检测人乳头瘤病毒16型癌基因E7在手术材料从俄罗斯的前列腺癌患者

加林娜M Volgareva^*,瓦D Ermilova^*#亚历山大·V Khachaturyan维克托•V Tatarsky Vsevolod B Matveev和拉里萨奶油蛋白甜饼

NN高烧的俄罗斯癌症研究中心,俄罗斯联邦卫生部,莫斯科,俄罗斯

^#两个作者同样起到了推波助澜的作用

*通讯作者:: 加林娜M Volgareva
NN高烧的俄罗斯癌症研究中心的俄罗斯联邦卫生部
莫斯科,俄罗斯
电话:00 7 495 324 1205
电子邮件: (电子邮件保护); 瓦维Ermilova
NN高烧的俄罗斯癌症研究中心的俄罗斯联邦卫生部
莫斯科,俄罗斯
电话:00 7 495 324 1205
电子邮件: (电子邮件保护)

收到的日期:06/04/2017;接受日期:21/04/2017;发布日期:28/04/2017

文摘

前列腺癌(PC)是第二个最常见的恶性肿瘤,全世界的男人。还没有澄清个人电脑发展的原因。酝酿已久的物品可能PC与致癌人类乳头状瘤病毒(HPV)仍然是有争议的。这项研究的目的是通过PCR测试是否手术材料从PC患者在俄罗斯港口E7 HPV16的致癌基因,主要负责宫颈癌的人乳头状瘤病毒类型。Cryostate削减前列腺切除的根治性前列腺切除术PC患者microdissected从17。HPV16 E7 7例包括所有这五个病例被发现的DNA被孤立的同类网站的癌细胞。澄清的结果似乎是重要的PC病因和预防措施的发展。

关键字

前列腺癌、病原学、人类乳头状瘤病毒致癌基因E7

介绍

前列腺癌(PC)是第二个最常见的恶性肿瘤全世界的人包括俄罗斯联邦(1,2]。提升电脑发病率和死亡率是最高的在所有的男性肿瘤(俄罗斯在过去的十年2]。还有没有澄清的原因电脑综合开发(3]。一组可能的病原体的PC致癌人类乳头状瘤病毒(HPV) (4- - - - - -6]。这里更合适,致癌人类乳头瘤病毒被发现在泌尿生殖系统健康的俄罗斯男性的42% (7]。尽管,可能与人乳头状瘤病毒电脑协会是一个酝酿已久的问题仍有待解决。时事性不能高估了:如果电脑协会与高风险的人类乳头瘤病毒被证明是一个前景似乎防止癌症免疫接种的男孩为预防宫颈癌的疫苗(CC)。

宫颈上皮细胞的恶性转化致癌人类乳头瘤病毒感染的发生是因为两个病毒蛋白质的活动,E6、E7,由两个相应的病毒致癌基因编码。这些蛋白质活性细胞肿瘤抑制基因p53和复审委员会分别。宫颈细胞失去控制的扩散能力,细胞凋亡、DNA修复和一些其他重要的功能。最常见的致癌HPV类型负责50%以上的CC病例HPV16 [8,9]。这项工作的目的是为了测试通过PCR HPV16致癌基因E7是否存在于从PC患者在根治性前列腺切除术手术材料。更好的DNA保存这项研究是进行冷冻保存(不是用福尔马林或石蜡)治疗前列腺组织。就多病灶的增长特点首先发现了前列腺癌PC病理改变地区的形态学家(V.D.E.)过程中宏观上切割,然后微解剖进行如下所述。据我们所知这是开创性的尝试检测HPV DNA在PC使用PC微解剖标本结合低温贮藏。

材料和方法

前列腺腺体的17个PC患者使用。腺体被手术切除的泌尿系高烧的俄罗斯的癌症研究中心。病人的年龄变化从52到69年,血清PSA指数在4.6 - 42.0 ng / ml和格里森评分由6 - 8。这些特征以及肿瘤TNM介绍阶段的含义表1列2 - 5。切割的病理改变地区的前列腺手术后1 - 2小时内完成;组织碎片,上面有一个宏观上检测到异常用于HPV E7测试放入冰箱(-60°C)。微cryostate削减和解剖DNA隔离进行了根据郭稍微修改过程et al。10]。两个串行削减5μm厚是由冷冻组织碎片和眼镜放在两个不同的对象。其中一个是沾hematoxylin-eosin然后用于正常上皮的微观区域的启示,displasia和电脑。相应的标志是用玻璃做成封面。第二减少了清白的,发现微解剖,放大镜下进行考虑是在第一张幻灯片。避免污染新的手术刀是每下一个区域。在主要多数情况下单层微切割在给定的幻灯片。唯一的例外让病人N1。对于这种情况是可能从两个区域对应于分离DNA销我和第三针。

病人没有	年龄、年	TNM阶段	血清PSA (ng / ml)	Glea-son得分	Postoperational组织学数据	Cryostate幻灯片组织学数据	结果ofHPV16Е7 PCR的检测
1	52	T2N0M0	5.9	7	小腺泡的癌症	销我	+
						第三针	+
					中度分化腺癌
2	60	T2N0M0	8.1	7		第三针	- - - - - -
					小腺泡的癌症
					——«
3	56	T2N0M0	9.3	6	——«	第三针	- - - - - -
4	64年	T2N0M0	5.2	7	——«	第三针	- - - - - -
5	52	T2N0M0	42.0	6	——«	第三针	- - - - - -
6	63年	T2N0M0	4.7	6	——«	个人电脑	+
7	63年	T2N0M0	6.0	6	——«	第三针	- - - - - -
8	66年	T2N0M0	12.6	6	——«	个人电脑	+
9	63年	T3N0M0	4.9	6	——«	第三针	- - - - - -
10	68年	T2N0M0	42.0	7	——«	个人电脑	+
11	69年	T2N0M0	32.8	7	——«	个人电脑	+
12	67年	T2N0M0	8.4	6	治疗pathomorphosis	正常组织	- - - - - -
13	58	T2NxM0	22.8	8	小腺泡的癌症	腺病	+
14	55	T3N0M0	34.0	7		正常组织	- - - - - -
15	68年	T2N0M0	5.5	7		良性增生	- - - - - -
16	63年	T2N0M0	8.4	8			- - - - - -
17	65年	T2N0M0	4.6	7			+

表1。病人的临床资料;HPV 16致癌基因Е7检测结果在他们的个人电脑。

细胞从而收集与蛋白酶K细胞溶解的解决方案(500μg /毫升,“螺旋”,俄罗斯)在Tris-HCl缓冲区(0.01МТрис- HCl, pH值8.0,0.001 M EDTA, 0.5% Tween20) 55°C下过夜。酶灭活了加热溶解产物在95ºС10 min.Successfulness DNA的隔离控制与以下引物PCR GAPDH基因:远期(5’- ACC ACA GTC猫GCC ATC AC - 3 ')和反向(5’-太极拳ACC ACC CTG TTG CTG助教3 ')。放大产品的长度是450个基点。放大程序是这样的:94°С- 5分钟,28个周期94°С- 30秒,58°С- 30秒,72°С- 60秒;最后扩展为2分钟。

检测HPV16 E7前面描述的过程是应用11]。以下特定类型使用引物:意义,5’——CGG ACA GAG CCC ATT ACA - 3 ';反义,5 '棉酚CAG ATG GGG CAC ACA - 3的。放大产品的长度是144个基点。程序是这样的:94°С- 4分钟;然后35周期的三个步骤:94°С- 30秒,58°С-30秒,72°С- 90秒;结论伸长了6分钟。

积极控制与HPV16 E7-specific PCR引物HPV16-harboring CC的DNA标本使用;反应混合物没有DNA作为消极的控制。如果足够的结果已经获得注册的数据在两个控件。发现通过放大DNA片段电泳在1.5% (GAPDH)或2.0% (HPV16 E7)琼脂糖凝胶中存在溴化乙锭(0.5μg /毫升)。

PCR是在仪器“Tertsik”(“DNK tekhnologii”,俄罗斯);结果电泳的pcr产物进行分析和注册的帮助下图像量化拉斯维加斯4000(“通用电气医疗集团”)。

结果与讨论

存在电脑下的16个病人前列腺研究的结果证实了腺的组织学分析手术后(表16)列。小腺泡的癌症了15人,当一个样本(病人N2)被证明是一个中度分化腺癌。癌症并没有检测到前列腺癌组织的病人N14:大区域的纤维化,稀缺淋巴浸润和罕见的萎缩性导管的照片总pathomorphosis治疗癌症。数据的微观分析的两种串行削减用于微型解剖了的过程表17列。均匀区域的电脑中发现了五个标本(病人6、8、10、11和17)。其他七个病例有别针(病人1 - 5、7和9)。其余样本如下:正常前列腺组织(病人12和14),良性的增生(15 - 16)患者和腺病病人(13)。存在HPV16 E7注册7 PCR的17个病人。所有五个电脑情况下变成了病人的积极以及两针1(表1和图1)。

reports-in-cancer-and-treatment-amplification

图1:电泳图的放大与E7 HPV16-specific PCR引物的产品。1-HPV16——积极的CC(积极的控制);2 -销我的病人1;3 -销III的病人1;4 - - - - - - -控制。

我们研究的结果进行数量限制的PC患者特别注意最大均匀组织的DNA保存以及检查区域作证,致癌HPV16可能经常发现不正常的网站的前列腺。文献数据的荟萃分析的结果L杨等人证实人乳头状瘤病毒的全球发病率之间的联系和相对PC的风险,但强调结果的inconclusiveness由于许多参数,如地理区域,标本类型,检测方法,格里森评分等。12]。针对特定的问题的紧迫性在实际医疗值得进一步调查。我们目前的理解全球癌症负担的链接与传染性病原体包括病毒可能,而远离完整性强调了研究的先驱乳头瘤病毒致癌H zur Hausen教授在他的诺贝尔演讲(13]。在这个连接似乎值得提及的出版物表明存在致癌人类乳头瘤病毒在某些普遍的癌症类型:肺癌(14,15],乳腺癌[16- - - - - -18),膀胱癌(19,20.]。我们的经验表明,对于有讨论余地的情况似乎合理的验证的事实在信使rna病毒基因组的表达和/或蛋白质水平(11,19]。这些发现对于实用肿瘤学的重要性就意味着肿瘤HPV病毒的预防或应用程序作为一个预测标记可能会清楚之后在进一步的研究中。

结论

获得的结果证明致癌HPV16的经常发生在俄罗斯PC患者的前列腺。他们对电脑的兴趣病因说明和工作电脑的预防措施。可能致癌人类乳头瘤病毒参与PC创世纪值得密切关注和进一步研究。

引用

托瑞拉,等。全球癌症发病率和死亡率和趋势——一个更新。生物标记:癌症论文。2016;25:16-27。
2014年在俄罗斯Kaprin et al.Malignant畸形(发病率和死亡率)。莫斯科。2016;250年。
Imyanitov EN。前列腺癌的流行病学和生物。PrakticheskayaOnkologiya(实用肿瘤学)。2008;9:57 - 64。
里昂。研究专著人类致癌风险的评估。人类乳头状瘤病毒。2007;90:689。
里昂。研究专著人类致癌风险的评估。回顾人类致癌物。部分生物制剂。2011;100:502。
Volgareva通用。前列腺癌:乳头状瘤病毒作为一个可能的原因。Vestnik Rossiiskoi Academii研究Meditsinskikh——俄罗斯医学科学院年报。2015;70:95 - 100。
Smelov V, et al。表达前列腺分泌物的人类乳头瘤病毒流行病学研究的男性。《公共科学图书馆•综合》。2013;8:625 - 630。
这苏珥是HH。乳头状瘤病毒和癌症:从基础研究到临床应用。Nat癌症。2002年,牧师2:342 - 350。
这苏珥是HH。疫苗接种和超越。生物化学(莫斯科)。2008;73:498 - 503。
郭Z, et al .瘤内异质性分析染色体3 p删除和遗传的证据多克隆起源宫颈鳞状细胞癌。国防部分册,2001;14:54 - 61。
Golovina哒,et al。复杂的分子遗传和免疫组织化学方法检测膀胱癌上皮的人类乳头瘤病毒。牛实验医学杂志。2014;157:70 - 73。
杨L,等。在世界范围内普遍存在的人类乳头瘤病毒及前列腺癌的相对风险:一个荟萃分析。Sci众议员2015;5:14667。
这苏珥是HH。寻找人类癌症的感染原因:为什么(诺贝尔演讲)。Angew ChemInt病杂志。2009;48:5798 - 5808。
Srinivasan M,等。人类乳头瘤病毒16和18型原发性肺癌——metaanalysis。致癌作用。2009;30:1722 - 1728。
Ragin C, et al . HPV-associated肺癌:国际联合分析。致癌作用。2014;35:1267 - 1275。
Villiers EM, et al .存在乳头瘤病毒序列condylomatous mamillae和浸润性癌的病变。乳腺癌研究》2005;7:1-11。
劳森JS、et al。人类乳头状瘤病毒和乳腺癌。FrontOncol。2015年。
劳森J。年代,et al。人类乳头状瘤病毒识别在乳腺癌患者宫颈瘤。FrontOncol。2016年。
Volgareva通用,等。人乳头状瘤病毒在移行细胞癌形成的作用:问题的当前状态。在膀胱癌基础科学Roboric手术。2011。
Golovina DA等al.Loss HPV-associated膀胱癌细胞分化。BullExpBiolMed.2016; 161:96 - 98。