检测的主要假定的牙周病原体在伊朗成人患者中使用多重PCR和文化

文摘

牙周疾病的治疗方法是基于的根源的正确诊断病变情况。目前的研究发现和描述牙周病原体与伊朗有关病人使用文化和多重PCR技术。100年龈下的斑块样本取自100先进成人牙周炎(美联社)科目。美联社获得的样本在每个病人最深的牙周袋。样品被多路复用立即培养并化验使用特定基因引物PCR。牙周病原体的总检出率为64%,文化和65%复合PCR方法。Aggrigatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Porphyromonas gingivalis普氏菌(Pg)和媒介物(Pi)出现在28%,分别为6%和3%的患病的网站。合并后的Aa, Pg和π是27%。Aa的细菌分离率、Pg和π在文化是30%,分别为7%和5%的患病的网站。合并后的Aa, Pg与多重PCR和π。 Method was 23%. This study found that Aa is the most predominant bacterium detected by both culture and multiplex PCR. Although the detection rates were marginally similar in the two methods, the PCR technique is more preferential compared with the culture, and the data of the current study recommend the use of the molecular techniques for the detection of periodontal pathogens due to labor intensive and time consuming nature of culture technique. Also, molecular techniques may be more reliable than culture because of detection of specific target genes.

关键字

牙周炎、多重PCR、孤立

介绍

临床意义

牙周炎是一种炎性牙龈疾病与各种不同人群的发病率。在一些社区口腔细菌被认为是疾病的主要病因。牙周组织的破坏的后果是微生物活动和宿主的免疫反应。这项研究发现,30%的主要假定的牙周病原体是Aa(培养法)和23%(多重PCR)患病率。虽然治疗牙周炎是至关重要的,口腔卫生可以被视为最重要的参数参与预防潜在的牙周致病菌的产物和随之而来的牙龈的炎症。

牙周炎是一种最普遍的感染口腔与各种不同人群的发病率。牙周炎的患病率是归因于多种因素包括宿主免疫反应,慢性细菌感染,社会经济和卫生条件。在牙周炎的早期阶段,齿根的支持组织的破坏发生在微生物的入侵。牙周炎导致的牙周袋的形成。已经有超过300种细菌与牙周炎有关。厌氧和capnophilic细菌在牙周炎的发展发挥重大的作用[1,2]。牙周病原体的主要成分在伊朗的人口并没有在流行病学研究调查。考虑到同一病原体中发现患者的牙周袋在世界其他地区将会发现在伊朗的病人,主要假定的厌氧菌(p . gingivalis,p .媒介物)和capnophilic牙周病原体(答:actinomycetemcomitans)被认为是专门在这个研究。虽然主要的病原体仍然模糊,不同的研究表明,有一个直接联系的数量(包括牙周病原体答:actinomycetemcomitans,p . gingivalis和p .媒介物在牙周袋和牙周炎的严重程度和进展。

牙周炎的治疗基本上是旨在消除受损组织紧随其后的抗生素治疗。适当治疗或预防方法是基于参与病病原体的检测条件。几个因素可能使牙周病原体的检测和量化,而麻烦。uncultivable细菌,缺乏适当的诊断技术和难度达到sub-gingival组织样本采集的主要障碍是细菌隔离(3,4]。

治疗牙周感染被认为是可能导致系统性疾病的潜在危险因素。有几个报告,牙周炎与动脉粥样硬化、冠状动脉心脏病和呼吸系统疾病(5- - - - - -7]。因此,挑剔的牙周致病菌的检测和识别是最重要的。我们旨在发现和描述在伊朗患有牙周炎患者牙周病原体并行使用文化和多重PCR技术。

材料与方法

病人和样品

病人包括62名女性和男性38岁(平均49.5)。他们指的是牙周病学诊所牙科学院,德黑兰大学医学科学。入选标准被认为是如下:没有抗生素治疗至少一个月的历史,口袋的深度等于或超过5毫米(一个样品从每个病人),并无系统性疾病史。收集的所有人口数据都填写一份详细的问卷调查表。

对于每一个主题,一个龈下的站点与最深的牙周袋(≥5毫米探测深度,30秒)是由纸点采样方法(Antaeos,慕尼黑,德国)。摘要点插入到无菌bijoubottle包含thioglycolate汤作为传输介质和交付给微生物实验室。

细菌的培养条件

样本飞跑到布鲁氏菌琼脂基(默克公司,达姆施塔特,德国)含5%羊血,和几个补充剂包括5μg /毫升氯高铁血红素(美国Sigma-Aldrich)、5%马血清和维生素K1(1μg /毫升;美国Sigma-Aldrich)。有选择性的媒体答:actinomycetemcomitans,p . gingivalis,p .媒介物是由以下抗生素添加到布鲁氏菌琼脂:3.25 mg / l baciteracin-vancomycin (Aa,σ,美国)为0.3 mg / l粘菌素Pg(σ,美国),和3.25 mg / l万古霉素对π(σ,美国)。经过48小时的潜伏期在厌氧和capnophilic条件37°C,生化和识别测试,如革兰氏染色法,氧化酶、过氧化氢酶、吲哚生产、发酵的葡萄糖、果糖、乳糖(默克公司,达姆施塔特,德国)。

分子检测

DNA提取是根据制造商的说明进行(BOINEER、韩国)。纯粹的文化标准菌株(答:actinomycetemcomitans写明ATCC 29523,p .媒介物写明ATCC 25611,p . gingivalis写明ATCC 33277)被用作积极控制。最后的多重PCR反应是25μl,包含12μl热起动主混合(美国试剂盒),7μl蒸馏水,1μl模板DNA(1μM)和0.05μl每个引物(0.50μM)。中所示的引物序列的设计表1

多重PCR协议如下:95°C 5分钟;35周期为1分钟94°C, 45秒62°C, 72°C,持续30秒。最后在72°C扩展进行了5分钟。PCR产品运行在1.5%琼脂糖凝胶含有ethidiumbromide乐队形象化。图1

统计分析

统计分析在我们的研究中使用SPSS软件版本执行16。P值小于0.05时,统计意义的定义。

结果

的患病率答:actinomycetemcomitans,p . gingivalis和p .媒介物patientswas由分子和文化的方法。

细菌培养的结果

62.9%的女性主题和63.2%的男性患者积极的至少一个目标细菌。20%的女性受试者被感染了p . gingivalis,16%的人感染p .媒介物,38.5%的答:actinomycetemcomitans图2。20%的男性受试者被感染p . gingivalis,50%的人感染p .媒介物和58.3%答:actinomycetemcomitans图3,区别男性和女性受试者无统计学意义(P = 0.57)。

多重PCR的结果

63.9%的女性患者阳性细菌至少一个目标。16%的人感染p . gingivalis,有7%的人感染p .媒介物和20.5%答:actinomycetemcomitans图4。38岁的男性病人,65.6%是阳性的存在至少一个的牙周病原体,考虑到10%的感染p . gingivalis,有6%的人感染了P.intermedia和40%答:actinomycetemcomitans图5,男性和女性之间的差异无统计学意义(P = 0.51)。

讨论

尽管牙周炎的主要原因仍然是未知的,定量研究表明,有一个直接联系的数量(包括牙周病原体答:actinomycetemcomitans,p . gingivalis和p .媒介物sub-gingival地区)和慢性牙周炎的严重程度和进展。临床症状包括牙龈渗出、出血,口袋深度、结缔组织超然,和牙周指数也与牙周病原体的数量和多样性。其他潜在因素如吸烟、年龄、遗传疾病和慢性系统性疾病如diabetesmay扮演一些角色在牙周炎的发展8]。这是一个普遍认为大多数人都受到某种影响牙周感染至少一次在他们的生活。男性与女性的发病率更高和更高的受过教育的人versusnon-educated [9- - - - - -12]。

在目前的研究中,我们旨在发现和描述目标牙周病原体在伊朗的病人。平均隔离率答:actinomycetemcomitans47.45%和29.5%的混合感染p . gingivalis和p .媒介物。阿梅尔et al .,显示在一个人口232人患有牙周炎,7.3%答:actinomycetemcomitans,4.2%的p . gingivalis,0.8%的放线菌israelii和1%的放线菌naeslundii远小于数据发现在这项研究中。基于种族差异和抽样的类型卫生、隔离级别将具有深远的意义。

确定细菌的研究概要sub-gingival组织的慢性牙周炎患者在智利,哥伦比亚和西班牙,Herrera等人发现,在37个病人正在研究在智利,19.4%答:actinomycetemcomitans,83.8%的p . gingivalis和19.4%p .媒介物。在41哥伦比亚的患者中,17.1%答:actinomycetemcomitans,65.9%的p . gingivalis和72.5%p .媒介物。41个西班牙的病人,有16.7%答:actinomycetemcomitans,77.8%的p . gingivalis和97.2%p .媒介物(14]。

在我们的研究中答:actinomycetemcomitans率最高的隔离在两个文化和分子方法其次是p . gingivalis和p .媒介物。我们的数据对应的数据在一项研究中发现,71%的细菌检测到多重PCR在204人口的科威特科目(120名女性和120名男性)答:actinomycetemcomitans(15),而Esterla等人发现p . gingivalis较高的隔离了多重PCR方法从22患者牙周16]。另外,坦纳等人进行了分子研究使用多重PCR分离细菌从221年齿龈和舌头牙周炎患者,发现p . gingivalis率最高的隔离临床样本。Egwariet [17]下人口162人的调查显示,在尼日利亚,18.1% P。gingivalis, 9.6%p .媒介物和6.4%答:actinomycetemcomitans(18]。

在这项研究中,观察没有明显的统计学差异之间的男性和女性受试者的恢复牙周病原体从sub-gingival样品和分子和文化之间,并未观察到显著统计学差异的方法。但是,很明显,分子技术更省时、准确。在一项研究中比较牙周炎患者的细菌培养和分子方法D 'Ercole等人发现,分子生物学方法的敏感性是双多达529年传统文化技术学科(19]。Daniluk等人在研究中比较好氧细菌和厌氧细菌的检测在成人牙周炎患者发现,厌氧细菌好氧细菌的比例是3比120.]。

结论

这是第一次报告的多重PCR检测牙周病原体的伊朗。虽然黄金标准方法检测临床样本中的细菌仍然是培养法,分子技术是高度认为是一种省时省力的方法检测细菌。

确认

作者要感谢德黑兰大学医学科学的学术支持。

引用

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