研究和评论:制药学和纳雷竞技苹果下载米技术杂志》上
菜单e-ISSN: 2347 - 7857 p-ISSN: 2347 - 7849
e-ISSN: 2347 - 7857 p-ISSN: 2347 - 7849
Priya Temgire*
中央药物测试实验室、纬向FDA餐馆GMSD化合物,Belasis路,孟买,印度
收到日期:01/08/2021;接受日期:16/08/2021;发表日期:23/08/2021
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工作的目的是开发一个简单的,准确的,精确的,可再生的反相高效液相色谱(RP - HPLC)法测定Lenvatinib抗癌药物的胶囊剂型。色谱法进行一种惰性维持C18(250毫米* 4.6毫米* 5μm)列组成的水流动相:乙腈:三氟乙酸(60:40:0.1)v / v。检测是在241 nm, 10μl选择注入体积流量为0.8毫升/分钟。保留时间是4.15分钟。方法的线性范围的10 - 100μg /毫升回归系数为0.9991。该方法根据我的指导方针进行验证。发达的方法优越的理论板和它有更少的尾矿的因素。常规质量控制分析的方法可以应用的Lenvatinib胶囊配方。
Lenvatinib;高效液相色谱法;验证;配方
Lenvatinib是一种抗癌药物,用于治疗某些类型的甲状腺癌,并可能对其他癌症。它充当多个激酶抑制剂对血管内皮生长因子受体1 (VEGFR1)、血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)和VEGFR3激酶(1]。Lenvatinib的化学名称为4 - [3-chloro-4 - (cyclopropylcarbamoylamino)苯氧基]7-methoxyquinoline-6-carboxamide图1和它的分子式是C21H19ClN4O4。Lenvatinib的摩尔质量是426.857克/摩尔。Lenvatinib胶囊(Lenvima、卫材、Inc .),结合everolimus,是美国食品和药物管理局批准的5月13日,2016年,先进治疗肾细胞癌后之前抗血管生成疗法。Lenvatinib于2015年首次批准用于治疗局部复发或转移,进步,放射性碘耐火材料分化型甲状腺癌2,3]。
图1:Lenvatinib结构。
文学的调查显示,很少有色谱方法开发的估计Lenvatinib使用缓冲系统和非常低的保留时间和较低的系统适用性参数(4,5]。因此,试图开发一种简单、快速、精确和准确的反相色谱法来估计Lenvatinib胶囊剂型。该方法是根据国际会议协调优化和验证(我)指南6]。
机制的目的是概述的反相高效液相色谱法(rp) Lenvatinib和解释的基础上保留机制和实现高速分离没有再现性的损失。
化学药品和试剂:分析纯Lenvatinib标准从中央采购药物测试实验室,孟买与定义效力[99.8(基础)]。LENVIMA(10毫克)胶囊收到礼品样本药物控制器办公室助理、航空货运、孟买。乙腈的高效液相色谱级默克和三氟乙酸的分析从年级Sisco研究实验室经纪公司被用于流动相的制备和其他解决方案。Milli-Q水被用来准备所有需要的解决方案(4]。
仪器:珀金埃尔默UV / VIS光谱仪λ25连接到计算机装载软件珀金埃尔默紫外线赢得实验室用于所有的光谱光度测量的测量。色谱方法进行珀金埃尔默Flexar高效液相色谱使用软件TC导航/版本再与LC仪器控制。惰性维持C18(250毫米×4.6毫米×5μm)列作为固定相。
稀释剂准备:混合水和乙腈1:1比例的v / v使用标准和样品制备的解决方案。
测定波长:的标准解决方案(50μg /毫升)Lenvatinib扫描在200 - 400纳米的范围与稀释剂的空白。在241 nm Lenvatinib显示最大吸光度。所以合适的波长选择的高效液相色谱分析Lenvatinib 241海里图2。
图2:紫外光谱Lenvatinib
流动相准备:流动相是由混合水:乙腈:三氟乙酸的比率(60:40:0.1)v / v。这是然后使用超声波浴用近10分钟,使用0.2μm尼龙过滤器过滤。标准溶液的制备:10毫克的标准Lenvatinib准确称重和稀释剂稀释了50μg /毫升的浓度,这是作为100%的目标浓度(5]。
样品溶液的制备:样本(LENVIMA 10毫克)相当于10毫克的Lenvatinib准确称重和转移成100毫升容量瓶。大约50毫升添加稀释剂的解决方案是用20分钟。瓶被填充到马克与稀释剂、混合和过滤。过滤后,用移液器吸取了10毫升溶液和被20毫升容量瓶中。然后用稀释剂稀释到目标是得到一个50μg /毫升Lenvatinib的浓度。
方法优化:Lenvatinib是一个基本的和非极性的药物。基本停用列惰性维持这种药物的选择保留。这里不同的列和不同成分的流动相溶剂反复试验的基础上使用。最初的试验是用流动相组成的水和乙腈的比例不同,但高峰形状观察差的保留时间。好峰获得了流动相组成的水:乙腈:三氟乙酸的比率(60:40:0.1)v / v。流量一直为0.8毫升/分钟和紫外检测波长241纳米。所有的决定都是在一个常数列温度(350 C)。10μl标准的准备和样品制备分别注入色谱仪。
方法验证
发达的方法验证按照我指南等参数的特异性,线性精度、准确性、鲁棒性。
系统适用性:系统适用性测试方法开发的一个重要组成部分。开始前的样本分析的色谱系统用于分析必须通过系统适用性的限制。一个空白的准备(单注)和标准准备(6)复制工作浓度(50μg /毫升)注入高效液相色谱和色谱图记录评估系统适用性参数区域,保留时间(RT),理论板数(N)和尾矿的因素。结果给出了表1。
| 老不。 | 区域 | 保留时间 | 理论板 | 拖尾因子 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 3647364 | 4.145 | 8170年 | 1.243 |
| 2 | 3639670 | 4.148 | 8163年 | 1.247 |
| 3 | 3643183 | 4.147 | 8176年 | 1.248 |
| 4 | 3645110 | 4.147 | 8149年 | 1.250 |
| 5 | 3642978 | 4.149 | 8099年 | 1.252 |
| 6 | 3646228 | 4.151 | 8100年 | 1.254 |
| 平均 | 3644089 | 4.15 | 8143年 | 1.25 |
| SD | 2754.128 | 0.0020 | 0.0039 | |
| %相对标准偏差 | 0.08 | 0.05 | 0.31 | |
| 限制 | NMT 2.0% | NMT 1.0% | 壮年的2000 | NMT 2.0% |
表1:Lenvatinib系统适用性的研究。
优化色谱条件是满意收益留存,夏普和对称峰值为4.15分钟。理论板的平均数量是8143和尾矿Lenvatinib因子为1.25,这表明高效柱的性能。
特异性:特异性空白安慰剂,标准药物解决方案(50μg /毫升)和样品溶液(50μg /毫升)注入高效液相色谱和色谱图记录。图3- - - - - -6代表了色谱的空白,安慰剂,分别标准药物溶液和样品溶液。
图3:色谱图的空白的解决方案。
图4:色谱的安慰剂的解决方案。
图5:色谱Lenvatinib标准的解决方案。
图6:色谱Lenvatinib示例解决方案。
空白的色谱,安慰剂,标准药物溶液和样品溶液表明,获得的峰值浓度标准溶液和样品溶液在工作只是因为药物的空白和安慰剂没有峰的保留时间Lenvatinib。从上面的结果,该方法是发现特定的开发。线性:方法的线性计算通过注入Lenvatinib的标准溶液的浓度10、20、30、50、70、80、100μg /毫升准备从标准储备溶液(1000μg /毫升)。线性图绘制了服用的药物浓度水平轴和轴对应的峰面积。Lenvatinib被发现0.9991的相关系数不小于0.999。因此,响应是线性μg从10 - 100 /毫升。
精度
系统精度:注射6标准的解决方案(50μg /毫升)注入高效液相色谱法。平均值,标准偏差和相对标准偏差(RSD %)峰地区的六个复制注射计算和报告。总结结果所示表2。
| 注射。 | 区域 |
|---|---|
| 1 | 3543108 |
| 2 | 3657934 |
| 3 | 3673545 |
| 4 | 3667287 |
| 5 | 3674373 |
| 6 | 3647364 |
| 平均 | 3643935 |
| SD | 50442.75 |
| %相对标准偏差 | 1.3843 |
| 限制 | NMT 2.0% |
表2:系统精度数据lenvatinib
方法精度:六个复制注射标准溶液(50μg /毫升)和六个样本准备Lenvatinib(50μg /毫升)准备一式两份注入色谱系统。Lenvatinib示例解决方案的平均比例分析计算和报告标准偏差和相对标准偏差的六个样品。所示的结果表3。
| 注入。没有 | %化验 |
|---|---|
| 1 | 99.4 |
| 2 | 98.4 |
| 3 | 99.5 |
| 4 | 99.2 |
| 5 | 99.0 |
| 6 | 100.4 |
| 平均 | 99.3 |
| SD | 0.6585 |
| %相对标准偏差 | 0.6631 |
| 限制 | NMT 2.0% |
表3:Lenvatinib方法精确数据。
中间精度:六个复制注射标准溶液(50μg /毫升)和六个样本准备Lenvatinib(50μg /毫升)准备和注射复制在两个不同的日子里,由两个不同的分析师和在两个不同的高效液相色谱系统。试验结果所示表4。
| 注入。没有 | 分析师1(第一天)高效液相色谱法 | 分析师B(第二天)高效液相色谱法2 |
|---|---|---|
| %化验 | %化验 | |
| 1 | 99.4 | 100.3 |
| 2 | 98.4 | 99.3 |
| 3 | 99.5 | 99.5 |
| 4 | 99.2 | 100.2 |
| 5 | 99.0 | 100.1 |
| 6 | 100.4 | 101.0 |
| 平均 | 99.3 | 100.1 |
| SD | 0.6585 | 0.6088 |
| %相对标准偏差 | 0.6631 | 0.6084 |
| 限制 | NMT 2.0% | NMT 2.0% |
表4:中间精密度Lenvatinib的数据。
结果显示系统精度,方法精密、中间精密度% RSD值不超过2%。因此,可以得出结论,该方法精确。
准确性:精度是由标准添加法的方法,样本的%意味着复苏的决心在三个不同的水平(110年、120年和130%)。在每一个层面上,执行了三个决定。意味着复苏发现按照百分比计算中所示表5。
| 水平 | 尖的级别(毫克) | 恢复量(毫克) | %的复苏 | 的意思是 | SD | %相对标准偏差 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 110% | 11.3 | 11.15 | 98.67 | |||
| 110% | 11.3 | 11.27 | 99.73 | 99.17 | 0.5334 | 0.5379 |
| 110% | 11.3 | 11.20 | 99.12 | |||
| 120% | 12.2 | 12.08 | 99.02 | |||
| 120% | 12.2 | 12.18 | 99.84 | 99.95 | 0.9881 | 0.9887 |
| 120% | 12.2 | 12.32 | 100.98 | |||
| 130% | 13.4 | 13.31 | 99.33 | |||
| 130% | 13.4 | 13.51 | 100.82 | 99.78 | 0.9079 | 0.9099 |
| 130% | 13.4 | 13.29 | 99.18 |
表5:Lenvatinib精度的研究。
精度研究的限制百分比平均回收率为98% - 102%。从结果可以看出,百分比限制意味着复苏,因此这个方法是精确的。
鲁棒性:Lenvatinib的样品进行了分析使用开发方法后故意检测波长的变化,流量和列温度。三个样品准备50μg /毫升的准备和注入一式两份以及六个复制注射标准溶液在不同色谱条件下50μg /毫升。通常预期变化的方法足够健壮的色谱条件如波长、温度和流量所示表6。
| 参数 | 改变参数(±) | %的评估 | 的意思是 | SD | %相对标准偏差 |
|---|---|---|---|---|---|
| 波长 | 239年 | 99.4 | |||
| (±2海里) | 241年 | 99.3 | 99.7 | 0.6658 | 0.6676 |
| 243年 | 100.5 | ||||
| 流量 | 0.6 | 100.6 | |||
| (±0.2毫升) | 0.8 | 99.3 | 100.3 | 0.8505 | 0.8482 |
| 1 | 100.9 | ||||
| 温度 | 33 | 100.9 | |||
| (±2˚C) | 35 37 |
99.8 99.4 |
100.0 | 0.7767 | 0.7765 |
表6:鲁棒性Lenvatinib的数据。
分析
的优化方法应用于测定Lenvatinib样本。五个复制注射标准制剂(50μg /毫升)和六个样品准备工作(50μg /毫升)(一式两份)注入色谱系统和Lenvatinib峰值测量的响应。
药物内容计算平均6个决定和化验结果所示表7。的优化方法应用于测定Lenvatinib样本。
| 老不。 | 重量的标准(毫克) | 样品重量(相当于10毫克) | *标准在241 nm的领域 | 区域样本的241海里 | %化验 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 10.1 | 101.2 | 3644089 | 3597754 | 99.4 |
| 2 | 102.5 | 3606958 | 98.4 | ||
| 3 | 101.4 | 3606848 | 99.5 | ||
| 4 | 101.6 | 3605604 | 99.2 | ||
| 5 | 102.7 | 3636997 | 99.0 | ||
| 6 | 101.1 | 3631001 | 100.4 | ||
| 的意思是 | 99.3 | ||||
| ±SD | 0.65 | ||||
| %相对标准偏差 | 0.65 | ||||
表7:化验的结果lenvatinib样本。
结果显示复苏比例高和SD值很低,这从另一方面也证实了方法适用于例行Lenvatinib测定药物制剂。
发达高效液相色谱方法简单、具体、准确和精确的估计Lenvatinib胶囊剂型。它被成功验证线性、准确性、精密、特异性和恢复按照我的指导方针。
结论
因此,适合常规分析方法描述Lenvatinib胶囊剂型的复苏是高和SD值比例低,证实了方法适用于日常测定Lenvatinib药物制剂。
作者感谢中央药物测试实验室,孟买和Gahlot药学研究所Koparkhairane的指导和支持。
作者宣称没有利益冲突。