低温贮藏

摘要

保存人类或动物卵母细胞、囊胚、多产器官/性腺/性腺组织和精子的能力是动物辅助生殖技术的关键工具。这种保存使正在接受治疗或放射治疗的患者能够保持他们的生育能力，并有助于在辅助生殖技术(ART)之前实现昂贵的性腺超排卵疗法的所有优势。建立护理相关的相变方案的第一个目标是尽量减少损伤，而将标本暴露在非生理性低温下。如今有两种技术被广泛应用于低温保存:慢冷技术和更现代的快速玻璃化技术。玻璃化是直接的，不需要昂贵的可编程相变仪器，经济和价值有效的，因为提高了每个周期的添加妊娠率。卵母细胞、囊胚、性腺组织和精子可能适合玻璃化和低温保存。玻璃化是一种长期的冷冻保存方法，每天都有重要的进展，在这个活跃的领域里，在一项试验中，为各种配子，胚胎和组织的冷冻保存找到了最好的方案。低温保存还用于保存其他天然材料，如孢子粒，一些最重要的营养种子和大量的。有几种自然物质正在灭绝。这些材料通常通过低温保存来长期保存使用。

关键字

卵母细胞;囊胚;超数排卵;玻璃化;羊膜的

简介

低温保存，也称低温保存，是一种方法，当细胞器、细胞、组织、细胞外基质、器官或其他生物结构因不受管制的化学动力学而面临伤害风险时，通过冷却至极低温度(通常为-80°C固体温室气体或-196°C液氮)来保存该区域单元[1］．在足够低的温度下，任何可能对生物材料造成伤害的催化剂或化学活性都能有效地停止。低温保存策略既能达到低温，又不会在降温过程中形成冰而造成额外的伤害。古代的冷冻保存依赖于在织物上涂上一种被称为冷冻保护剂的分子。由于许多冷冻保护剂的固有毒性，新的战略领域单位不断被研究。2］．默认情况下，应该考虑到低温保存会改变或损害细胞的结构和性能，除非对特定的细胞群另有规定。动物遗传资源低温保存是一种收集动物遗传物质并保存以保存该品种的方法。

羊膜的保存

近年来，羊膜及其干细胞的功能受到了广泛的关注。这种膜已被证明具有许多独特的能力，使人联想到抗癌作用[3.，4]此外，还包括发育和血管形成能力[5］．重要的是要注意，为了考虑羊膜作为一种可能的选择，在临床环境中使用是明智的，重要的是要确保该组织可以保存并转移到完全不同的患者，根据需要进行PRN和一旦需要，而在强制修改后保持其能力。目前的研究目的是总结总结已经做了什么来评估羊膜可能被保存的机会，即使在膜上进行冷冻和解冻程序，也能保持其活力和特定的特性。

羊膜是人类胎盘的个人层，隐藏着许多物质，并具有独特的特征，使人联想到免疫调节、抗血管生成和促凋亡活性，此外还有抗菌特性、抗成纤维细胞活性、细胞迁移和细胞生长促进活性。羊膜(AM)作为一种生物屏障，通过在解剖学、生理学和免疫学上准备副学位来支持胎儿[6，7］．AM由一层厚的基底膜和一层动物组织干细胞(ESCs)以及含间充质干细胞(MSCs)的无血管基质组成。研究表明，羊膜之所以具有独特的特征，是因为它两侧都有特殊的干细胞。AM已经显示出的众多属性之一是在msc存在下的发育能力。研究已经证明这些干细胞有促血管生成的结果[5，8]而AM方测量的ESCs显示出抗血管生成和促凋亡的特性[3.，4］．AM促血管生成作用可促进显性血管疾病[5]而该膜及其干细胞的抗血管生成和促细胞凋亡作用可应用于癌症医疗援助[9-15］．

更多冷冻保存可以做的例子

印度大陆可能是一个Bos indicus奶牛的存储，其中最重要的广泛品种之一是“Ongole”，通过遗传可能是一个双重目的品种，因其节俭，健壮和抗疾病而被接受。已经确定的是，在本土的杂交公牛中，由于低活力，高比例的异常精子和在不同阶段的低温降低中较差的冷冻性，大量射精被丢弃。精子细胞对低温保存的整体敏感性可能存在物种差异;射精是异质的，对细胞间的扩散应力有不同的抵抗能力。在热带条件下，外来品种的精液特征表现出明显的季节性波动，整个夏季的高温会使性腺温度升高，从而对性腺大小、性欲、精液质量和附睾精子产生不利影响，一旦温度降低，精子保持活力和顶体完整性的能力就会减弱。与最近的精液相比，需要8倍数量的冷冻保存的牛精子才能在体内达到相同的受精率[16］．

Qing等人研究了排泄(脂粒去除)对猪卵母细胞生物过程能力的影响。脱落(+/−)和/或玻璃状(+/−)卵母细胞进行无融合激活，记录第一个无融合胚胎的生存能力，因此胚胎随后被转移到受体进行更多发育。结果表明，第一个脱落卵母细胞的无融合胚胎的卵裂率和囊胚率显著低于一个效应簇(未脱落卵母细胞)的胚胎(P<0.05)，一旦转移到受体猪，这些胚胎就可以进一步发育并提供无融合胚胎。应用最小体积冷却(MVC)技术，早期精化卵母细胞的无融合胚胎可在1细胞至早期囊胚阶段进行玻璃化冷冻保存。一旦解冻，第一囊胚期被发现是玻璃化的最佳时期。从早期脱落的卵母细胞中提取2-4个玻璃状细胞的联合胚胎移植到2只受体猪中，得到肢芽期胎儿。最后，结果无可争辩，无融合胚胎是由玻璃化前或玻璃化后的猪胚胎通过战略组合在体外-成熟(IVM)配子体在任何早期胚胎生物过程阶段的玻璃化脱落。该方法可应用于脱臼卵母细胞衍生的克隆胚胎和细胞质内精子注射胚胎的冷冻保存[17］．

非洲鲶鱼是一种极好的鱼类，市场需求量很大[18］．然而，池塘养殖鱼籽的标准和数量仍然是物业养殖的一个重要问题。因此，低温保存是一种提高种子产量的方法。低温保存技术可能会在非洲国家鲶鱼养殖贸易的鱼场经营者中得到发展。该程序包括选择育雏、精细胞组合、冷藏、冷冻、解冻、使用和处置规则、转让协议和信息开发[19-36］．

停止风险主要策略

阻止低温保存损害的主要技术是控制速率和缓慢冷却的成熟组合，以及最近的一种称为玻璃化的快速冷冻方法。

慢速可编程冷冻

控制速率和缓慢冷却，联合称为缓慢可编程冷冻(SPF)，是一套完善的技术，在整个70年代发展起来，使第一个人类胚胎冷冻出生佐伊莱兰在1984年。从那时起，冷冻生物样本的机器利用可编程序列或控制速率，在全球各地用于人类、动物和细胞生物学——“冷冻”样本，以提高保存它以最终解冻，然后将其冷冻或低温保存在氮气中。这种机器用于冷冻卵母细胞、皮肤、血液、胚胎、精子、干细胞和世界各地医院、兽医诊所和分析实验室的一般组织保存

致命的细胞内冷却是避免的，如果冷却足够慢，让舒适的水离开细胞，在整个液体物质的渐进冷却，以减弱细胞外霜雾生长和再结晶的扩张，海藻酸盐，聚乙烯醇或壳聚糖等生物材料与古老的小分子冷冻保护剂一起，通常会阻碍霜雾的生长。在不同大小和透水性的细胞之间，冷却速率不同:一旦使用甘油或二甲基亚砜等冷冻保护剂处理，典型的冷却速率约为1°C/分钟是可以接受的，但这个速度并不是一个普遍的最佳速度。1°C/分钟的速率是通过开发设备来实现的，这些设备让人联想到速率控制电冰箱或台式便携式制冷设备[37］．

一些自由研究提供了证据，证明冷冻胚胎可以利用慢冷冻技术在某些方面可能比当代试管婴儿“更好”。研究表明，利用冷冻胚胎和卵子而不是现代胚胎和卵子可以降低流产和早产的几率，尽管确切的原因仍在探索中。

玻璃化

研究人员Greg Fahy和William F. Rall在20世纪80年代中期帮助将玻璃化技术引入了富有成效的低温保存。截至2000年，研究人员声称玻璃化提供了低温保存的优势，同时不会因为霜雾的形成而损伤，随着组织工程的发生，每个细胞和生物材料都要保持不冻结，以保持高细胞活力和功能，生物材料结构的完整性，这变得非常复杂。组织设计结构的玻璃化为1^圣据Lilia Kuleshova传言，世界卫生组织是实现女性卵子(卵母细胞)玻璃化的主要灵魂，并于1999年诞生。对于临床低温保存，玻璃化有时需要在冷却前添加冷冻保护剂。冷冻保护剂的作用类似于防冻剂:它们降低了冷却温度。它们共同增加身体。而不是结晶，糖浆的答案变成了associate degree无定形冰——它玻璃化。非晶态不是通过结晶从液体到固体的自然过程，而是一种“固液”状态，因此这种转变是在很小的低温下变化的，因为“玻璃化转变”温度。

水的玻璃化是通过快速冷却来促进的，在没有冷冻保护剂的情况下，可以通过特别快速的温度下降(每秒megakelvin)来实现。在纯水中实现玻璃态所需的速度直到2005年才被认为是不可能的。

有时需要两个条件来允许玻璃化正方形测量:身体的上升和冷却温度的下降。不同的溶质都有不同的作用，但分子越大，对身体的影响就越大。快速冷却共同促进玻璃化。

对于现有的冷冻保存策略，物质应该穿透细胞膜，从而实现双曲体，降低细胞内的冷冻温度。糖会立即渗透到膜中。那些溶质，让人联想到二甲基亚砜，一种典型的冷冻保护剂，在高浓度下通常是肾毒性的。玻璃化低温保存的一个棘手的妥协问题是限制由低温保护剂本身造成的伤害，因为低温保护剂的毒性。冷冻保护剂的混合物和因此使用的冰阻滞剂已使普通Century药物公司用其专有的玻璃化混合物将兔子排泄器官玻璃化至-135°C。恢复体温后，排泄器官被成功移植到兔子体内，具有完全的实用性和生存能力，能够无限期地维持兔子的生命，因为唯一功能正常的排泄器官[37］．

自体异体外周细胞移植对骨髓瘤患者是有益的。通过提供冷冻保存，该手术可以在技术设备稀缺的其他医院以更低的价格进行，安全有效。在副学位阶段，价值分析在涉及癌症的健康项目的更高认知过程中变得越来越重要，重要的是要承认患者的生存积累，并希望他们尽快回到工作环境，这可能是生活质量的优先事项，并避免工作日缺课，这应该归结为抗肿瘤治疗的全部价值。

在像墨西哥这样的国家，如果获得治疗毫米病的流行有效药物(硼替佐米、来那度胺、卡非佐米、pomalidomide等)是稀缺和有限的，那么通过简化其来开发扩大造血移植项目的方法是非常重要的。38］．

低温保存是电机辅助复制的重要组成部分。多年来，慢速冷冻技术的应用创造了受精卵和胚胎的冷冻保存三冠，使成千上万的患者有机会延长其疗效在体外受精(IVF)周期。最近，在日常临床应用中引入玻璃化技术，使胚胎低温保存(主要是卵母细胞)取得了更好的成功。玻璃化被认为是一种比慢速冷冻更经济的方法。这通常是一种更快、更简单的技术，可获得更高的胚胎和卵母细胞存活率。因此，玻璃化为体外受精尝试提供了额外的动力[39-43］．

玻璃化在体外受精中的引入伴随着相关分析的相关性甜度。因此，新的玻璃化方案和设备已经出现，以提高冷冻周期的成功率。在礼物研究中，大鼠卵母细胞用一种替代玻璃化方案进行玻璃化，并与另一种成熟的和商业上可获得的方案进行比较。最大的实时结果是解冻后和48小时后的实时存活率[9，44-52］．

结论

据观察，在大多数情况下，一个器官在冷冻保存之前和之后，两者具有相同的特征，在品质方面几乎没有或没有损失。由于低温保存具有保存人或动物卵母细胞的能力，囊胚、生殖器官/性腺/性器官组织和精子可能是动物运动辅助生殖技术的重要工具。这种保存允许接受医疗援助或照射的患者保持其生育能力，并有助于实现在ART(辅助复制技术)之前的昂贵的性腺超排卵疗法的所有好处，这是建立护理相关适用行动方案的主要目标，即将标本暴露在非生长期低温下，尽可能减少伤害。有几种自然物质正在灭绝。这些材料通常通过低温保存来长期保存使用。

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