多重耐药偶联质粒中抗生素失活乙酰转移酶的复杂性、异质性和突变分析

摘要

药物乙酰化转移酶(aac格式)是一种酶，通过使氨基糖苷类抗生素的O-和N-原子乙酰化而使其失活。aac格式在多种致病菌的质粒和整合子中检测到耐药基因。CAT酶是一种较早发现的能使氯霉素在1 '和3 ' -OH基团乙酰化的独特酶，在表达载体中被广泛用作报告基因。氨基糖苷6 ' - n -乙酰化酶主要分为acc6 ' -Ia toaac格式6 ' -If和基因被指定为aac格式初级到高级aac格式A8但aac格式系或aac格式A41型异构体也进行了测序。的同分异构体aac格式A3,aac格式A4和aac格式A8非常相同，相反于其他aac格式A1同分异构体。氨基糖苷3 ' -乙酰化酶被指定为aac格式3的iaaac格式3 ' -Xa和基因被指定为aac格式C1,aac格式C10。序列分析表明aac格式2》,aac格式4 '和双功能酶(aac格式6,aph2”)是不同种类的乙酰化酶。但aac格式6 ' -1b-cr蛋白与环丙沙星耐药相似aac格式6 ' -1b有点突变。有趣的是，猫的基因并没有相似之处aac格式A1或aac格式C1基因和迄今为止被忽略为非临床起源。但目前catB3基因在许多病原体的MDR质粒中被报道弗氏志贺菌(pR100),鼠疫杆菌(pIP1202),大肠杆菌(pNR1),铜绿假单胞菌(pOZ176),肺炎克雷伯菌(pNDM-MAR)和沙门氏菌血清(pHXY0908)。这些质粒也经常与acc3 '和相关aac格式6 '酶，包括分叉ß-内酰胺酶基因(blaTEM,bla的NDM,blaCTX-M等)和药物外排基因(acrAB、mexAB/ CD/XY、tetA/S)以及AG腺苷转移酶(aad)和AG磷酸转移酶(aph)基因。当然，cat、amp、tet基因在超级细菌缀合质粒中的出现是令人恐惧的，因为这些基因被随机用于RDT工作的表达载体中。药物乙酰化酶之间的多样性非常高，这表明它们的起源有多种机制。

关键字

药物乙酰转移酶，抗生素污染，耐多药基因进化

简介

MDR是细菌在质粒和染色体中获得MDR基因并在压力下生存的独特现象环境含有高浓度抗生素及其他污染物[1］．另一方面，这种细菌感染很难用抗生素治愈，在世界范围内造成了巨大的生命和财富损失[2］．氨基糖苷乙酰转移酶通过乙酰化药物中的n原子或o原子来修饰药物结构，导致这种酰基药物不能结合靶位点来抑制细菌的复制、转录或翻译[3.-8］．所以病人不能通过简单地服用几片抗生素来消除细菌感染氨苄青霉素，链霉素或庆大霉素抗生素因为乙酰转移酶在使药物失活的质粒中被激活。

抗生素耐药机制大致可分为六大类:(1)激活β-内酰胺酶(bla(2)激活药物修饰酶(Aac, aad, aph(3)药物外排基因激活(Acr, tet, cmr, mex(4)突变改变靶点(rRNA, PBPs)(5)与类药物结合后中和抗生素春节M和(6)亚胺培南等限制药物进入的孔蛋白表达较低。因此，在自然界中，在压力环境下停止基因创造是非常复杂的，甚至没有人能想象这种变化是如何在今天的医学中造成一个严重的问题的。9］．

第一个乙酰化酶被发现是猫基因或氯霉素乙酰转移酶。1947年，埃利希在从土壤中分离出的放线菌中首次发现了氯霉素，1971年，田村从土壤中分离出氯霉素Streptosporagium viridogriseum．氯霉素抑制细菌30S核糖体，是一种很好的抗生素，因为它可以治疗由30S核糖体引起的常见疾病金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，以及更多。然而，很快在许多对氯霉素耐药的细菌病原体中发现了cat基因[10］．猫酶不同于"amp或"春节基因的作用模式，它乙酰化氯霉素药物(1 '和3 '位置)，使乙酰化的药物不再能够结合细菌核糖体。因此猫基因细菌(质粒)在体外也容易生长出含有MIC量的氯霉素在活的有机体内在病人血液中[11，12］．

序列分析表明，猫基因在氨基酸序列上是一个不同的酶aac格式A1oraac格式C1和其他异构体。为什么猫基因不认为是aac酶不确定说但是aac格式A1酶在MDR质粒中发现的与其他MDR基因如blaTEM,strA / B,南1/2,春节A/S型基因包括对照组而且交易基因(13-15］．因此，cat基因(命名为catB3，以cat体外转录技术而闻名)从细菌的小r质粒中分离出来，而这些小r质粒与临床无关[10］．但目前在许多常见致病菌的大型缀合质粒中检测到[16］．

同样，aac(6’)酶记为aac格式初级到高级aac格式A9和其他的异构体aac格式(3 ')指定为aac格式C1 -aac格式制备过程(17-20.］．aac格式2”,aac格式4 '等被放在一边，它们的分歧被标记为aac格式(2) ia / b / c或aac格式(2 ')-I/II等[21-23］．同样，文献中也有catB2/4/8或catA_1/2异构体。猫基因突变，以及aac格式C1和aac格式与大量的β-内酰胺酶突变相比，A1基因从未被研究过(blaTEM,blaOXA,blaCTX-M等)，使细菌产生PDR或XDR型耐药[10］．然而，这篇综述的起源，在于对GenBank数据的事实分析aac格式A1/C1基因与用于研究加尔各答水体，特别是恒河水体中超级细菌污染的一致引物高度矛盾。

结果

猫基因异构体的相似性

GenBank的数据分析清楚地表明，cat基因广泛存在于细菌质粒和整合子中(表1 - 4)．类整合子介导的catB3基因很多细菌，如2177bp的IntI1整合子假单胞菌aeguginosa(一个:EF660562);的I类整合子大肠杆菌(AN:ABP35557)， 5857bp的I类整合子克雷伯氏菌oxytoca的I类整合子鲍曼不动杆菌(AN:ADF59078)， 1738bp的I类整合子气单胞菌属veronii(AN:ALB07153)， 4632bp In846整合子肠杆菌属下水道(AN:AGJ70489)和变形菌门(AN:WP_000186237)蛋白序列相同[11］．有趣的是，这种整合子也连接到其他类型的氨基糖苷乙酰转移酶，如aacA1, aacA4和aacA7 [12］．

表1:专业分类AAC格式(6’)乙酰转移酶;证明了携带aac(6’)型基因的质粒、整合子和基因组片段的接入数。不同类型的MDR致病菌及其相关耐多药基因也被描述。

ALD03719

表2:专业分类AAC格式(3’)乙酰转移酶;携带质粒、整合子和基因组片段的接入数aac格式(3’)型基因被证实。文中还描述了MDR细菌的蛋白id和类型。

表3:猫基因及杂交aac-aph基因的定位。用GenBank登录号和蛋白id描述了致病性MDR细菌质粒/整合子中流行的猫基因。还描述了激活的混合aac-aph基因，包括不太为人所知的aac2 '和aac4 '型基因，它们破坏许多氨基糖苷类抗生素。

表4:携带多个aac和cat基因的大型MDR缀合质粒的特征。氯霉素乙酰转移酶、AG乙酰转移酶等mdr基因聚在同一质粒上，携带该质粒的细菌多为XDR型和PDR型。此外，本文未分析gyrAB、16S rRNA、porB和ABC基因的突变。

我们观察到猫基因现在与缀合质粒相关，在没有药物的情况下很难挽救，也可以将MDR基因传递到家用细菌中。看来抗生素耐药性是现代社会普遍存在的现象。例如，在共轭MDR质粒(pI1-34TF;167198 bp)大肠杆菌(AN: LN850163) 4种乙酰化酶在质粒的4个位置聚集，分布距离相同。两个猫基因(cat_1和cat_2;蛋白质id。CRK62767和CRK62815)不同，其中cat_2为catB3型，而cat_1与异种乙酰化酶有关。另外两种乙酰化酶N-6羟赖氨酸0-乙酰转移酶(protein id。CRK62680;抗生素_nat样)和SPBe2前噬菌体衍生的乙酰基N-3 ' -转移酶(yokD;蛋白质Id。CRK62756)在多种药物失活中发挥作用。这种质粒确实含有其他mdr基因，如blaOXA-1,blaTEM-1, macB(大环内酯出口商)，MFS，aph(磷酸转移酶),油气地质3 '(链霉素腺苷转移酶)，tetA(四环素转运体)和tmrB(衣霉素耐药蛋白)。此外，该质粒还积累了hth型cmtR和envR，春节R转录因子与IS-elements和转座子密切相关。提出了多对准和seq-2序列分析图1而且2其中catB3被发现相似，但catB8有许多突变和频繁的羧基末端缺失和取代[14］．

图1:用Lypofectamine试剂对HeLA细胞进行CATB2质粒对氯霉素的乙酰化转染(面板，A)。Lane, 1游离氯霉素，Lane 2，不含质粒的细胞提取物，Lane 3, 5 μl细胞提取物，Lane 4, 10 μl细胞提取物，转染质粒。3-乙酰化氯霉素(图b)、n -乙酰化环丙沙星(图C)和禁忌霉素(图D)的结构。

图2:CAT酶之间的同源性:(A) CatB3, catB4和CatB8的相似性。(B) catA2和CatA4的相似性和(C) catB3vs．catA_1相似。

猫包括249kb的肠道沙门氏菌质粒pHXY0908 (AN:KM877269)和高分子量的P1质粒均存在B3基因肺炎克雷伯菌含有mphA(大环内酯2”磷酸转移酶;蛋白质Id。WP_000219391),油气地质A2 (ANT3 ' -1a)， aph3 ' -1a (protein Id。WP_000018329)， GCN5乙酰转移酶(protein Id;WP_003026803)和磷酸菊素乙酰转移酶(protein Id。WP_004152096)，包括其他mdr基因，如药物转运体春节一个/春节G, ABC转运蛋白(protein Id;WP_004118832)， mfs型药物外排蛋白(protein Ids. WP_004118832)。WP_003846917和WP_000214125)以及CTX-M-24/KPC-2/VEB-3型β-内酰胺酶。类似地，pOZ176大质粒(AN:KC543497)含有catB8a, neo(氨基糖苷3 ' -O-phosphotransferas;蛋白质Id。AGL46257)和aac6 ' -IId (aac格式a4型)分别对氯霉素、新霉素及阿米卡星有抗药性[16，24］．

aac(6 ')异构体(aacA1-aacA8)的相似性

氨基糖苷6 ' - n -乙酰基转移酶积极乙酰化阿米卡星的6- n原子，卡那霉素、新霉素[25-30.］．BLAST分析表明，aacA1是一种独特的酶，与aacA1无相似性aac格式aacA3与aacA4和aacA8谱系有相似之处(图3而且表1)．两种类型的aacA4酶(184aa和172aa)在NH2末端13上存在差异氨基酸前兆的:前兆的氨基糖苷6 ' - n -乙酰转移酶(aacA1)定位于该基因的质粒和整合子大肠杆菌和其他肠杆菌科序列相同[31-36］．例如，NR79质粒(8298bp)大肠杆菌有aac格式A1包括油气地质A3, catB2和sul1基因。另含有8049bp的小质粒pCMXR1bla与CMY-9和sul1 mdr基因aac格式A1。然而,在铜绿假单胞菌，aac格式A1基因位于I类整合子In831，与与亚胺培南耐药相关的blaIMP-10基因同源。所有aacA1序列完全相同，未发现突变。铜绿假单胞菌I类整合子含有aacA3基因(protein Id。AIP98294和AN:KM111260)。MDR的共轭质粒pNDM-MAR (267242bp, AN:JN420336)肺炎克雷伯菌包含aac格式A4基因(protein Id;AFB82784)以及致命的blaNDM-1和blaCTX-M-15基因(表4) [37］．另一个aacA4基因(AN:ABP35556)定位于2731bp的I类整合子(AN: EF488369)大肠杆菌与…紧密相连猫B3基因[38］．2个aacA4基因(登录号AEZ05099)位于aacA4的6061bp小质粒pINCan01 (AN:JN596279)克雷伯氏菌oxytoca与blaGES-11和sul1 mdr基因相关[39］．两个氨基糖苷乙酰转移酶基因(aac格式A5和油气地质A7)位于假单胞菌2903bp I类整合子上，与blaVIM-2和dhfr基因相关，分别参与碳青霉烯耐药和甲氧苄氨嘧啶耐药[40-44］．二氨基糖苷6'-乙酰转移酶Ib型(aac格式6尺1 b;172aa)克隆无色菌xylosoxidans(AN:AY686225)为3436bp I类整合子，也有blaVIM-2基因。发现了281个氨基酸组成的aacA8基因aac格式3608bp I类整合子(AN:KJ679405)中的A7 (152aa)异构体铜绿假单胞菌与aadA6和blaxa -2有关。aacA1和aacA4之间没有相似性肺炎克雷伯菌(蛋白质Id。ADH82126)和大肠杆菌(蛋白质Id。BAB72153)或铜绿假单胞菌(蛋白质Id。AIP98294)，因此假单胞菌酶被指定为aac格式在中国被隔离的A3 (图2而且表1)．172aa 6 ' - n -乙酰转移酶(aac6 ' -1b;蛋白质Id。Morganella morgani的CAF18332)具有相似性aac格式A1和指定为aacA4，两种质粒中的该酶相同，提示水平转移，但克雷伯菌质粒(AN:HM043570)部分测序(38-44)。少数新的氨基糖苷类耐药基因被命名为aac(6’)-Iae，编码一个183个氨基酸的蛋白质，与该基因有57.1%的同源性AAC格式(6)智商。这样的大肠杆菌表达外源性aac(6’)- Iae对阿米卡星、地贝卡星、异帕霉素、卡那霉素、奈替米星、西索米星和妥布霉素耐药，但对阿贝卡星、庆大霉素和妥布霉素不耐药链霉素（图1而且表1 - 4) [45］．

图3:之间的相似之处aac格式A1酶:(A)aac格式A1 vs。AaacA4末端截断，点突变。(B)aac格式A1 vs。aac格式A5，内部缺失，无相似性。(C)没有相似之处aac格式A5,aac格式A6和aac格式A8和(D)之间没有相似之处aac格式A5 vs。aac格式A6。

aac(3’)乙酰转移酶的相似性研究

氨基糖苷3 ' -N/-O-乙酰转移酶是从多种微生物中分离出来的，在质粒和染色体中都有发现[46-55］．aac格式C1酶从多种质粒R1033的2324bp中分离得到肠杆菌科并被aac格式(3) ' - 1a型(AN:CAA33850) [46］．aac格式C2 (EC: 2.2.3.2.81)的大肠杆菌克隆自莫斯科分离株(AN:X54723;蛋白质Id。CAA38525) [47］．310个氨基酸的长度大肠杆菌aac3 '酶(蛋白Id;ESD46483)从基因组片段(登录号为AXTL01000004和ADTS01000075)中分离得到。铜绿假单胞菌aac(3 ')-1b酶为176 aa，可能是部分(蛋白Id。AAA88422) [48］．aac格式C3异构体(aac格式3’-IIIa/b/c)克隆自铜绿假单胞菌(ANs. X55652, L06160和L06161) [49),aac格式3 ' -Vb从粘质沙雷氏菌基因组片段与酶有72%的相似性aac格式3 ' -Va对庆大霉素、奈替米星有高标记抗性，对妥布霉素有中度抗性(蛋白Id。AAA26548) [53］．同样的,aac格式3’-VIa基因(AN:M88012)克隆自肠杆菌属下水道与aac3 ' -VII的相似度分别为39%和48%aac格式3 ' -II分别[51，52］．同样的,aac格式发现3 ' -VIa酶299 aa (protein Id;AAA16194)。aac格式C7(蛋白Id;AAA88552),aac格式C8(蛋白Id;AAA26685)和aac格式C9(蛋白Id;AAA25334)基因从链霉菌属rimosus(一个:M22999),链霉菌属fradiae(AN:M55426)和沙耳小单孢菌(AN:M55427) (图3而且表2) [53，54］．AAC格式棒状杆菌属纹状体最近被隔离[55］．

2”乙酰转移酶的相似性

一个鲍曼不动杆菌2 "乙酰转移酶(286aa;蛋白质Id。AAA21890)被发现[56］．另一种由染色体编码的氨基糖苷2'- n -乙酰转移酶(AAC格式(2’)-Ic)从结核分枝杆菌中分离得到[57-61］．之间的相似之处aac格式6 ' -1b-cr酶介导氟喹诺酮类耐药。氨基糖苷类乙酰转移酶,AAC格式(6’)-Ib降低环丙沙星在哌嗪基取代基的氨基氮上进行n -乙酰化[62］．AAC格式(6 ')-Ib-cr不同于AAC格式(6’)- Ib，通过Trp102→Arg和Asp179→Tyr两种特异密码子交换，被认为是环丙沙星耐药表型的必要和充分条件[63］．在来自美国的313种肠杆菌科中，aac格式47例中15例(32%)检测到(6’)-Ib-cr大肠杆菌106例中有17例(16%)分离株k .肺炎160株肠杆菌中12株(7.5%)[64］．ESBL大肠杆菌从瑞士家禽农场分离，与aac6 ' -Ib-cr乙酰转移酶引起的氟喹酮耐药有关。Aac格式pKPS30质粒中存在6 ' -1b-cr酶(AN:KF793937;第22991-23509号)肺炎克雷伯菌［65］．产气肠杆菌分离株与基因表达变化相关aac格式(6’)-Ib-cr基因被报道具有高标记氟喹尼酮类耐药[66］．一个韩国研究表明存在aac格式(6 ')-1b-cr变异酶大肠杆菌而且k .肺炎很少有菌株同时被控制aac格式(6) 1 b和aac格式对妥溴霉素、卡那霉素及阿米卡星耐药的6 ' -1b-cr (图1) [66］．氟喹诺酮耐药的其他机制是qnrA1/B1/S1蛋白的靶标保护(对环丙沙星具有高亲和力)和QepA和OqxAB泵的主动药物外排(从细菌细胞质中去除环丙沙星)[63］．沙门氏菌血清质粒检测到aac6’-1b-cr基因(AN:KM877269;新号119381-119965，补充版)。

双功能药物乙酰化酶的相似性

发现的肠球菌faciumaac格式6’-aph2”双功能氨基糖苷修饰酶在含有转座子Tn5281和IS256元件的70 kb质粒中67］．所有大肠facium来自英国的菌株表现出较高的庆大霉素耐药水平，并通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)和杂交研究检测到多个偶联质粒[68-71］．法国的一项研究金黄色葡萄球菌具有氨基糖苷类耐药的菌株aac格式6 ' -aph2 "杂交基因和aph3 ' -III基因(磷酸转移酶)位于染色体[40］．土耳其对358基因他霉素耐药的研究金黄色葡萄球菌显示334aac格式-aph型双功能乙酰化酶[72］．一项美国研究表明，高水平的氨基糖苷类耐药肠球菌fecalis由于aac格式6,aph2”酶引起庆大霉素和链霉素抗性，但链霉素抗性授予由于其他aph3 ' iii /aph5 " -III型基因[73］．Shigila sonnei基因组有aac6’-aph2”双功能酶(protein Id。CSO06978)与Proteus vulgaris的aacA4酶(EC:2.3.1.82)相似。WP_058127929),大肠杆菌(蛋白质Id。johnsoni不动杆菌(protein Id. CRL66321);ALV74709)或铜绿假单胞菌(蛋白质id。CBI63199, CBL95252和ALI59095)。粪肠球菌染色体岛携带双功能乙酰转移酶(aac格式A -aphD;蛋白质Id。ANN02929)，链霉素乙酰转移酶(Sat4;蛋白质Id。ANN02919)，包括许多腺苷酸转运酶(Protein Ids。ANN02918、ANN02921、ANN02922和ANN02927)、链霉素磷酸转移酶(aphA3)和ISA(E)基因，这些基因赋予了对胸膜霉素、链霉素和incosamide抗生素的耐药性[74］．双功能氨基糖苷修饰酶如氨基糖苷(6’)乙酰转移酶ie /氨基糖苷2″-磷酸转移酶ia (AAC格式(6')- ieh - aph(2″)-Ia)，(分离到对4,6-氨基糖苷类卡那霉素、妥布霉素、地贝卡星、庆大霉素和西索米星具有耐药性，但对阿贝卡星、阿米卡星、异帕霉素或奈替米星无耐药性[75］．一种最近发现的双功能耐抗生素酶命名AAC格式(3) ib /AAC格式(6′)- Ib′，from铜绿假单胞菌，催化氨基糖苷类抗生素的乙酰化。的AAC格式(3)-Ib结构域对fortimicin A和庆大霉素作为底物具有高度特异性AAC格式(6’)-Ib’结构域具有广泛的底物光谱[76-79］．

药物乙酰化酶与strA/B和其他磷酸转移酶的相似性

strA和strB基因可通过磷酸化使链霉素失活。磷链霉素不能与细菌核糖体结合，这种细菌可以在100 μg/ml链霉素下生长，产生AMR [80］．序列分析表明catB3与strA/B、aac6 ' /3 '与strA/B无相似性。氨基糖苷磷酸转移酶(aph基因)使抗生素磷酸化，使磷酸化的卡那霉素、阿米卡星和新霉素不能杀死细菌。AG乙酰转移酶(aac格式A1 /aac格式C1)与264aa新霉素磷酸转移酶(aph3 ' -Ia，蛋白Id。CAA23892)和341aa湿霉素磷转移酶(hygA, protein Id。AHC55481)。然而，链霉素磷酸转移酶(strA, 278aa和strB, 276aa;蛋白质id。AAA26443和CED95338)的相似性分别只有28%，覆盖范围分别为72%和37% [81，82］．相似的挖乙酰化酶用药物腺苷酸酶。氨基糖苷腺苷转移酶[EC:2.7.7.47]存在于埃希氏菌(ANs:HG41719, KJ484637, KM377239)，克雷伯菌(ANs:KF914286和KF719970)，沙门氏菌(AN:JQ899055)和不动杆菌(AN: KM401411)的许多细菌质粒中，但也存在于一些细菌染色体中，如沙门氏菌血清［83］．

6-N位的抗生素腺苷转移酶(~263aa)腺苷酸药物和对链霉素、阿米卡星等氨基糖苷类抗生素耐药的细菌[84］．这些酶似乎是rel - spo样超级家族，与AG 3 ' /6 ' n -乙酰转移酶和catB3酶没有太多相似之处。有趣的是，腺苷酸转移酶在物种间具有相似性，而且明显存在于不同的异构体中(油气地质初级到高级油气地质A17)之间有50-80%的序列相似性[85，86］．

药物乙酰化酶与β-内酰胺酶的相似性

β -内酰胺酶是一种非常分化的酶，至少有20种不同的异构体，包括TEM、OXA、NDM1和CTX-M [1］．金属β-内酰胺酶(VIM, IMP, NDM1, SPM, GIM, DIM)非常致命，因为对亚胺培南和β-内酰胺酶抑制剂cavulinate和舒巴坦耐药[10］．BLAST分析发现AG乙酰转移酶与β-内酰胺酶无相似性[87］．

偶联质粒具有多种药物乙酰化酶

基因库(www.ncbi.nlm.nih.gov)搜索指示(表4)表明，每个偶联质粒都携带多种药物乙酰化酶(cat, aac)，并与许多β -内酰胺酶基因以及strA/B, sul1/2基因相关(10)。例如，沙门氏菌质粒(pIncH12和pHXY40908)获得了四种(aac格式6尺1 b、catB3aaC格式3, catA1)和3 (aac格式3 ' 4,aac格式6尺1 b-cr,catB3)药物乙酰化酶(注册号LN794248, KM877269)。表4深刻地说明了多药耐药基因在多种常见质粒中聚集的严重程度病原体没有药物可以治愈这种细菌感染。

药物乙酰转移酶的染色体定位

从中分离到一个143aa长的乙酰转移酶答:baumannii(一个:JFWP02000007;第103508-103939号)，与aac格式6 '样酶(protein Id。EXT17036)。不动杆菌基因组种aac6 ' -Ir酶(蛋白Id。WP_063840327)的相似性为79%aac格式6 ' -Is(蛋白Id。AHD03491),但aac格式6 -,aac格式6的信息战,aac格式6“第九aac格式6′-Iu的相似性分别为83%、85%、90%和94%aac格式6 ' -Is分别(蛋白id。WP_063840329, WP_005296085, ALB75422及WP_063840330) [88，89］．嗜水气单胞菌基因组(AN:LNUR01000009;Nt . 843037-843495)有一个独特的152aa 6 ' -乙酰基转移酶，相似度有限(47%)aac格式6的ih一个baumannii(蛋白质Id。ALB75422)。Pesudomonas saponiphila基因组(一个:FNTJ01000001;nt. 257741- 258187)也具有148aa长6 ' -乙酰转移酶(protein Id。SEB43247)，相似度为51%鲍曼尼6 ' -Ih酶(protein Id。ALB75422)。

位于染色体位置的结核分枝杆菌的AAC(2’)-Ic催化辅酶A (CoA)依赖的2’羟基或广谱氨基糖苷的氨基乙酰化。克隆并表达了aac(2’)-Ic基因大肠杆菌并且被净化了。重组AAC(2’)-Ic是一种可溶性蛋白，分子量为20,000 Da，并将所有测试的氨基糖苷类底物乙酰化在体外，包括治疗上重要的抗生素，如妥布霉素、阿米卡星、卡那霉素和核霉素。MRSA细菌最初被发现时被命名为耐甲氧西林菌金黄色葡萄球菌革兰氏阳性循环细菌是皮肤感染的罪魁祸首。甲氧西林耐药基因(mecA)编码一种甲氧西林耐药青霉素结合蛋白，并被许多MRSA分离株的移动遗传元件，葡萄球菌盒染色体mec (SCCmec)激活布拉，aac, aad、ANT和sul1/2型MDR基因。这样的多药物耐药细菌只对糖肽类抗生素如粘菌素和替吉环素敏感[90，91］．CAT酶catB3基因突变与氯霉素药物外排基因cmlA (protein Id。AKG90151)，或乙酰基转移酶(aac3 ' - IV;蛋白质Id。AKG90173)或卡那霉素磷酸转移酶(蛋白Id。AKG90144)或湿霉素磷酸转移酶(protein Id。AKG90172)。在许多肠杆菌科的I类整合子介导的catB3基因中未报告突变(见，ANs: EF660562;ABP35557;ADF59078; AGJ70489). However, 217 aa long Proteus mirabilis CAT enzymes (protein Ids. WP_049194799vs．WP_049197252有2个点突变(V24A, N130D)和201个氨基酸长CAT酶大肠杆菌有两个点突变(Y16N, D195N)和9aa nh2末端取代(蛋白id。WP_050436713 vs. WP_050558894

aacA1型酶的突变

我们看到7个突变嗜水气单胞菌6 ' -I酶(ANT67440vs．KWR67119)，相似度95%。然而，鱼形气单胞菌中有26个突变aac格式6 '酶(protein Id;KWR67119)在NH2端60氨基酸区(WP_065401184vs．KWR67119)。一架194aa长的aac格式Wohlfahrtiimonas chitiniclastica的6’-Ia酶在NH2末端有9aa信号肽，与之非常相似aac格式A1酶大肠杆菌质粒pCMXR1 (AN:AB061794)，除了一个点突变(V84I)。但是185 aaaac大肠杆菌A1酶(protein Id。BAB72153)与185 aa长度的相似性仅为55%肺炎克雷伯菌aac格式6 ' -Iai酶(protein Id;WP_032495046)。这种不寻常的aac格式A43酶有两种不同的突变答:baumannii((i2, K141N;蛋白质Id。WP_024437351)和铜绿假单胞菌(R20Q R95K;蛋白质Id。WP_071846376)。

据报道，许多肠杆菌科aacA4酶(aac6’-1b型)发生了一些突变，这些突变与大肠杆菌酶(protein Id。ABP35556)。中发现了不同的点突变铜绿假单胞菌(A75G;蛋白质Id。WP_071846301), (S83G;蛋白质Id。WP_071846385)和(T132A, K133R;蛋白质Id。WP_071593232)。同样在aac大肠杆菌A4酶，单突变(Q101L;蛋白质Id。WP_069985732)肠杆菌属hormachei(R181C;蛋白质Id。WP_07220113)和假单胞菌putida(Q49R;蛋白质Id。WP_071984682)。197aa长的aacA4酶(protein Id。AKJ19116)铜绿假单胞菌质粒pMRVIM0713 (AN:KP975076)扩增了13 aa，报道了2个突变(M1V和S102L)。这种nh2端融合现象在铜绿假单胞菌整合子介导的203aa长aac6 ' -1b酶(protein Id;AAC46343;AN:U59183)和210 aa长酶(protein Id。CBI63203;一个:FN554980)。染色体介导鲍曼不动杆菌216 aa长aac格式A4酶(protein Id;EKA73751)也有类似的M1V和S102L突变(图3)．

一个183aa长的aaca16n(6 ')-乙酰转移酶(protein Id。WP_001109644)与aac格式许多肠杆菌科的A43酶(蛋白id。WP_063840279;WP_024437351)。该酶与酶的相似度为60%枸橼酸杆菌属freundiiaac格式6 ' -I1酶(蛋白Id;CAA91010;AN:Z542441)，在nh2端发散最大。这类酶与酶的相似度只有55-65%aac格式A1酶(蛋白Id。BAB72153)，它们的关联在aac格式因此，6 ' -I类不合理(>60突变)。

突变体中aac格式C1型酶

Aac格式肠杆菌科的C1酶为177个氨基酸(protein Id。CAA33850)和鲍曼不动杆菌庆大霉素N-3 ' -乙酰转移酶相似，在不同的分离株中报告了不同的突变:WP_031950771, EXD70625和WP_000441892)中有3个突变(R98K, P102A, T175P)。在铜绿假单胞菌，aac格式据报道C1酶有很多突变。例如，一个分离物有S23R, K74R, D83E突变(蛋白Id。WP_052158612);在另一个K38Q, D83E, E165D突变(蛋白Id。WP_063840256)和另一个(蛋白Id。ALE32149) 5个突变(K38Q, D83E, R98K, P102A和E165D)，很少有常见突变。然而，保守性较低的酶具有71-73%的相似性(蛋白id。ABN10340和CRQ60998)。肠道沙门氏菌C1酶(protein Id;WP_032491356有三个突变，其中两个非常常见(S104I, R98K和P102A)，另一个中检测到两个突变(P152T, S81I;蛋白Id: WP_032491356)。一个答:baumannii而且铜绿假单胞菌AAC(3)-I酶有P152T常见突变(蛋白id: WP_052133400和WP_063840258)。

大肠杆菌158aa长AAC3 ' -乙酰转移酶有两个突变(A53G, R234Q)，诱导阿霉素耐药(蛋白Id。WP_064756331)，也在k .肺炎(W5L A53G;蛋白质Id。WP_064735602)。但在另一个大肠杆菌3个突变体(A53G, H241R, G246E;蛋白质Id。WP_072833186)和另外4个突变(A53G, K177N, L178C, D182E;蛋白质Id。WP_072739411)。AAC格式(3)-I酶粘质沙雷氏菌(178 aa;蛋白质Id。OCO95380)和肠杆菌属下水道(178 aa;蛋白质Id。WP_032663836)与22aa信号蛋白在NH2末端的相似度仅为73%，表明这两种酶存在差异aac格式3 ' ia类型。即使这两种酶都是178aa长，88%的同源性，有22个突变，证明药物乙酰转移酶确实与β-内酰胺酶相似(图4)．

图4:不同AAC3 '药物乙酰转移酶的序列比对。ESD46483 (大肠杆菌染色体aac格式C1蛋白308aa, AN:AXTL01000004);AAA21890 (答:baumanniiaac格式C2蛋白，286aa;一个:M62833);cad 27711 (aac大肠杆菌C4蛋白261aa pHK11-apra载体;一个:AJ438947);CAA33850(肠杆菌科质粒介导的aacC1蛋白，177aa: AN:X15852);CAA38525(大肠杆菌aacC2蛋白，286aa;一个:X54723);CAA39184 (铜绿假单胞菌aac格式C3, 271 aa;一个:X55652);AAA26682 (铜绿假单胞菌C3b蛋白，245aa;一个:L06160);AAA25683 (铜绿假单胞菌C3c蛋白，279aa;一个:L06161);AAA26548 (C. marcescens aacC5b蛋白，269aa;一个:M97172);AAA16194 (阴沟草C6蛋白，299aa;AN:M88012);AAA88552 (美国rimosusaacC7蛋白，288aa, AN:M22999);AAA26685 (美国fradiaeaacC8蛋白，286aa;一个:M55426);AAA25334 (查尔恰C9蛋白，281aa;一个:M55427);BAA78619 (美国greseus菅直人基因。284 aa,: AB028210)。

286个氨基酸的长度大肠杆菌aacC2 (protein Id;CAA38525)与aac格式(3 ')-IIc酶大肠杆菌(蛋白质Id。WP_063840266)，但与aac格式C1酶。大肠杆菌aacC2酶(protein Id;AFI72859有4个(L14F, H275Q, E276K)和10个突变(T11L, R12Q, K78E, P84L, A162T, N194D, E204D, A268P, A274V, Q278E)与类似的aac3 ' -IId(蛋白Id。ab70977)和aac3 ' -IIe(蛋白Id。ABS70978)酶。在肠杆菌中aac格式3’-II酶有几种突变(T87A, A112T, T132S, A245V;参见蛋白质id。WP_00988063;WP_051421733;KTQ31168)。在沙门氏菌血清酶4bp缺失和T132S突变(protein Id;WP_060588432)。之间未发现突变k .肺炎而且aac大肠杆菌C2酶(AGP03376 vs. ODH13880)。其他aac格式(3 ')-II酶报道肺炎克雷伯菌而且鲍曼不动杆菌显示出非常相似的突变，表明这些基因水平转移大肠杆菌质粒缀合。基因突变k .肺炎(蛋白质id。AGP03376和WP_031944095);L11I、Q12R、R70L、T79A、R183W、S193R、D204E、T270A、V277A、E279Q、C280R。基因突变答:baumannii(蛋白质id。WP_057690920 vs. WP_002063884)为E142K, G184V, D186X大肠杆菌plasmid-mediatedaac格式C2酶(protein Id;CAA38525)共报告14例突变(L11I、Q12R、R70L、T79A、K135E、R183W、V184G、Y186D、S193R、D204E、T270A、V277A、E279Q、C280R)。在sp肠杆菌50858885株中报道的相似突变如下:L11I、Q12R、R70L、K78E、K135E、T79A、P84L、K135E、R183W、S193R、T270A、V277A、E279Q和C280R。虽然弗氏志贺菌(蛋白质Id。ADY02606)具有非常相似的突变，但在ADY02606中发现了更多的突变(相似性仅为76%)沙门氏菌血清酶(蛋白Id;WP_061873001)和85%的相似度Sinorhizobium melilti(蛋白质Id。WP_003525983) aac3 ' -II酶。

然而，大肠杆菌偶联mdr -质粒pRCS57 (143225bp;AN:LO017738)如下:L11I, Q12R, R70L, T79A, K135E, R183W, S193R, D204E, T270A, V277A, E279Q, C280R(蛋白Id:LO017738)。CRH08791)。该质粒还具有mrx大环内酯耐药蛋白、mphR阻遏物、blaTEM-1和春节一个春节环素外排蛋白以及包括许多is元件的Tnp和Tra基因。有趣的是。308 aaaac格式3 ' -III-like大肠杆菌酶(蛋白Id;EGB89811)在NH2端延长了9aa，与其他肠杆菌科294aa非常相似aac格式3 ' - III酶(protein Id;WP_013023858)。

一个长172aa的大肠杆菌aacC4酶(protein Id。ACS75040)和铜绿假单胞菌(蛋白质Id。AGG23542)分别发现2个突变R107Q、D170S和M54L、D170S。Stenotrophomonas maltophilaD170M点突变(蛋白Id;ABN48565;一个:EF210035)。鲍曼不动杆菌基因组中出现210aa 38aa n端延长aac格式A4酶有D170S、O171V突变。枸橼酸杆菌属freundii质粒pMRVIM1012有34aa n端延长aac格式C4酶L90S, D170S突变。无色菌xylosoxidans19.8kb质粒介导210aaaac格式A4酶(protein Id;BAV17747)也有相似的突变(L90S, D170S)。年进一步报道了类似突变粘质沙雷氏菌3类整合子188aa长aacC4酶可能由于16aa延伸(蛋白Id。AAL10408)和霍乱弧菌192aa aacA4酶(蛋白Id。AAM52493)，表明类似的整合子/质粒参与了偶联转移aac格式A4基因。当然，这种延长的酶没有被蛋白产物分析证实，反映了质粒介导的短活性酶报告的错误(表1)．

其他大肠杆菌扩展aac3’-IV酶(258aa)有几个点突变(Y188H, R236Q;WP_064770919 vs. WP_064756331)和(A53G, A216G;WP_064769430 vs. WP_064769895)和(A53G, A241R, G247E;WP_064769430 vs. WP_072833186)。一个基因组克隆的美国血清可能编码266 aa酶，NH2末端延伸8aa和M1V，常见A53G突变(AN:LHLZ01000022;蛋白质Id。KNT82816)。同样,在k .肺炎基因组(AN: MPWC0100123和JMXV01000021)两种aacC4酶(蛋白id。OKB98731和KDJ63161)预测长度分别为255和254 aa，具有共同的A53G点突变。

Aac格式3 ' -VI酶大肠杆菌的T132S和A244V单点突变不同E. cloaceaeC6酶(蛋白id。WP_053271189 vs. AAA16194)和插入沙门氏菌血清基因组可能编码不同的乙酰转移酶(蛋白id。KNK91744和EHC71407)。

表达载体中的药物乙酰化酶

猫基因被引入多种DNA载体，如BAC载体pHL931 (protein Id。ALV82398);植物网关载体pB4cCGGW(蛋白Id;BAV44483);pDONRpEX18Gm表达载体(蛋白Id;AJW82929);orf选择载体pSOS (protein Id;ABK62679)，还有很多要陈述的。Aac格式C1基因(177aa)分别克隆于pMQ175 (AN:FJ380062)、pCVD001 (AN:KM017942)、pSX (AN:JN703735)、pUCP24 (AN:HM368668)等多种表达载体中，并与β -内酰胺酶基因pEX18gmGW (AN:KM880127)、pLOXGen4 (AN:AJ401048)相关;与猫基因如pMpGWB236 (ANLC057515)、pJM101 (AN:KX782328)相关;并与AG磷酸转移酶基因如pBG51 (AN:KT192133)和pVZ324 (AN:AF100177)相关。在自杀载体pSUI3 (AN:KX863720)和BAC载体pHL931 (AN:KT362048)和克隆载体pHK11-apra (AN: AJ438947) 263aa long中克隆AacA4基因(267aa)aac格式a4型基因在氨基端和羧基端不相似。mdr基因在质粒中的广泛使用应受到控制，因为重组耐药细菌分离株可能被释放到环境中。

讨论

我们看到AAC酶在家庭细菌的质粒和染色体中广泛存在。最近Hasani等人评估了87例氨基糖苷类耐药鲍曼不动杆菌从伊朗四家医院分离出的病毒株aac格式(3')-Ia优势序列群(SG)包括ANT(2')-Ia和。APH(3)通过。APH(3’-Ia与阿米卡星和卡那霉素耐药有关，而ANT(2’)-Ia与庆大霉素和妥布霉素耐药有关，妥布霉素耐药与SG2相关aac格式(6) ib (92］．许多细胞n -乙酰转移酶(NAT2)是已知的，但与CAT和AAC酶不同。

纹状棒状杆菌BM4687对庆大霉素和妥布霉素耐药，对卡那霉素A和阿米卡星敏感。93］．纯化的蛋白质在C-3位乙酰化地贝克星为胺。许多染色体酶指定为aac格式A9,aac格式系,aac格式故事本来,aac格式A41,aac格式A43等已申报，但仍需进一步安置[94］．此外，一种独特的双功能乙酰化酶，aac格式(6)——即-aph2 " -我被发现在葡萄球菌磁带染色体(95]以及中国肠球菌临床分离株[93]和Campilobacter分离株。

结论

由此得出结论，药物乙酰转移酶是高度多样化的。Cat基因虽然差异最小，但3 ' -和6 ' -乙酰转移酶(aac格式A1/C1)与非常多样化的β-内酰胺酶(bla)基因(Chakraborty, 2016)。氨基糖苷乙酰转移酶突变体的功能分析，但研究较少。由于这些基因与MBLs和acrAB/CD或mexAB/XY分流型质子药物外排基因相关，但在23kb质粒pRYC103T24 (AN:GQ293500;蛋白质Id。ADC80829)大肠杆菌说明氯霉素在自然界中污染程度较高，MDR基因进化最多。三维结构和关键活性位点的变化，更好的药物乙酰化基序和扩大的药物选择性必须解决，以设计新的药物对抗超级细菌。抗生素耐药性在世界范围内已达到警戒水平，所有耐多药基因必须在分子水平上仔细评估。更重要的是，三环具有许多- oh和- nh2乙酰化基团的氨基糖苷被指定为(I=1 ' -6 '，上)，(II=1-6，中)和(III=1 " -6 "，下)，但乙酰化偏好的数量将被仔细确定。虽然药物磷酸转移酶和腺苷转移酶与药物的各种O原子和n原子的作用非常相似，但这些酶与之没有相似之处aac格式C1或aac格式A1型酶表明药物修饰酶确实非常多样化[50］．目前，MDR质粒中未见去乙酰酶的报道。因此，具有去乙酰酶基因的超级缀合质粒可以作为对抗空气和水中高度污染的药物修饰超级细菌的控制措施。我们正在研究来自加尔各答恒河的多重耐药细菌中的乙酰转移酶，数据表明存在多个异构体。从本质上讲，多药耐药基因如药物乙酰转移酶已经在人类健康和安全方面造成了非常严重的问题。新药开发似乎应该加快，但印度和其他人口负担沉重的亚洲国家的研发研究也应该适应植物抗生素、基因药物(反义、核酶、dicer-casper、miRNA)和DNA纳米技术应用等替代战略。

确认

我们感谢Dr. Smarajit Maity在研究期间的帮助，也感谢Dr. J B Medda在经济上的支持。

参考文献

1. Chakraborty正义与发展党。细菌中的多药耐药基因和21世纪与抗生素治疗相关的问题。生物技术学报2016;12:114。
2. 肖KJ，等。氨基糖苷类耐药基因的分子遗传学及氨基糖苷修饰酶的家族关系。微生物学，1993;57:138-163。
3. Courvalin P，等。细菌对氨基糖苷-氨基环糖醇类抗生素的耐药性。《抗菌化学杂志》1981;8:57-69。
4. Chinault AC，等。福氏志贺氏菌2a对甲氧苄氨嘧啶、链霉素和磺胺类药物具有耐药性的可转移质粒的鉴定。质粒。1986;5:119 - 131。
5. 清水K，等。日本、台湾、韩国、智利和美国氨基糖苷类耐药模式的比较。抗微生物制剂，1985;28:282-288。
6. TeranF J，等。克隆，测序，并使用作为分子探针编码氨基糖苷6'- n -乙酰转移酶的广泛底物剖面。Antimicrob。化学学报。1991;35(4):714-719。
7. wybenga -格鲁特LE，等。氨基糖苷6'- n -乙酰基转移酶的晶体结构:确定gcn5相关n -乙酰基转移酶超家族折叠。结构。1999;7:497 - 507。
8. Hasani A，等。伊朗鲍曼不动杆菌不同序列群氨基糖苷修饰酶的频率和armA。活细胞。耐药。2016;22:347-353。
9. 李x - z，等。革兰氏阴性菌外排介导的抗生素耐药性的挑战。临床微生物学杂志2015;28:37 - 418。
10. Chakraborty正义与发展党。多重耐药临床相关细菌β -内酰胺酶的复杂性、异质性、三维结构和转录激活生物技术开放获取。雷竞技app下载苹果版2016; 2:1 - 001。
11. Bolivar F和Backman K.大肠杆菌质粒作为克隆载体。方法酶摩尔1979;68:245 - 267。
12. 兔子KL，等。在pBWH301的整合子中发现了含有氨基糖苷类耐药基因aacA7和氯霉素耐药基因catB3的新的移动基因盒。抗微生物制剂。1995;39:686-693。
13. Moura，等。从城市废水中分离的耐药细菌的新基因盒和整合子。《微生物学杂志》2012;163:92-100。
14. 王敏，等。质粒介导的中国上海大肠埃希菌喹诺酮耐药的临床分离。抗微生物制剂。2003;47:2242-2248。
15. 博伊德D等人。加拿大一家医院持续存在4个多药耐药MOBQ1质粒的完整序列，包含从大肠杆菌和粘质沙雷氏菌分离出来的blags -5。微生物耐药性。2015;21:253-260。
16. 熊杰，等。来自铜绿假单胞菌96的500 kb IncP-2质粒pOZ176的完整序列，该质粒编码imp -9介导的碳青霉烯耐药。《Chemother》，2013;57:3775-3782。
17. 细菌对氨基糖苷-氨基环糖醇类抗生素的耐药性。《抗菌化学杂志》1981;8:57-69。
18. 爱AM，等。AAC(1):修饰阿霉素Cl氨基的一种新型氨基糖苷乙酰化酶。抗菌化学杂志，1987;20:803-813。
19. Teran F，等。克隆，测序，并使用作为分子探针的基因编码氨基糖苷6- n -乙酰转移酶的广泛底物概况。Antimicrob。化学化学。1991;35:714-719。
20. 冠军HM等。粘质沙雷菌AAC(6’)基因的克隆与特性研究。《抗菌化学杂志》1988;22:587-596。
21. Tenover F，等。柠檬酸杆菌R因子氨基糖苷类6- n -乙酰基转移酶基因的克隆与测序。中华微生物学杂志。1988;17:471 - 473。
22. Chevereau M，等。庆大霉素乙酰转移酶II是一种修饰氨基糖苷类抗生素的2'-氨基的酶，它介导细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药。生物化学杂志，1974;13:598-603。
23. Aínsa JA，等。氨基糖苷2'- n -乙酰基转移酶基因普遍存在于分枝杆菌中:来自结核分枝杆菌的aac(2')-Ic基因和来自耻垢分枝杆菌的aac(2')-Id基因的特征。微生物学杂志，1997;24:431-441。
24. 别墅L等。携带blaNDM-1, blaCTX-M-15和qnrB1基因的IncH质粒的完全测序。中国生物医学工程杂志，2012;
25. Meyer JF和Wiedemann B.革兰氏阴性菌和卡那霉素链霉菌氨基糖苷6'- n -乙酰基转移酶[AAC(6')]的鉴定。《抗菌化学杂志》1985;15:271-282。
26. Nobuta K，等。肺炎克雷伯菌转座子Tn1331 6- n -乙酰转移酶基因的测序与表达中华微生物学杂志。1988;17:3769 - 3773。
27. Lambert T，等。编码修饰阿米卡星的氨基糖苷6-乙酰基转移酶的溶血不动杆菌aac(6)-Ig基因的研究Antimicrob。化学化学。1993;37:2093-2100。
28. Thungapathra M，等。印度非o1、非o139型霍乱弧菌I类整合子中出现耐药基因盒aac(6’)-Ib、dfrA5、dfrA12和ereA2。《Chemother》，2002;46:2948-2955。
29. Tolmasky ME，等。耐药基因(aac(6)-Ib, aadA和oxa9)在多耐药转座子Tn1331中的遗传组织。质粒。1993;29:31-40。
30. Tran Van Nhieu G，等。氨基糖苷6- n-乙酰转移酶ACC(6)-Ib在耐阿米卡星的革兰氏阴性杆菌临床分离株中的发生率，通过DNA-DNA杂交和免疫印迹测定。中华医学微生物学杂志。1992;36:83-88。
31. 施罗德J，等。从白血病患者血液样本中分离出的人类病原体棒状杆菌耐药DSM 45100的全基因组序列、生活方式和多药耐药性。BMC Genomics. 2012; 13:41 -146。
32. Hannecart-Pokorni E，等。与sulI型整合子相关的6- n -氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(6)-Il的鉴定。抗微生物制剂。1997;41:314-318。
33. Casin IF等。在临床分离的阴沟肠杆菌和弗氏柠檬酸杆菌中，氨基糖苷6- n -乙酰转移酶的Ib型具有改变的底物谱。Antimicrob。化学化学。1998;42:209-215。
34. 肖KJ，等。铜绿假单胞菌anAAC(6’)-II基因的分离、鉴定及DNA序列分析Antimicrob。化学试剂。1989;33:2052-2062。
35. Tada T，等。新型6'- n -氨基糖苷乙酰转移酶AAC(6')-Iaj来自铜绿假单胞菌临床分离物。抗微生物制剂。2013;57:96-100。
36. Tenover FC等。柠檬酸杆菌R因子氨基糖苷6'- n -乙酰转移酶基因的克隆与测序。中华微生物学杂志。1988;17:471-473。
37. 别墅L等。携带blaNDM-1, blaCTX-M-15和qnrB1基因的IncH质粒的完全测序。《抗菌化学杂志》2012;
38. 王gq，等。牛乳腺炎分离大肠埃希菌中整合子介导的抗微生物药物耐药性的研究。兽医微生物2008;127:73-78。
39. Barrios H，等。在墨西哥肠杆菌科临床分离株中，质粒编码的1类整合子含有ges型广谱β -内酰胺酶。Antimicrob。化工学报。2012;56:4032-4034。
40. el Solh N，等。金黄色葡萄球菌染色体氨基糖苷类耐药基因的克隆与分析。质粒。1986;15:104 - 118。
41. 兔子K等。在pBWH301的整合子中发现了含有氨基糖苷类耐药基因aacA7和氯霉素耐药基因catB3的新的移动基因盒。Antimicrob。化学化学。1995;39:686-693。
42. Lambert T，等。鲍曼不动杆菌染色体aac(6’)-Ij基因和鲍曼不动杆菌aac(6’)-Ih质粒基因的鉴定Antimicrob。化学试剂，1994;38:1883-1889。
43. 兔子KL，等。在pBWH301的整合子中发现了含有氨基糖苷类耐药基因aacA7和氯霉素耐药基因catB3的新的移动基因盒。Antimicrob。化学化学。1995;39:686-693。
44. Centron D和Roy P.从天然多抗性质粒整合子中鉴定6- n -乙酰基转移酶基因aac(6)-Iq。Antimicrob。化学化学。1998;42:1506-1508。
45. Sekiguchi J，等。引起神经外科病房爆发的耐多药铜绿假单胞菌菌株及其编码一种新型氨基糖苷乙酰转移酶的aac(6’)-Iae基因盒。Antimicrob。化学工业。2005;49:3734-3742。
46. Salauze D，等。产新霉素的白耳小单孢菌和链霉菌氨基糖苷乙酰转移酶编码基因的研究。1991; 101: 143 - 148。
47. Lopez-Cabrera M等。甲醛链霉菌氨基环糖醇乙酰转移酶基因的分离和核苷酸测序。中华微生物学杂志，1989;
48. Vliegenthart JS，等。aacC3基因的核苷酸序列，庆大霉素耐药决定因素，编码氨基糖苷-(3)- n -乙酰转移酶III，在铜绿假单胞菌中表达，但在大肠杆菌中不表达。抗微生物制剂。1991;35:892-897。
49. Nemec A等。泛欧洲鲍曼不动杆菌无性系中氨基糖苷类耐药基因的多样性及其与1类整合子的关系。中华医学微生物学杂志，2004;
50. 沃尔夫E，等。gcn5相关n -乙酰转移酶的晶体结构:粘质沙雷菌氨基糖苷3- n -乙酰转移酶。细胞。1998;94:439 - 449。
51. Wright GD, Ladak P.染色体氨基糖苷6'- n -乙酰转移酶在屎肠球菌中的过表达和鉴定。Antimicrob。化学化学。1997;41:956-960。
52. Weems JJ等人。医院多耐氨基糖苷类粪肠球菌分子流行病学分析。《抗微生物化学杂志》1989;24:21 -130。
53. 而是PN，等等。粘质沙雷菌aac(3)-Vb基因的克隆及DNA序列分析。《Chemother》，1992;36:2222-2227。
54. 而是PN，等等。编码新型3- n -乙酰基转移酶的aac(3)-VIa基因的分析。抗微生物制剂Chemother, 1993;37:2074 - 2079。
55. Galimand M等。抗微生物制剂Chemother 2015;59:5647-5653。
56. Tolmasky ME，等。肺炎克雷伯菌转座子介导的阿米卡星耐药。Antimicrob。化学制剂。1988;32:1416-1420。
57. Tolmasky ME和Crosa JH。Tn1331是一种新型多耐药转座子，编码肺炎克雷伯菌对阿米卡星和氨苄西林的耐药。Antimicrob。化学制剂，1987;31:55 - 1960。
58. Payie K等人。庆大霉素2'- n -乙酰转移酶对罗维登草肽聚糖O乙酰化的贡献。中华微生物学杂志，1995;17:4303 - 4310。
59. Hegde SS，等。结核分枝杆菌中染色体编码氨基糖苷2′- n -乙酰转移酶(AAC(2′)-Ic)的过表达及机制分析。生物化学学报，2001;
60. 审查MW等。来自结核分枝杆菌的氨基糖苷2'- n -乙酰转移酶与辅酶A和氨基糖苷底物的复合物。生物工程学报，2002;9:653-658。
61. 米勒GH，等。最常见的氨基氨基糖苷耐药机制结合了世界8个地区的调查结果。氨基糖苷类药物耐药研究组。中华化学杂志，1995;7:17-30。
62. Robicsek A等人。氟喹诺酮修饰酶:一种常见氨基糖苷乙酰转移酶的新适应性。中华医学杂志，2006;12:83-88。
63. Compain F，等。肺炎克雷伯菌两株多药耐药IncR质粒的核苷酸全序列分析。chemother2014; 58:4207-4210。
64. Park CH，等。美国流行编码环丙沙星修饰酶的aac(6’)-Ib-cr。《Chemother》，2006;50:3953-3955。
65. Rodríguez-Martínez JM，等。质粒介导的喹诺酮类耐药:20年过去了。耐药性更新，2016;29:13-29。
66. Ruiz E，等人。产气肠杆菌对环丙沙星耐药水平的变化与aac(6’)-Ib-cr基因的可变表达有关。《Chemother》，2012;56:1097-1100。
67. Simjee S，等人。在英国分离的高级别庆大霉素耐药屎肠球菌临床分离株中质粒异质性和tn5281样元素的鉴定中国生物医学工程学报。1999;23(3):329 - 329。
68. Ferreti J，等。粪链球菌中具有6-氨基糖苷乙酰转移酶2-氨基糖苷磷酸转移酶双功能基因的核苷酸序列分析及具有这两种活性的基因区域的鉴定和克隆。中华微生物学杂志，1986;
69. Rouch DA，等人。金黄色葡萄球菌Tn4001庆大霉素和卡那霉素耐药决定因素的aacA-aphD:表达和核苷酸序列分析中华微生物学杂志，1987;
70. Khan SA，等。多药耐药菌中aacA-aphD、qacEd1、marA、floR和tetA基因的检测:EvaGreen(®)和SYBR(®)Green I染料实时多重PCR检测的比较分析Mol Cell Probes, 2011;25:78-86。
71. Boehr DD，等。抗生素耐药酶氨基糖苷乙酰转移酶6'-氨基糖苷磷酸转移酶2"扩增底物特异性的分子基础。ASP-99作为活性位点碱基的作用对乙酰基转移很重要。中国生物医学工程学报，2003;
72. Yildiz Ö，等。土耳其12家医院分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及耐药机制。安临床微生物抗菌。2014;13:44。
73. Weems JJ Jr等人。医院多耐氨基糖苷类粪肠球菌分子流行病学分析。《抗微生物化学杂志》1989;24:21 -130。
74. Mir AR等。印度UTI患者大肠杆菌中编码氨基糖苷修饰酶基因的鉴定。科学世界。2016:1875865。
75. Kim C，等人。铜绿假单胞菌双功能氨基糖苷修饰酶AAC(3)-Ib/AAC(6’)-Ib’的机理研究。生物化学,2007;46:5270 - 5282。
76. 托特M，等。在革兰氏阴性病原体中鉴定出新的氨基糖苷2 " -磷酸转移酶。《Chemother》，2013;57:452-457。
77. 戴维斯J和赖特GD。细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性。微生物学，1997;5:234-240。
78. 汤普森CJ和格雷GS。链霉菌氨基糖苷磷酸转移酶基因的核苷酸序列及其与抗性质粒编码的磷酸转移酶的关系。国家科学研究院。美国1983;80:5190 - 5194。
79. Matsuhashi Y，等。铜绿假单胞菌的氨基糖苷3'-磷酸转移酶I和II。《抗生素》(东京)1975;28:442-447。
80. 链霉素/大霉素腺苷基转移酶基因的核苷酸序列分析。质粒。1985;13:17-30。
81. Lambert T，等。嗜麦芽窄养单胞菌染色体aac(6)-Iz基因的鉴定。抗微生物制剂。1999;43:2366-2371。
82. 肖KJ，等。粘质沙雷菌染色体aac(6’)-Ic基因的鉴定。Antimicrob。化学制剂。1992;36:1447-1455。
83. Costa Y，等。屎肠球菌特异性染色体aac(6’)-Ii基因的鉴定。抗微生物制剂。1993;37:1896-1903。
84. Rudant E，等。不动杆菌aac(6’)-Ik基因的鉴定《。列托人。1994;124:49-54。
85. Lambert T，等。不动杆菌13染色体aac(6)-Ij基因和鲍曼不动杆菌aac(6)-Ih质粒基因的鉴定。Antimicrob。化学试剂，1994;38:1883-1889。
86. Chakraborty正义与发展党。在细菌NDM-1和KPC-1碳青霉烯酶引起严重MDR表型的热点突变的硅分析中。生物化学生物技术Res. 2016;4:17-26。
87. 艾林，等。多药耐药新药FS-1全基因组序列。基因组学报。2015;3:e01272-15。
88. Chakraborty正义与发展党。加尔各答多药耐药细菌的高模式污染:基因激活机制和异质植物抗生素的补救。中国生物医学工程学报。2015;
89. Compain F，等。肺炎克雷伯菌两种耐多药IncR质粒的核苷酸全序列分析。《Chemother》，2014;58:4207-4210。
90. 伊藤T，等。MRSA葡萄球菌盒染色体mec (SCCmec)分析。方法Mol biology, 2014;1085:131-148。
91. Hasani A，等。伊朗鲍曼不动杆菌不同序列群氨基糖苷修饰酶的频率和ArmA。微生物耐药性。2016;22:347-353。
92. Galimand M等。抗微生物制剂Chemother 2015;59:5647-5653。
93. Perumal N，等。氨基糖苷修饰酶基因在耐甲氧西林葡萄球菌临床分离株中的分布。印度医学微生物杂志。2016;34:35 50-352。
94. 牛H，等。内蒙古地区氨基糖苷类高耐药肠球菌氨基糖苷修饰酶和毒力基因的流行情况。中国微生物学杂志，2016;47:691-696
95. 赵s，等。在美国从人类和零售肉类分离的弯曲杆菌中发现新的庆大霉素耐药基因。中国生物医学杂志，2015;