关键字 |
| 维达尔试验、Typhifast测试和Typhipoint测试、伤寒、伤寒沙门氏菌 |
介绍 |
| 伤寒发生在世界范围内,主要是在发展中国家的卫生条件差。伤寒流行在亚洲,非洲,拉丁美洲,加勒比地区,和大洋洲,但80%的病例来自孟加拉国、中国、印度、印度尼西亚、老挝、尼泊尔、巴基斯坦、越南[1]。在这些国家,在不发达地区伤寒最常见。伤寒感染约2160万人(发病率3.6每1000人口),每年估计有200000人死亡。9 - 11。大约2200种不同的血清型的沙门氏菌存在于动物和大多数能够导致人类沙门氏菌病。1这些主要分为2组。伤寒肠热病)组,它包括伤寒与副伤寒导致伤寒与副伤寒发烧b)食物中毒,导致肠胃炎,败血症和局部感染(2、3、4)。 |
| 经典的演讲包括发热、不适、弥漫性腹痛,腹泻。治疗伤寒是一种折磨人的疾病,可能进步精神错乱,obtundation,肠出血、肠穿孔,发病和死亡的一个月内。幸存者可能留下长期或永久性的神经精神并发症[5]。伤寒年代名称来源于古希腊typhos,一个飘渺的烟雾或云被认为导致疾病和疯狂。伤寒、晚期的病人的意识水平确实是蒙上阴影。虽然抗生素的频率明显下降伤寒在发达国家,仍然是在发展中国家流行[6]。伤寒年代没有非人向量。口头传播通过被污染的水或甲壳类动物(尤其是发展中国家)[7]。一剂小100000生物导致超过50%的健康志愿者感染[8]。 |
| 在印度,伤寒和副伤寒发烧是流行,通过所有国家发生。伤寒爆发的贫民窟南达姆弹直辖市,西孟加拉、印度2007年[12]。爆发也来自喀拉拉邦的三个村庄,Bhayla和Kalyangadh Bavltaluka艾哈迈达巴德地区由于污染的饮用水供应导致流行病,137人,主要是儿童,在其2009年[13]。在越南,伤寒高度流行,影响最重的南部省份。在一项研究在1995年和1996年,同塔省确诊伤寒血清型感染的发病率是198每100000对所有年龄[14]。新兴抗药性伤寒流行血清型菌株在越南和其他复杂的治疗伤寒和高度需要快速准确的诊断[15]。,不幸的是,无论是维达尔试验仍在广泛使用在发展中国家,也没有任何的血清学测试已经开发已被证明足够敏感,具体和实用价值的这种疾病流行地区(16、17、18、19、20、21、22、23)。因此,将进行比较研究伤寒的维达尔试验和检测试纸测试结果免疫球蛋白IgM为疾病的早期诊断和早期治疗的感染(32、33、34、35、36、37、38)。 |
材料和方法 |
| 病人血清样本。 |
标准样品收集 |
| 之前不需要特别准备病人的样本收集通过批准的技术。不要使用红细胞溶解和浑浊的样本。清洁和干燥的玻璃器皿清洁剂必须用于样本收集。不热灭活血清。虽然刚收集血清是可取的,样品储存在2到-80°C的延迟测试,长达72小时。 |
维达尔试验工具 |
| 生产:郁金香诊断(P)有限公司,生产日期:2012年9月,终止日期:2013年2月,储存温度:4 - 8°C。TYDAL®包含准备使用集中,光滑抗原杆菌悬浮液;伤寒杆菌“O”,伤寒杆菌H, s .甲型副伤寒‘啊’,美国甲型副伤寒‘黑洞’,polyspecific积极控制,与这些抗原活性。细菌的H可凝结的悬架是准备通过添加0.1%福尔马林24小时肉汤培养或生理盐水悬架的琼脂文化。制备O暂停细菌、芽孢杆菌培养在苯酚琼脂(1:800)。增长是刮掉盐水的体积小,混合着20倍体积的无水酒精。然后在40°水浴加热30分钟-50°C,离心机和存款resuspended盐水到适当的密度。然后作为防腐剂添加氯仿。美国901年伤寒,O和H菌株,用于制备抗原。每一批准备抗原应与标准相比。 Widal kits of stained antigens are available commercially (Fig 1-3) |
额外的材料要求 |
滑测试方法 |
| 微量吸液管秒表,变量。 |
定量方法 |
| 计时器,卡恩管/测试管、吸量管(0.1毫升,1毫升),生理盐水,孵化器(37°C),试管架。 |
分离血清样本 |
| 收集的血液样本中收集平原管在2500转离心10分钟。血清分离,用于血清学测试立即或一直冻结在-20ºC,直到使用。 |
测试程序 |
| 保持试剂和样品测试前室温。动摇和混合抗原在配药。 |
滑动屏幕的方法 |
| 地方一滴积极控制反应的载玻片上。地方50μl生理盐水到接下来的反应循环载玻片上。一滴病人的血清检测到每一圈所需数量的反应。添加适当一滴TYDAL®抗原悬挂反应圈包含积极控制和生理盐水。添加适当一滴TYDAL®抗原悬浮液包含病人的血清反应圈。混合内容,每个圆均匀在整个圆与单独的搅拌棒。岩石来回轻轻滑动,并观察对凝集在宏观上一分钟。 |
定量方法:筒测定过程 |
| 采取适当数量的集(要求;一组为每个抗原悬挂)8卡恩管/试管和标签1 - 8。吸管往1号管的集1.9毫升的生理盐水。每个剩余的管子(2 - 8)加1毫升生理盐水。管1号的设置添加0.1毫升的血清样本进行测试并混合均匀。转移1毫升的稀释血清样本管1号管2号,拌匀。转移1毫升的稀释血清样本管2号3号管和混合好。继续这个系列稀释到管在每组7号。丢弃1.0毫升的稀释血清管每组7号。现在的稀释血清样本实现从管1到7号分别在每组如下:1:20,40,接触,1:160,1:320年,1:640,1:1280。管8号所有的集,作为控制盐水。所有的管(1 - 8)每组添加一个删除各自的混合TYDAL®抗原悬浮液的试剂瓶,拌匀。封面和孵化在一夜之间370 c(约18小时)。 Dislodge the sediment button gently and observe for agglutination. |
TYPHIFAST |
| 生产:AB诊断制造(P)有限公司,生产日期:2012年9月,终止日期:2013年3月,存储温度:4-30°C |
Intende使用 |
| Thyphifast测试装置是一个检测试纸测定设计特定IgM抗体的定性检测伤寒沙门氏菌在人类血清、血浆或全血。 |
| typhifast测试设备是一个定性的免疫层析法测试分析人类IgM抗体的检测伤寒在人类血液,血清和血浆。在这个过程中,提取抗原从伤寒沙门氏菌固定化是硝基纤维素膜条测试区域的测试设备上绽开样本添加到样本,其次是追逐缓冲区,样品会向上迁移。如果特定IgM抗体。伤寒样本中它将形成一个antibody-antigen复合物是由黄金随后可视化共轭反人类IgM当追逐缓冲区添加迁移进一步测试区域的膜,形成粉红色紫色颜色线确认测试结果为阳性。没有这个颜色的线在测试区域显示一个负面测试的结果。控制线路包含兔抗羊IgM绑定的山羊反IgM黄金共轭,控制带作为适当的移植+试剂控制的迹象(图4 - 6)。 |
包内容 |
| Typhifast测试设备在一个密封铝袋.Chase缓冲区在滴管瓶(4毫升* 1瓶)。产品插入(一) |
测试程序 |
| 允许测试设备、试剂和患者样本达到室温打开袋和检索设备。删除测试装置的密封铝箔袋。一旦打开,设备必须立即使用。把设备放在一个干净的和水平的表面。标签样本的测试设备的名字。进行试验过程如下图。 |
积极的 |
| 积极为伤寒特定IgM抗体如果彩色乐队出现在测试线(T)和控制(C),任何强度的线应该被认为是积极的。 |
负 |
| -为伤寒特定IgM抗体如果只有控制线(C)通过查看窗口是可见的。 |
无效的 |
| 无效如果控制线(C)是缺席。如果发生这种情况,试验应重复使用一个新的测试磁带。 |
TYPHIPOINT |
| 生产:AB诊断制造(P)有限公司,生产日期:2012年9月,终止日期:2013年3月,储存温度:4 - 8°C |
| Typhipoint是酶免疫测定(EIA)的检测IgM抗体和免疫球蛋白提取的蛋白质的伤寒沙门氏菌血清。具体antiextracted蛋白抗体(IgM和免疫球蛋白)如果出现在人类血清结合硝基蛋白质蛋白质点和阻塞,形成抗原抗体复合物。这个测试只使用1类型的蛋白质。洗后一步,enzyme-labeled兔抗人抗体(抗IgM或抗免疫球蛋白),结合人类的年代。伤寒抗体,然后整个复杂的可视化4-chloro-1-naphthol之外,后来可视化反应蓝色紫色的点。(图7) |
试剂的制备 |
a股洗缓冲区(10倍) |
| 允许试剂达到室温(°C)年龄在18岁至25岁之间。检查股票清洗缓冲集中的盐晶体的存在。如果晶体形成的解决方案,resolubilize变暖在37°C到晶体溶解。稀释股票洗缓冲区(10 x)到最终的浓度1 x(请参考下表)稀释清洗缓冲足以让整个包店分别在2 - 8°C和必要时使用。 |
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b .颜色开发解决方案 |
| 允许试剂混合之前达到室温(18-25oC)。避免暴露这些试剂强烈的灯光。计算体积总试剂使用带使用的数量。总量需要:0.30毫升不带= x体积。混合基质和基质B 1的一部分底物衬底B + 5的一部分。 |
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试验过程 |
注意:所有试剂和测试必须平衡至室温(20 - 25°C)之前使用。 |
| 计算样本的数量进行测试。积极控制-控制和每个样本,2条是必需的。对齐的带马克底部。对于每个样本和控制,使用球点,标签1条像G M和另一个标签编号为积极,消极的控制和每个病人接近米或G。将每条良好的反应与马克一面托盘。300μ的样本稀释剂添加到每个。允许带彻底湿了。3μ的样本或控件添加到一个合适的。轻轻抽出物的解决方案,以确保它正确。摇臂平台上放置反应盘。 (If rocker platform not available, place the reaction well on the bench, and shake it manually every 5-10 minutes). Incubate for 25 minutes. Dilute washing buffer to 1x (see preparation of Reagent). Aspirate the first antibody from each well into the disinfectant. Add 300μl of 1x washing buffer and wash 3x for 5minutes each time. Add 300μl prediluted anti human IgM into the strips with M mark, and 300μl anti human IgG into the strip with G mark. Cover the strips from light and incubate for 45 minutes on the rocker platform (Meanwhile prepare colour development solution). Follow procedure 9 for washing steps. Add 300μl of colour development solution into each well. Place the tray back to the rocker platform. Cover the tray from light. Let the reaction happens for 10 minutes. Stop the reaction by aspirate the colour development solution into the disinfectant and rinse thoroughly with 3x with deionised water. Rinse the reaction tray thoroughly with distilled water. Store dry for re-use. Place IgM and IgG strips according to code and interpret the result. |
解释 |
| 测试被认为是积极的强度等于或大于强度产生积极的控制。比较IgM条需要由控制条IgM抗体呈阳性的比较免疫球蛋白g带需要用免疫球蛋白积极控制条。解释必须完成后直接过程就完成了。 |
结果 |
| 共有100个血液样本的疑似病例伤寒是由a。维达尔试验测试(幻灯片和试管凝集检测伤寒抗体,伤寒沙门氏菌“O”和“H”,甲型副伤寒沙门氏菌“啊”和“黑洞”。)b . Typhifast(检测IgM antityphi抗体检测试纸测试)C.Typhipoint(一个酶免疫分析法检测IgM抗体和免疫球蛋白的)。100个样本被传统的维达尔试验,测试使用,TH,啊BH抗原通过幻灯片和试管凝集法48个样品(48%)显示,维达尔试验阳性反应(表1 - 4) |
维达尔的解释测试结果 |
| 答:“O”体抗体是特定为伤寒b“H”鞭毛抗体——集团特殊抗体,它可以显示记忆的反应与其他条件c O或H抗体效价≥接触是伤寒的暗示。 |
| 100份疑似样本的伤寒、肥达反应呈阳性样品& TH 30%。只有10%,只有8%。测试啊黑洞都是阴性样本(图5 - 7) |
| 发现维达尔试验是测试呈阳性& TH 62.5%的维达尔正样本和伤寒疑似病例的30%。 |
肥达试验结果 |
| 答:因此疑似病例的30%的样本显示& TH抗体效价≥接触因此阳性伤寒。 |
| B.10/100样本显示只有O抗体效价≥接触考虑O抗体特定伤寒,这些样本显示,肥达试验结果暗示了伤寒 |
| c . 8/100样品只显示H抗体≥接触。只有H O抗体表明抗体的存在 |
| )记忆的反应,这H抗体反应可能是由于其它发热性疾病 |
| b)持久性的伤寒后H抗体。在这些情况下有必要考虑临床细节,伤寒的近代史,其他实验室的结果发现(图8 - 10)。 |
| 48积极维达尔样本,30(62%)是男性和18(38%)是女性。因此,男性比女性更积极的维达尔试验。 |
维达尔试验与其他方法的比较 |
| 一)Typhifast——对伤寒沙门氏菌检测试纸检测IgM抗体。 |
| B) Typhipoint -,免疫球蛋白g igm抗体酶免疫分析法检测伤寒沙门氏菌(图11 - 12)。总100个样本被维达尔试验测试,Typhifast(检测试纸测试)和Typhipoint (EIA)。其中48例(48%)样本积极和52个(52%)被维达尔负面。typhifast 42例(42%)阳性,58例(58%)呈阴性。typhipoint 44例(44%)阳性,56例(56%)呈阴性(表8)。 |
| 总没有样品100但typhipoint 8样本作为积极的和消极的控制,只有92个样本进行测试(表9 - 10和无花果的程度)。 |
| 两种方法的结果即Typhifast和Typhipoint与金本位维达尔测试结果。 |
维达尔试验结果(幻灯片凝集) |
| 两个O h积极 |
Typhipoint结果 |
讨论 |
| 共有100个疑似病例伤寒的血液样本进行了测试在米高梅医学院和医院,Kamothe,纳维孟买的一年从2012年2月到2013年1月,由:a .维达尔试验(幻灯片和试管凝集检测伤寒抗体,伤寒沙门氏菌“O”和“H”,甲型副伤寒沙门氏菌“啊”和“黑洞”。)b . Typhifast(检测试纸测试检测IgM伤寒沙门氏菌抗体)C。Typhipoint(的酶免疫分析法检测IgM抗体和免疫球蛋白g伤寒沙门氏菌) |
| 目前的研究显示男性的优势比1.08:1的可比性与奥尔森SJ等。在目前研究维达尔积极反应,最大限度样本来自年龄组意向年(58.33%),其次是11日至20日年(20.83%)、清廉年(8.33%)和41-60年(8.33%)退出比得上Balakrishna t博士的研究显示,33%的患者属于年龄11日至20日。24%的人的年龄21 - 30年。15.5%是31-40年最年轻的年龄组患者3岁,最大的是68年[58]。Sharma N,在其他研究(等)发现,71%伤寒病例不到30年59本研究维达尔年龄组阳性反应的清廉是8.33%戒烟比得上Razel L【等人的研究显示14%的发病率维达尔阳性患者年龄段的清廉年(57,58,59、60)。的100个样本测试,52%男性和48%女性。维达尔试验积极性是30/52(57.6%)的男性18/48(37.5%)的女性与萨菲亚博士的研究是相当类似的Sultana,诸位辛格医学院微生物系孟加拉国,她在研究报道,52%的男性和48%的女性被维达尔试验阳性(24日25日26日27日,28日,29日,30日]。巴特勒和其他人做的另一项研究也显示出类似的结果,感染ratewas略高于男性(巴特勒et al . 1991年)(40、41、42、43、44、45、46岁,47岁,48岁,49)。巴特勒表示他的意见greaterexposure男性在外受污染的食物和水可能higherof感染的地区在这人口(63、64、65、70)。 |
| 在目前的研究中,维达尔试验是积极的在48(48%)非常类似的研究D Narayanappa et al。(48%)、Sherwal提单et al . (57%)、Bhutta咱et al (54%) |
| 在目前的研究中,44%的病例被Typhidot积极的测试。其他研究表明更高比例的积极期望Jesudason MV [62]。Typhidot测试的结果被认为是积极如果IgM阳性无论免疫球蛋白是积极的还是消极的。Typhidot测试可能会发现掩蔽效应的IgM被蒙面高免疫球蛋白水平免疫球蛋白g可能来自过去的感染或再感染的初始状态。Retnosari S [58]。(2001)对同一样品进行Typhidot-M和积极性的比例从72%上升到81%。 |
结论 |
| 共有100个血液样本的疑似病例伤寒是由a。维达尔试验测试(幻灯片和试管凝集检测伤寒抗体,伤寒沙门氏菌“O”和“H”,甲型副伤寒沙门氏菌“啊”和“黑洞”。)b . Typhifast(检测试纸测试检测IgM antityphi抗体)C。Typhipoint(一种酶免疫分析法检测IgM抗体和免疫球蛋白的)。大约100份血液样本的伤寒疑似病例进行了测试在米高梅医学大学医院,Kamothe超过一年。维达尔试验中48/100(48%)的示例显示阳性反应。维达尔试验100年疑似病例的结果跟进。既& TH阳性30例(62.5%),只有积极的10 (20.9%。只有8 TH阳性(16%),啊&黑洞是负的。稀释46.6%样品显示为“O”1:160抗体滴定度和53.3%的样本显示1:320滴定度。在维达尔阳性反应,最大样本年龄组意向年(58.33%)。样本的数量更多的男性患者,男性比女性再次显示了更积极的维达尔试验。 The numbers of samples received for Widal test were more for OPD but positivity was 28/64 (43%) Whereas number of samples from indoor patients for Widal test was less but positivity was more 20/36 (55%). Thus, more Typhoid fever patients Were Present in MICU (22.2%). In the typhifast (immuno chromatography test for detection of Igm antibody test was positive in 42/100 patients were as in same samples Widal test were positive in 48/100 samples .The different in two test could be because, in the typhifast method only Igm antibody are detected. In the typhipoint (EIA for IgG & IgM antibody) test IgM antibody positive in 41.3% samples, IgG 39.30 % .where as widal was positive in 48% samples .the different in positivity reaction could be because of the specific nature (monoclonal antibody IgG & IgM) detected in the EIA method. The overall positivity of the reaction was for Widal test 48%, typhifast 42% & typhipoint IgM. About 41.3% & typhipoint IgG 39.13% though there is little difference in the positivity reaction. It is not satisfactory significant. IgG antibody are not considered as comparison because long-term persistence of the IgG antibody after exposure to typhoid infection or vaccination. |
表乍一看 |
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| 表1 |
表2 |
表3 |
表4 |
表5 |
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| 表6 |
表7 |
表8 |
表9 |
表10 |
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| 表11 |
表12 |
表13 |
表14 |
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数据乍一看 |
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| 图1 |
图2 |
图3 |
图4 |
图5 |
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| 图6 |
图7 |
图8 |
图9 |
图10 |
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| 图11 |
图12 |
图13 |
图14 |
图15 |
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| 图16 |
图17 |
图18 |
图19 |
图20 |
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| 图21 |
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引用 |
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