诊需要流感筛查。积极的需要进一步确认通过PCR、治疗药物如神经氨酸酶抑制剂,和适当的隔离控制措施13、14所示。另一方面,最具成本效益的选择也是非常重要的,行政程序的需要。

的测试步骤四包在这项研究非常相似,操作方便,但操作所花费的时间,等待结果阅读是不同的。对于QuickNavi TMFlu,它需要不到1分钟预处理样品,另一个8分钟阅读样本添加到带后的结果。阿勒尔BinaxNOW KaiBiLi《创世纪》,公司对他们也要求小于1分钟预处理样品,但需要额外的15分钟来阅读样本添加到带后的结果。Actim TM,它需要5分钟预处理样品,另一个样品后10分钟读结果添加到带。在我们看来QuickNavi TMFlu是最方便的四个包测试。

尽可能多的呼吸道标本是由医生和干棉签转移到实验室进行测试一段时间后在我们医院,我们旨在比较测试敏感性之间的新鲜拭子和干拭子样本。结果表明,敏感性略降低了三个包在一个工具包在我们的研究中,轻微的增加。

作为本研究的限制,只有保存帽PT标本时比较测试中出现临床样本并不包括在内。同时,这些标本可能不代表所有临床样本中包含的病毒类型可以在不同的季节。在这项研究中,我们添加了统一的模拟样本调查使用统一的处理方法,但在实际临床情况的样本集合可能不是那么容易,很大程度上可能会有所不同。我们的研究结果还暗示不同的包可能有各种性能的检测。使用第二种方法来检测呼吸道病毒分子检测等关键与呼吸道病毒感染患者被怀疑是至关重要的,可以提高病人护理。

总之,我们的调查表明,最敏感的设备检测甲型流感(H1N1)在四个包纳快速流感测试;阿勒尔BinaxNOW工具包可能是公司而不是很稳定,当检测甲型流感(H1N1)。Actim包可能会给假阳性结果时检测标本含有MRC-5细胞相关的组件。我们的研究结果暗示不同的包有不同的性能测试。可能需要使用分子试验检测或确认呼吸道病毒重要的病人被怀疑感染了流感病毒(12- - - - - -14]。

确认

研究商业测试工具分别由制造商提供。

脚注

作者贡献y z, a . n .负责这项研究的概念和设计;y Z。,Y. W. and A. N. performed laboratory work. Y. Z., Y. W., M. Z., Y. X. and A. N. analysed the results. Y. Z. and A. N. drafted the paper. All authors reviewed the manuscript. This research did not receive any specific grant from funding agencies in the public, commercial, or not-for-profit sectors.

引用

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