国际科学、工程和技术创新研究杂志
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| Mithlesh拉其普特人1，希娜·哈米德2Manjeet Aggarwal说3.， Rakesh Kumar Khandal4 |
| 有关文章载于Pubmed，谷歌学者 |
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建立了一种简便、灵敏、准确的高效液相色谱-紫外分光光度法，同时测定复方片剂中乙托度酸和扑热息痛的降解产物。采用phenomenex C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm, i.d粒径为5 m)，以ACN:H2O:H3PO4为流动相，与三乙胺在500:500:0.25 (v/v/v) pH 3.0的条件下进行色谱分离。流动相在等容条件下流速为1 ml / min，进样量为10μl，以峰面积测定为基础，在274 nm处采用紫外检测器对依托度酸和扑热息痛进行定量。从系统适用性、线性度、准确度、精密度(日间和日间)、特异性、鲁棒性、检出限和定量限等方面对所提方法的可靠性和性能进行了统计验证。该方法在2 ~ 80μg/ml和2.5 ~ 100μg/ml范围内均呈线性关系，与依托度酸和扑热息痛的相关系数分别为0.999和0.999。所提出的方法被证明是选择性的，适用于在不同强迫应力条件下(酸性、碱性、氧化、热和光解)形成的任何降解产物的存在下对炔托醇和扑热息痛进行稳定性研究。所提出的验证方法成功地应用于分析乙炔多酸和扑热息痛的联合剂型，因此可常规用于同时测定乙炔多酸和扑热息痛的联合剂型。
关键字 |
| Etodolac，扑热息痛，UV-HPLC，稳定性指示法。 |
介绍 |
| 乙度酸的化学性质是(R, S) -2-(1,8 -二乙基- 4,9 -二氢- 3h -吡喃[3,4 -b]吲哚-1-基)乙酸。其分子量为C17H21NO3，分子式为287.35g/mol[1]。依托度乐通过降低前列腺素的水平起作用，前列腺素是引起炎症引起的疼痛、发烧和压痛的原因。依托度酸可以阻断制造前列腺素的酶(环加氧酶)，从而降低前列腺素的浓度。因此，炎症、疼痛和发烧都减轻了。各种方法已报道用于测定依托度酸药物配方和生物样品。报道方法分别采用分光光度法[4][5]HPLC - UV法检测[6]，HPLC -质谱法检测[7]法测定依托度酸。 |
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材料与方法 |
| 化学试剂: |
| 乙醇酸(Make:Fluka)，扑热息痛(Make:Fluka)，含有400毫克乙醇酸和500毫克扑热息痛的片剂(Make:orthokind)，乙腈(hplc级，Make:Rankem)，水(hplc级，Make:Rankem)，甲醇(hplc级，Make:Spectrochem)，正磷酸(ar级，Make:Rankem)，盐酸(ar级，Make:Rankem)，氢氧化钠颗粒(ar级，Make:Rankem)和过氧化氢溶液(ar级，Make:Rankem)。 |
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| 方法: |
| (A)流动相制备:乙腈、水、正磷酸按500:500:0.25 (v/v/v)的比例混合制备流动相。使用三乙胺将流动相pH设置为3.0。流动相通过0.45μm尼龙膜过滤器过滤。 |
| (B)标准溶液配制: |
| 溶液a: 100ml容量瓶中加入40.7 mg乙醇酸，流动相为20ml，制得400 μg/ml的乙醇酸标准原液。摇10分钟，与流动相成体积(终浓度为400.7 μg/ml)。 |
| 溶液-B:在100 ml容积瓶中取50.7 mg Paracetamol, 20 ml流动相，配制500 μg/ml的Paracetamol原液。摇10分钟，使溶液与流动相体积(最终浓度为500.7 μg/ml)。 |
| 溶液-C:将溶液A和溶液B各10ml移液于100ml容量瓶中，使用流动相使其达到相应体积。由此得到乙醇多酸和扑热息痛的混合标准工作液，其浓度分别为40μg/ml和50 μg/ml。取10 μL标准溶液C注入高效液相色谱。 |
| (三)样本分析: |
| 称取20片样品，计算片的平均重量，然后细磨成粉。称出相当于40毫克乙托度酸和50毫克扑热息痛的精确重量的粉末，并转移到100毫升的量瓶中，其中添加20毫升稀释剂。将该溶液摇匀并超声15分钟，用稀释剂使其体积达到100毫升(样品原液)。将10ml的该溶液精确滴入100ml容量瓶中，用流动相稀释至体积。乙醇酸和扑热息痛的浓度分别为40 μg/ml，扑热息痛的浓度为50 μg/ml。 |
| (D)试样在以下条件下进行强制降解研究: |
| a)酸性条件:为了研究酸性降解的影响，将5ml样品原液放入50ml空容量瓶中，并将5ml 0.1M HCl溶液放入该容量瓶中，在600C的水浴中加热约6小时。将该溶液放置至环境温度，加入5 ml 0.1 M NaOH中和至pH值7，再用稀释剂稀释至100 ml。最终检测液的浓度分别为依托度酸40 μg/ml和扑热息痛50 μg/ml。 |
| b)碱性条件:为了研究碱性降解的影响，将5ml样品原液放入50ml空容量瓶中，将5ml 0.1M NaOH溶液放入该容量瓶中，在600C的水浴中加热约6小时。将该溶液放置至环境温度，加入5 ml 0.1 M HCL中和至pH值7，再用稀释剂稀释至100 ml。所得测试液的最终浓度分别为依托度酸40 μg/ml和扑热息痛50 μg/ml |
| c)氧化条件::将5ml样品原液与10%过氧化氢在600℃下回流1小时，进行氧化降解研究。室温冷却后，用稀释剂进一步稀释至50 ml，最终溶液浓度分别为依托度酸40 μg/ml和扑热息痛50 μg/ml。 |
| d)热条件:将完整片剂配方在80℃下暴露72小时，进行热降解。然后将片剂粉碎，以获得细粉末，并将重量相当于40 mg乙醇酸和50 mg扑热息痛放入100 ml的容量瓶中。在烧瓶中加入10 ml稀释剂，超声15分钟后，用稀释剂进一步稀释，最终浓度分别为400 μg/ml和500 μg/ml乙醇多酸和扑热息痛。将样品进一步稀释，得到终浓度分别为40 μg/ml和50 μg/ml的依托度酸和扑热息痛。 |
| e)光解条件:将完整片剂配方暴露在紫外光下48小时进行光解降解，将片剂粉碎得到细粉。然后称量相当于40 mg乙醇酸的重量，并放入100 ml的容量瓶中。在烧瓶中加入10 ml稀释液，超声15分钟后再用稀释液进一步稀释，最终浓度分别为400 μg/ml和500 μg/ml乙托度酸和扑热息痛。将样品进一步稀释，得到终浓度分别为40 μg/ml和50 μg/ml的依托度酸和扑热息痛。样品溶液和降解样品溶液用0.45 mm膜过滤器经注射器过滤。取本样液10μL注入高效液相色谱。根据标准色谱峰面积比和试验色谱峰面积计算 |
计算 |
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| AW =片剂平均重量(mg) |
| LC =标签索赔(毫克) |
| P =扑热息痛参考标准品效价(%) |
方法验证 |
| 特异性和选择性:通过注入空白溶液和样品溶液来检测方法的特异性，空白对分析物峰的保留时间无干扰。为了证明该方法的稳定性，还进行了力退化研究。 |
| 线性关系:乙醇酸和扑热息痛在2 ~ 80 μg/ml和2.5 ~ 100 μg/ml浓度范围内呈线性关系。相关系数为0.999。结果如表2-3所示。 |
| 精密度:计算了方法精密度和中间进动。结果在限制范围内。方法精密度和中间精密度结果如表4-5所示。 |
| 准确度:通过加入已知量的依托度酸和扑热息痛，分别对应于分析物浓度的50%、100%和200%三个浓度水平来确定方法的准确度。准确度由添加的分析物量和发现的分析物量计算。这给出了通过测定方法回收的分析物的百分比。结果表明，该方法具有较高的精度。精度结果如表6- 7所示。 |
| 方法的鲁棒性:随流速(±0.1mL/min)和流动相组成变化。检测结果%无变化。稳健性结果如表8所示。 |
| LOD和LOQ:方法检出限分别为0.2 μg/ml和0.25 μg/ml，定量限为0.4 μg/ml，对乙酰氨基酚0.5 μg/ml。 |
实验结果 |
| 本工作在紫外检测器的LC法的基础上，考虑到乙托度酸和扑热息痛的不同化学性质，选择了分析条件。采用不同流动相的原标准制剂进行了开发试验。试验3是验证研究的最后流动阶段。 |
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结论 |
| 反相高效液相色谱法已经开发并验证了同时定量乙醇酸和扑热息痛片剂配方。从不同浓度下的结果验证了该方法的准确性。从方法精度和现场研究也证实了该方法的可靠性和精密度。各种验证研究结果表明，所建立的反相高效液相色谱法简便、准确、精密度高、选择性强、可靠性好，可同时测定依托度酸和扑热息痛联合剂型的含量。研究表明，该方法不仅可以分离对乙酰氨基酚和依托度酸，而且在五种不同的力降解条件下，其主要降解杂质均达到峰值。因此，该方法可用于乙托度酸和扑热息痛复方制剂的常规分析、质量控制检查和稳定性检查 |
参考文献 |
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