研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
菜单e-ISSN: 2320 - 0812
e-ISSN: 2320 - 0812
克里希纳像N1*Gowramma B2玛杜丽L1Gouthami B1Sindhur唠叨N1和Meyyanathan SN1
1药品分析、js药学院,(组成js学院大学,迈索尔),Udhagamandalam Tamilnadu - 643001。印度。
2药物化学、js药学院,(组成js学院大学,迈索尔),Udhagamandalam Tamilnadu - 643001。印度。
收到日期:15/12/2013;接受日期:22/12/2013;发表日期:26/11/2013
访问更多的相关文章研究和评论:药物分析杂雷竞技苹果下载志》上
一个具体、准确、稳定指示准确和敏感RP高效液相色谱的测定方法和验证盐酸缬(RS)大部分药物和药物剂型在它的降解产物。一个权力平等主义的RP HPLC方法开发Hibar C18 (250 X 4.6毫米身份证。,5μ) and methanol: 25mM Ammonium acetate (pH 3.0, adjusted with acetic acid) in the ratio of 10:90 % v/v as流动相。的流量维持在1毫升最低为1和检测进行了使用PDA探测器(254海里)。降解的药物受到压力条件包括水解决方案水解,氧化和光解。退化进行了24小时60°C。药物被发现广泛降解碱性水解和氧化与过氧化氢。观察轻度退化中立但药物稳定光解。发达的方法验证线性,精度、准确性、坚固性和特异性。
盐酸缬,战¢高效液相色谱,压力降低,方法验证。
盐酸缬是化学2 - [(2-amino-6-oxo-6, 9-dihydro-3H-purin-9-yl)甲氧基]3-hydroxypropyl 2-amino-3-methylbutanoate (2 s)。这是一个L-valyl酯(前药)(图1存在的更昔洛韦)作为两个非对映体的混合物。后口服,两个非对映体是由肠道和肝酯酶迅速转化为更昔洛韦,这已经证明了抗病毒活动对巨细胞病毒感染。缬是可用的平板电脑剂型在市场上。药物在USP NF(官方1]。先前研究缬的反应证明了药物水溶液中容易降解水溶液与不同的pH值(2]。即文学的调查显示,一些分析方法紫外分光光度法(3)和权力平等主义的高效液相色谱法(4]报道了测定缬散装和制药剂型。三个LC / MS / MS方法也报道缬及其活性代谢物的测定更昔洛韦在人类和大鼠血浆5,6,7]。
图1:盐酸缬的化学结构
stability-indicating试验方法(暹罗)是用于稳定性样品的分析制药行业。随着国际协调会议(我)指导方针,建立stability-indicating试验方法的要求(暹罗)变得更加清楚地规定。准则明确要求进行强制分解研究在各种条件下,pH值、光、氧化、干热等和药物的降解产物的分离。该方法将允许个人降解产物的分析。我指导Q1A (R2)强调那些容易的特性变化的测试期间存储和可能影响质量、安全性和有效性必须通过验证稳定性指示测试方法。按照Q1 (R2)信息的稳定物质的药物是不可或缺的一部分系统的稳定性评价方法(8]。压力测试的药物物质可以帮助识别可能的降解产物,它可以反过来帮助建立分子的降解途径和内在稳定并验证所使用的稳定性指示分析方法的力量。压力测试的性质取决于个人药物物质和药物产品涉及的类型。
我们已经开发出一种快速、简单、健壮和经济权力平等主义的RP HPLC法分离峰由于降解产物的主要山峰缬(RS)。常规分析的方法可能是有用的质量控制,因为低成本和特异性。这种方法也可以用于评估的稳定性缬(RS)制剂。
化工、试剂和解决方案
参考标准的盐酸缬是收到的礼物样本Reddy博士的实验室、海得拉巴,印度。高效液相色谱级甲醇、醋酸、醋酸铵和其他化学品和溶剂从Qualigen采购精细化学品(印度孟买)。高质量的纯水制备微孔净化系统。
色谱分离使用梯度和定量测定进行超快速液相色谱(UFLC)包含一个日本岛津公司梯度泵(LC-20广告溶剂输送系统),PDA检测器(SPD-M20A,日本岛津公司),7120年rheodyne 20μl循环。随着固定相,Hibar Purospher明星RP-18列5μ粒子大小、250 X 4.6毫米(默克公司,达姆施塔特,德国)使用。十册的流动相由甲醇和醋酸铵90余册,25更易与L1使用醋酸(pH值调整到3.0)。流动相的流速为1.0毫升min1。PDA检测器的波长被设定为254海里。
方法验证
RP HPLC方法验证根据我指南(9]。
选择性
选择性检查了非退化和退化的样本:解决盐酸缬(RS)压力条件下的水解(酸、碱、中性)60°C,光解(解决方案和固体,暴露在阳光下24小时)和氧化(3 H & 30%2O2)。每个条件下的降解研究样本设计被分成三个独立的烧瓶然后需要卷1 n HCl, 0.01 n氢氧化钠,3 H & 30%2O2分别被添加。每个测定进行了三次。
方法的线性情节得到了18 - 72的浓度范围μg毫升1。
精度
方法的准确性取决于恢复缬的安慰剂。恢复测试是表现在三个层次,即100和140%的名义浓度盐酸缬在降解研究。三个样本准备恢复水平。分析了解决方案和比例恢复校准曲线的计算。
精度
试验确定的精度与可重复性(盘中)和中间精密度(国米)。评估方法的可重复性,6个样品在100%浓度水平确定为盐酸缬在同一天。中间精密度研究通过对比分析上执行三个不同的日子。
检测极限(LOD)和量化的限制(定量限)
LOD和基于信噪比参数确定定量限。检出限是最小的分析物的浓度,给出了可衡量的反应(3)的信号噪声比和量化限制是最小的分析物的浓度,可以可靠地量化和可接受的准确度和精密度。
鲁棒性
程序的健壮性评估后修改以下参数:流动相的组成(甲醇含量在0.1 - 1.0%);流动相流速(流量范围0.9 - 1.1毫升的分钟1);pH值的缓冲区(pH值在2.8 - 3.2)和浓度的缓冲区(缓冲区浓度范围的20 -30更易与L1)。每个参数变化对保留时间的影响,分辨率和峰值形状进行评估。
盐酸缬的强制降解研究
降低水的解决方案
盐酸缬的退化在盐酸水溶液进行了研究(0.1摩尔L1在室温下& 1摩尔L124小时60C),在氢氧化钠(0.1摩尔L1在室温下& 0.01摩尔L124小时60C)和水(室温& 24小时60C)。退化是由溶解2.5毫克的药物在密封的玻璃瓶25.0毫升的解决方案。在指定的时间,样品反应的解决方案(1.0毫升)立刻降温冰和水的混合物和中和。样品由发达RP HPLC法进行分析。
氧化降解
2.5毫克盐酸缬更准确的重量在25.0毫升,溶解在稀释剂(水)和体积是由3%和30% v / H2O2。然后解决方案是在室温下进行氧化降解,24小时60C(3%和30%)。在指定的时间,样品反应的解决方案(1.0毫升)立刻与冰和水的混合物冷却。样品由发达RP HPLC法进行分析。
光解
10毫克样品的重petridish。为了实现退化,样品在固体和溶液状态为24小时暴露在阳光下。样品被溶解在甲醇和受到适当的进行分析。
色谱条件的优化
的优化方法进行了使用不同浓度的甲醇同时保持pH值和水相的物质的量浓度不变。25的溶剂组合更易与L1醋酸铵(pH值3.0,调整与醋酸):甲醇(挺v / v) Hibar Purospher明星RP-18列(5μ粒子大小、250 X 4.6毫米)作为固定相给满意的R和S异构体分离盐酸缬及其降解产物在不同压力条件下形成的。检测进行了使用PDA探测器在254海里。流动相流速为1.0毫升分钟1。盐酸缬R和S的典型保留时间是10.1分钟,11.4分,分别为(图2)。空白样品纯度的R和S峰值分别为99.86和99.34%。
图2:盐酸缬的典型色谱标准的药物
方法验证
方法验证参数如特异性、线性、精密度、准确度和鲁棒性。
光电二极管阵列检测被用作证据的特异性方法和评估盐酸缬的同质性R和S峰纯度值被超过99.00%在254 nm R和S异构体,证明了山峰的降解没有干扰的主要峰值。
线性的方法检测40%到160%的目标水平测定浓度(18岁,27岁,36岁,45岁,54岁,63年和72年μg毫升1)。线性的解决方案被注入了一式三份。校准的情节是线性浓度范围的18 - 72μg毫升1。校准曲线方程所描述的是Y = mX + c;即:Y = x + 250538 38440。校准曲线建立了六种不同天的斜率和截距的两周内确定可变性。interday变化的斜率和截距没有显著。盘中,interday精度值计算为一个浓度在100%的水平(表1)。RSD值< 1%,证明该方法精确。
表1:盘中和Interday精度的研究
复苏在三层,100和140%的标签要求六次。每个浓度,取得了良好的复苏确认方法是准确的(表2)。
表2:的准确性和恢复研究盐酸缬(n = 3)
应用色谱条件下盐酸缬的LOD和定量限50毫升和150 ng1分别为(表3)。
表3:系统适用性参数
程序的健壮性评价通过改变以下参数:流动相组成,流量、pH值和缓冲的浓度。每个参数的变化,对保留时间的影响,分辨率和峰值形状进行评估。没有明显的检测分辨率和峰形状的变化。
强制降解实验的结果
根据1998年稳定的方针草案表示方法被定义为“验证定量分析方法可以检测出随时间变化的化学,物理,或微生物药物物质和药物产品的属性、和特定活性成分的内容,降解产物和感兴趣的其他组件可以准确测量不干涉”。[8]年代辛格和问题提出,在稳定研究,降解的20 - 80%应该实现建立稳定指示性质的测定。[10]发现药物盐酸缬接受极端退化基本的水解和氧化。观察,95 - 100%的盐酸缬被发现在基本的水解和氧化降解30% H2O2。在酸性条件下,观察到药物被发现在室温下显示4%的退化为0.1 M盐酸。在辛格及问题[10],达到20%降解药物与1 M盐酸回流24小时60C。大约25%的退化观察与另外两个峰的保留时间分别为2.7和6.0分钟。盐酸缬被发现是非常容易受到基本的水解。几乎完全退化(99.6%)观察药物孵化时为0.1 M氢氧化钠在室温下2小时。最小化基本水解的影响,药物与0.01 m氢氧化钠回流24小时60C。近50%降解后观察2小时,12小时后观察完全退化。该药物是中性水解更稳定。当水溶液中受到压力条件即回流24小时60C,只有14%的退化观察。 In oxidative degradation, it was observed that the drug was found to show 5% degradation at room temperature with 3% hydrogen peroxide and 10% degradation when refluxed at 60ÃÂ C for 24 hrs. Further, the concentration of hydrogen peroxide was increased to 30% and refluxed for 24 hrs. Thus, 100 % degradation was observed with two additional peaks at 2.7 and 6.0 min. Valganciclovir hydrochloride was not susceptible to photolysis as the degradation was less than 10% in solution as well as in solid state. Chromatograms of the solutions obtained after degradation under acidic, basic, neutral, oxidation and photolysis are shown in图3 - 7。迫使退化在各种条件下的结果进行了总结表4和5。额外峰的保留时间为2.7和6.0分钟被发现在所有强调条件表明两种降解的形成。
图3:酸降解的典型色谱样品1 m盐酸回流60°C下24小时
图4:基地退化的典型色谱样品0.01 m氢氧化钠回流60°C下24小时
图5:中性退化的典型色谱样品与水回流60°C下24小时
图6:典型的色谱与3%过氧化氢氧化降解样品的回流24小时60°C
图7:照片退化的典型色谱样品溶液中的形式
表4:在室温下退化研究的结果
表5:退化研究的结果为24小时60C
盐酸缬化学是一个氨酰基酯。氨基的质子化作用可以大大提高水解率盐酸缬更昔洛韦在生理条件下。药物的降解可能对应于更昔洛韦和缬氨酸。峰的保留时间2.7分钟被证实缬氨酸,缬氨酸标准筛选了在优化的实验条件下的保留时间相同。
此外发达也申请了高效液相色谱法(HPLC)估计的盐酸缬制药配方。
盐酸缬的估计存在的降解产物,RP HPLC方法。为选定的父母和相关物质形成不同洗脱顺序观察,证明不同降解产物的结构。这种药物被发现更容易在基本条件下水解和氧化。发达的方法也是各种验证验证参数。该方法还提供了更好的解决盐酸缬R和S异构体之间。可能得出的结论是,发达方法的选择性测定盐酸缬的各种降解产物。此外发达RP HPLC方法被发现更精确,可靠、敏感、准确的。该方法可用于常规分析质量控制因为运行时间短、制造成本低。
