荧光法测定高分子纳米胶囊悬浮液中准辛的发展与验证

摘要

开发并验证了一种简单、快速、灵敏的荧光测定方法，以乙腈作为溶剂，定量聚合物纳米胶囊悬浮液和非聚合物悬浮液中的准硫。激发波长为397 nm，发射波长为465 nm。在0.05 ~ 0.25 μg/mL范围内呈线性关系，相关系数为0.9892。检测限为2.4 μg/mL，定量限为0.8 μg/mL。验证结果表明，所开发的方法具有特异性、线性性、准确性和精密度。该方法已成功应用于脂质和高分子纳米胶囊悬浮液配方开发早期姜黄素含量的评价。

关键字

苦木科植物;荧光的方法;聚合物nanocapsules;悬架

简介

阿玛拉，也被称为阿玛戈，苦灰，苦木，或hombre grande [1[西班牙语，大个子的意思][2是准属的一个物种，一些植物学家认为它是该属的唯一物种。该属由卡尔林奈命名，他以第一个描述它的植物学家命名:苏里南自由人graman quassi。Q.阿玛拉被用作杀虫剂、传统医药和食品工业的添加剂(图1而且2）.

一种小的、多茎的、生长缓慢的树，有不规则生长的细枝状树枝[4］．它是一种灌木，也很少是小树，高度可达6米[3.，4，7，6］．羽状花序，有3-5个小叶，脉深，叶片深绿色，长15-25厘米，叶轴宽翅，脉红。叶轴有翅。圆锥花序顶生红分枝总状花序，长10-30厘米，开2.5-3.5厘米长的窄而鲜艳的深红色花，装饰在每个小枝的尖端[4，3.，6］．花由5个披针形花瓣组成，它们大部分闭合在一起，形成一个锋利的圆柱体[3.］．花的圆锥花序长15-25厘米，每朵花长2.5-3.5厘米，外面是鲜红色，里面是白色。在花期，它们一般开放两天，每个花序同时开放四朵花。这些花很脆弱，有时轻轻一碰就会从花轴上掉下来。8］．果实:5个小椭圆形，肉质，紫黑色核果，长0.8-1.5厘米，取代花，成熟后变红[4］．每个果实都含有一颗小苗[3.］．Q. amara的所有部分都含有苦的Quassimarin。

这种树主要由蜂鸟授粉，但也能自交[4，8］．除了蜂鸟外，其他鸟类和Apidea家族的三角鸟也会授粉[8］．

材料与方法

化学品和试剂

准树皮粉，HPMC，月桂基硫酸钠，椰子油，氯化钠，乙腈。

胶体悬浮液的制备

Nanocapsule中止:采用相倒置法制备脂质纳米胶囊悬浮液。将含有7 ml蒸馏水、0.06 g NaCl和2 g表面活性剂的水相加入到含有1.40 g椰子油和5 mg拟香皮粉的油相中，两者都在磁搅拌下加热到90℃。在60ºC到95ºC之间交替进行三个温度循环以实现反演过程。在最后一个冷却期间，用25.0 mL冷水(约0ºC)快速稀释悬浮液，并连续搅拌30分钟。

高分子纳米胶囊悬浮液:采用溶剂置换后的界面沉积工艺制备了高分子纳米胶囊悬浮液。将月桂醇硫酸钠40 mg、椰子油0.25 ml、准杉皮粉2.5 mg溶解于2 ml丙酮中。将得到的溶液与10毫升丙酮:乙醇(3:2,v/v)混合物混合，最终体积调整为8毫升。将该有机相倒入含有0.375% (w/v)月基硫酸钠的水相(26.0 ml)中，在磁搅拌下保持。然后在减压下蒸发去除有机溶剂，将胶体悬浮液的最终体积调整为10.0 ml。聚合物纳米胶囊悬浮液用滤纸过滤，在乙腈中溶解后在荧光系统中分析。

荧光的方法:在收缩荧光光谱仪上记录了准树皮粉的荧光光谱。样品在标准的1cm石英槽中连续搅拌。样品在397 nm处激发，在440 ~ 600 nm处记录发射光谱。在λ处测量相对荧光强度_emi= 465海里。

原料和工作方案的准备:将10 mg准树皮粉精确溶解于100.0 mL乙腈中制备原液。在乙腈中制得100.0 μg/mL的工作标准溶液。然后根据需要稀释该溶液，制备不同标准溶液:0.05、0.1、0.15、0.2和0.25 μg/mL的乙腈溶液。

方法验证

评价的验证参数为特异性、线性和范围、准确度、精密度、定量限(LOQ)和检测限(LOD)。性能特征基于国际协调会议(2005年)和美国药典(2007年)的药品监管指南。

(一)特异性:通过分析空载纳米胶囊悬浮液来评估荧光法的特异性，以验证纳米胶囊悬浮液配方中使用的辅料是否干扰姜黄素的定量。样品在荧光系统中进行三次重复分析。

(b)线性度和范围:在荧光系统中分析6种浓度为0.05 ~ 0.25 μg/mL的标准溶液，每个重复3次。通过绘制标准溶液的荧光强度与理论标准浓度的关系，得到了校准图。采用线性最小二乘回归分析(图3）.

(c)准确性:通过将未加载的纳米胶囊悬浮液与已知浓度的准西药标准溶液以3个不同水平(低、中、高浓度)分别对应于准西药的最终浓度0.05、0.15和0.25 μg/mL来考察准确性。分析共进行了三次。荧光分析后，用以下公式估算回收率(R):

式中R为回收率，Csnc为加标纳米胶囊悬浮液中的准辛浓度，Cnc为空载纳米胶囊悬浮液中的准辛浓度，Css为标准溶液中的准辛浓度。

(d)精度:方法的精度通过测量重复性(日内精密度)和中间精密度(日间精密度)来确定，均以相对标准偏差(RSD)表示。通过对不同浓度(0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 μg/mL)的准辛标准溶液进行精密度评价。在相同的实验条件下，在同一天测量每种浓度的3个样品，以评估重复性。中间精密度的评价是在3天内对每个标准溶液进行测定。RSD的计算方法为(表1）.

表1。显示盘中和日间精度值的表。

(e)定量限度:LOQ值直接从校准图中计算出来。它被定义为标准曲线中能够以适当的精度和准确度测量的最低浓度。LOQ可以表示为:

其中δ为回归线y截距的标准差(SD)， S为校准图的斜率。

(f)检测限(LOD):LOD值直接从校准图中计算出来。它被定义为标准曲线中可以检测到的最低浓度，但不一定可以量化为准确的值。LOD可以表示为:

其中δ为回归线y截距的标准差(SD)， S为校准图的斜率。

纳米胶囊中拟辛负载量的测定

采用荧光分光光度法测定纳米胶囊悬浮液中拟西药的浓度，估算药物含量。经悬浮液过滤后得到的上清液中药物浓度为24.8 mL。

结果与讨论

拟辛的典型发射光谱显示，在450-600 nm波长区域有一个强烈的发射带，在465 nm处表现出最大荧光。为了证明该方法的特异性，我们对含有相同浓度赋形剂的脂质和高分子纳米胶囊悬浮液进行了分析。该方法是特异性的，因为在所用的荧光条件下，在465 nm处没有检测到辅料的干扰。

拟辛脂类与高分子纳米胶囊在0.05 ~ 0.25 μg/mL范围内呈线性关系，相关系数为0.9892。平均校正图(n=3)的回归方程为:y=11.943x+1.095

斜率和截距分别为11.943和1.095。该方法的LOQ为2.4 μg/mL, LOD为0.8 μg/mL，灵敏度高，可用于药物包埋评价。

文中提到了所开发方法的精度表1．结果表明:日、日间RSD值均小于5.0%;荧光强度表明满意的日内和日间变化。

使用三种开发的纳米胶囊悬浮液评估方法的准确性:使用三种不同水平的十二烷基硫酸钠表面活性剂。每个关卡测试3次。文中给出的结果表明，该方法具有可接受的精度(表2）.

表2。表显示恢复。

悬浮液过滤得到的上清液中药物浓度低于该方法的LOQ，说明只有极低浓度(<0.10 μg/mL)未被包封。由于拟辛的总浓度范围为107.04 ~ 498.49 μg/mL，因此可以确定所有配方的包封效率值均高于99%。拟辛的高包封率可能与该疏水药物对纳米胶囊油核具有较高的亲和力有关。副肽在胶状悬浮液中完全回收，与最初添加到配方中的药物量无关。纳米胶囊悬浮液中药物含量值的差异仅与制剂最终体积的差异有关。结果表明，荧光法可成功地应用于普通和高分子纳米胶囊悬浮液(图4）.

结论

所建立的荧光测定方法具有特异性、线性性、准确性、精密度和灵敏度。该方法成功地用于定量聚合物纳米胶囊悬浮液中的准半胱氨酸，并可用于包封效率和药物含量的测定，不仅可用于配方研究，而且可作为进一步进行纳米胶囊悬浮液化学稳定性评估和临床前研究的先决条件。

鸣谢

我们感谢CDTL, Chalapathi药物科学研究所的帮助，没有他们的帮助，这项工作就不可能完成。

参考文献

1. Amargo - Quassia amara。热带植物数据库，2013。
2. 本月之树:大男人树。Titi保护联盟，2017。
3. 莫顿摩根富林明。中美洲药用植物地图集:巴哈马到尤卡坦。查尔斯·c·托马斯;1981.
4. Barwick M，等。热带和亚热带乔木。木材出版社;2004.
5. 保罗JA，等。不同光照条件下准杉树直径和总高度:对农业生态系统管理的启示。农林系统，2020;94(3): 761 - 778。
6. Gilbert B. Estado da Arte / State of Art, Quassia amaraL。(苦木科)。2010.
7. Próspero R, Ming LC, Rojas RD, Ocampo RA。Avaliação do incremento em volume de madeira de Quassia amara L.-Simaroubaceae, em culo agroecológico no trópico úmido da哥斯达黎加。植物学报。2009;11(4):450-454。
8. 鲁比克DW，霍尔布鲁克NM，帕拉GV。花蜜强盗在热带乔木准树繁殖中的作用。环境科学,1985;66(2): 161 - 167。