酒石酸雷沙吉兰片剂的研制与液相色谱法验证。

摘要

简单、准确、敏感液相色谱法建立了测定酒石酸雷沙吉林(RAST)原料药含量的方法剂型．色谱柱为Inertsil ODS (250mm X 4.6mm) C18, 5 μm色谱柱。流动相为甲醇:乙腈:水(50:30:20 v/v)，三乙胺(TEA)调节pH: 3.2，流速1ml /min环境温度．用PDA检测器在206nm处对分析物进行监测。该方法经特异性、精密度、线性度和准确度验证。RAST的平均加样回收率为89.0 ~ 93.0%，目前的工作重点是建立简便、准确、精密度高的分析方法rp -用于RAST的配方。

关键字

RasagilineTartrate (RAST)， RP-HPLC, PDA检测器，估计，回收和片剂

简介

酒石酸雷沙吉林(RAST)是一种口服药物，用于治疗帕金森病。化学上称为(2S, 3S)- 2,3 -二羟基丁二酸;(1R)- n-丙-2-酰基- 2,3 -二氢- 1h -茚-1-胺。1，2，它是多巴胺和左旋多巴代谢途径中的一种主要酶。一种氧化酶，可以分解5 -羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺、酪胺和类似的神经递质化学物质，神经用来相互交流的化学物质。

通过对文献的调查，揭示了不同的检测方法和方法薄层色谱建立了中药中RAST药物的含量测定方法药品剂型．紫外分光光度法和可见光分光光度法很少[3.]由显色剂[4]以及在酸性介质中形成有色离子对络合物[5]和几种LC-MS/MS测定人血浆中药物的方法[6，7]及一些高效液相色谱法[8-13在开始调查之前，已经报告了对药物的测定。

由作者Youdimet al [14]和佩斯金等人[15在药学上是可以接受的。Stephen等人的专利工作表明，通过在雷沙吉兰碱中加入相关酸，制备和表征了雷沙吉兰衍生物，即琥珀酸雷沙吉兰、半酒石酸雷沙吉兰、盐酸雷沙吉兰和苯磺酸雷沙吉兰。从文献的亮点，药物的使用已经变得非常广泛。然而，令人惊讶的是，到目前为止，甚至没有一种方法可以用于估计、发展和验证目前所进行的调查。本项目试图通过开发这种方法来弥补这一差距。本文主要研究了一种简便、准确、灵敏的反相高效液相色谱法。作者为满足这一需求做出了努力，并成功地开发了该方法。在这些程序的开发和验证中遵循了ICH规定的协议和指南。

材料与方法

材料

作为工作标准的纯RAST是由印度孟买的梯瓦制药公司赠送的。乙腈(Qualigens Fine Chemicals Pvt. Ltd)，甲醇(S.D Fine- chem Ltd)和水高效液相色谱等级(Millipore Corporation - milliq)被购买和使用。所有使用的化学品和试剂均为分析级，并从印度默克公司购买。含有2毫克RAST的Azilect片剂购自印度孟买的Teva制药工业有限公司。

仪表

该色谱系统由Waters分离机2996、PDA检测模块和2693泵组成，配备自动进样器，进样量为20 μL。ODS RP-C18柱(250 x 4.6 mm;粒径为5 μm)。HPLC系统采用Empower 2软件进行数据解释。

色谱条件

高效液相色谱法(高效液相色谱法以甲醇、乙腈、水为流动相，以60:20:30 v/v的比例，1.0 mL/min的流速混合，运行6 min，柱温保持在30℃，等容积运行流动相采用超声波浴超声除气，采用配有0.45 μm高真空过滤器的Millipore真空过滤系统进行过滤。

标准溶液的制备

将10 mg按(50:20:30 v/v)的比例溶解于10 ml含(甲醇:乙腈:水)的流动相中，并放入10 ml容量瓶中超声20分钟，得到1000ppm，制备标准原液。用a级球泡移液管将该标准溶液的等份转移到10 mL容积片中，使溶液与流动相体积相等，浓度为20 ~ 140 μg/mL。

样品溶液的制备

称量20片{(Azilect®片剂- RAST)} 100 mg/mL, Teva Pharmaceutical Industries Pvt. Ltd，孟买，印度)，然后粉状。将粉状片剂样品(相当于含有100 mg/ml RAST活性成分的混合物)精确称量，并在100 ml装有50 ml流动相的容量瓶中取出，超声15分钟，使溶液与流动相体积相等，并通过0.45 μ膜过滤。从10ml容量瓶中取1ml上述样品原液，用稀释剂调制至10ml，得到RAST的浓度为每100 μg/ ml。

方法验证

该方法根据ICH指南进行验证。评估的参数包括线性度、准确度、检测限(LOD)、定量限(LOQ)、精密度、再现性、稳健性和系统适用性。

线性

将标准RAST原液分等份放入不同的10 ml容瓶中，用流动相稀释至标记处，制备最终浓度在20 ~ 140 μg/ ml范围内的RAST注入色谱系统，测量峰面积，建立校正曲线(浓度v/s峰面积)。

检测限和定量限

检测限度(LOD)和定量限(LOQ)根据ICH指南计算。

精度

为了确定所提出方法的准确性，采用线性范围内的三种不同浓度的RAST水平(80,100,120%)并用所提出的方法进行分析。在每个水平进行三次测定，并记录得到的结果。准确度用所提方法回收分析物的百分比表示。

精度

该方法的精度由实际测定6个固定量的药物和制剂的峰面积单独确定。通过注射重复率、重复率(检测内)、中间精密度(检测间)和重复性对方法的精密度进行了检验。通过计算RAST标准溶液在同一天内测定的10个测定峰面积的相对标准偏差百分比(%RSD)来研究注射重复性。

系统适用性

为了确定该方法的系统适用性，使用观测读数计算了许多参数，如保留时间、理论板和HETP、尾矿量、%峰面积、LOD、LOQ、分辨率和峰不对称性，并记录了结果。

结果及讨论

建立了反相高效液相色谱法，并对RAST原料药和药物剂型进行了连续验证。根据灵敏度、保留时间、峰形和基线漂移的选择，通过色谱条件的选择对方法进行优化。使用指定的流动相，在流速为1.0 mL/min的条件下，在206nm处得到了典型的色谱图，其保留时间为2.653 min (图:1)．为了保证系统和分析方法的可靠性，进行了系统适用性测试。记录连续6次注入标准溶液的保留时间和峰面积的% RSD，计算RAST。

给出了系统的适宜性参数和线性结果表1．采用峰面积与浓度的关系绘制校准曲线，在20 ~ 140 μg/mL浓度范围内呈线性关系。LOD和LOQ分别为0.001和0.004。所开发的方法获得的平均回收率是准确的，结果显示在表2．

结论

HPLC法测定中药中RAST的研究尚未见报道片剂剂型而且制药配方从文献中，在我们开始调查之前。该方法无需任何初步处理，是一种简单、灵敏、准确、精确、可靠的有效RP-HPLC方法，可用于原料药和制剂中RAST的测定。因此，该方法可用于常规的质量控制分析，几乎不干扰药物配方中常见的添加剂/辅料。

参考文献

1. Tatton WG, Wadia JS, Ju WY, Chalmerse Redman RM, Tatton NA。(-)-二烯基减少神经元凋亡和促进神经元生长通过改变蛋白质合成而不抑制单胺氧化酶。1996年《新交通》;48:45-59。
2. Youdim MBH, Aviva G, John FPM。Rasagiline [N-propargyl-1R (+)- aminindan]，一种有效的线粒体单胺氧化酶抑制剂B. Br J Pharmac. 2001;132:500 - 506。
3. Rama R, Preeti K.紫外分光光度法测定散体和药物配方中甲磺酸雷沙吉林。国际制药科学修订版2010;5: 5 - 7。
4. Devala Rao G, Kathirvel S, Satyanarayana SV。分光光度法测定药物剂型中甲磺酸雷沙吉林的含量。J Pharm Res. 2011;4: 61 - 62。
5. Chennaiah M, Veeraiah T, Charan Singh T, Venkateshwarlu G.提取分光光度法测定药物配方中甲磺酸雷沙吉林。
6. 中国科学，2011;56: 926 - 929。
7. 马军，陈霞，段霞，邓萍，王辉，钟东。hplc -MS/MS法定量测定人血浆中雷沙吉兰的含量及其药代动力学研究。色谱分析B. 2008;873: 203 - 208。
8. 宋敏，王磊，赵华，等。快速灵敏的液相色谱-串联质谱:测定方法的开发、验证和应用于人体药代动力学研究。J色谱仪B，肛门
9. 生物生命科学，2008;875: 515 - 521。
10. Ferna´ndez M, Barcia E, Negro S.生物可降解PLGA微球中Rasagiline Mesylate的反相液相色谱方法的开发和验证。J Pharm Biomed Anal, 2009;49: 1185 - 1191。
11. Sundara Murthy P, Balaji V, Rajasekhara R, Raju I.采用反相高效液相色谱法对甲磺酸雷沙吉林片剂的溶出度进行了验证和稳定性分析。国际制药科学修订版2011;10:不限。
12. Kumar RJ, Jeyabaskaran M, Kumari PM。验证了反相高效液相色谱法(RP -HPLC)对雷沙吉林纯剂型和片剂剂型含量的测定。J Pharm Res. 2011;5: 1376 - 1377。
13. 罗晓明，饶金玲，饶英华。反相高效液相色谱法测定雷沙吉林片剂剂型的方法研究。中国化学。2010;3: 621 - 624。
14. KU, Sriramulu J, UM, YP。反相高效液相色谱法测定药品中雷沙吉林的稳定性。国际科学杂志，2011;1:19-32。
15. Kumar RN, Rao GN, Naidu PY。稳定性指示RP-LC法测定甲磺酸雷沙吉林原料药剂型。Int J App生物制药技术。2010;1: 247 - 259。
16. 尤迪姆MBH，芬伯格JPM，列维R，等。美国专利5,532,415,1996。
17. 刘国强，刘国强，美国专利，1997。