研究与评论在药学和制药雷竞技苹果下载科学
菜单e-ISSN: 2320 - 1215 p-ISSN: 2322 - 0112
e-ISSN: 2320 - 1215 p-ISSN: 2322 - 0112
年代Dhruvi*,B Ankita, P Bhagirath
坐在Kaival药学院,撒尔沙- 388365,助教。Dist。阿南德,印度古吉拉特邦。
收到日期:13/02/2014接受日期:17/03/2014修订日期:12/03/2014
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一个简单、快速、精确的反相高效液相色谱法产物()方法开发同步估计的扑热息痛和散装柏马溴和联合制药剂型使用BDS海波西尔C18柱。示例分析了使用磷酸缓冲(pH-4):甲醇(65:35v / v)作为流动相的流速1.0毫升/分钟,检测到270海里。扑热息痛的保留时间和柏马溴被发现分别为4.04分和7.36分钟。实现开发方法的线性范围的扑热息痛和2.5 -7.5 32.5 -97.5μg /毫升μg柏马溴/毫升。验证该方法的准确性、精度、线性度,定量的检测极限,限制和健壮性按照国际会议协调(我)的指导方针。
开发、验证、扑热息痛(PCM),柏马溴(PAM)
扑热息痛(N - 4-hydroxyphenyl乙酰胺)是一种Analgesic-antipyretic药物抗炎作用较差,属于对氨基苯酚衍生物类非甾体抗炎药。对乙酰氨基酚的主要作用机理是抑制环氧合酶(COX)。最近的研究表明,它是高度选择性cox - 2由于其选择性cox - 2不显著抑制生产的pro-clotting凝血恶烷(1]。
柏马溴是利尿药,增加尿流率;然而,临床上有用的利尿剂也增加钠的排泄率+(尿钠排泄)和相应的阴离子,通常Cl - [2]。
扑热息痛和柏马溴平板用于经前焦虑障碍,背部疼痛,经前综合症3]。
分析方法开发的定义是开发、修改和应用验证,标准化和官方的分析方法(4]。方法验证是一个过程,记录或证明选择方法为用途提供分析数据。方法验证是通过使用参数如准确性、精度、线性、检测极限,定量的限制,系统适用性、选择性和特异性(5,6]。
扑热息痛是印度的官方药典、英国药典和美国药典。柏马溴是一个官员在美国药典。很少分析方法评估扑热息痛和柏马溴已报告的联合药物剂型。
结合制定扑热息痛和柏马溴是中央批准的药物标准控制组织(CDSCO)约会07/12/2011 [7]。
图1:化学结构对乙酰氨基酚(6]
图2:柏马溴的化学结构9]。
使用高效液相色谱级水、甲醇和乙腈为流动相做准备。磷酸氢二钾(AR级)和邻位的磷酸(AR级)被用于缓冲做准备。纯样品扑热息痛和柏马溴的阿斯特朗化工、阿默达巴德和Ami生命科学Pvt Ltd,瓦尔道拉。MENSODOLTM选项卡(扑热息痛- 325毫克,pamabrom-25mg)从Anthus天才制药、钦奈。
高效液相色谱系统SPD-20AT,岛津制作所组成的泵LC-20AT,探测器SPD-20AT,列BDS海波西尔C18, 250毫米×4.6毫米,5μ(粒度),热科学、喷射器rheodyne喷射器(20μl能力)和注射器汉密尔顿(25μl)。Spinchrom使用色谱数据处理软件。
刚做好的磷酸盐缓冲剂的混合物(pH-4):甲醇(65:35v / v)作为流动相。流动相是0.45μm过滤膜过滤和在使用前用。流动相的流速保持在1.0毫升/分钟。
流动相是由混合350毫升的甲醇和650毫升的磷酸盐缓冲剂(pH值:4.0),透过0.45μm绘画纸过滤和用10分钟。
参考标准的PCM 65毫克和PAM 50毫克至10毫升容量瓶分别溶解在甲醇。烧瓶动摇了20分钟和体积与流动相是由马克获得标准储备溶液PCM(650μg /毫升)和帕姆(500μg /毫升)。股票的解决方案是透过0.45μm绘画纸过滤器。1毫升PAM溶液被撤回到10毫升容量瓶和稀释马克与流动相的工作标准溶液PAM(50μg /毫升)。PCM和PAM的工作标准的解决方案准备合适的整除的股票的解决方案。
20片的体重,他们的平均体重是决定最后粉。准确称取平板粉相当于650毫克的PCM和50毫克PAM然后转移到10毫升容量瓶包含5毫升甲醇和用了20分钟。解决办法是通过绘画纸滤纸过滤和体积与流动相达到标准的调整。这个解决方案预计将包含650μg /毫升PCM和50μg /毫升PAM。这个解决方案(0.5毫升)在被转移到一个10毫升容量瓶和成交量调整马克与流动相浓度的PCM(32.5μg /毫升)和帕姆(2.5μg /毫升)。
PCM的标准溶液(32.5μg /毫升)和PAM(2.5μg /毫升)扫描在200 - 400纳米的紫外线地区使用甲醇作为空白和表面光谱被记录。270纳米波长分析评估PCM和PAM被选中。(图3)。
图3:检测波长的选择(270海里)。
纯药物解PCM(32.5μg /毫升)和PAM(2.5μg /毫升)分别注入高效液相色谱系统,允许运行在不同的移动阶段如甲醇,水:甲醇,水:乙腈,磷酸盐缓冲:甲醇和磷酸盐缓冲剂:乙腈是尝试为了找到最优的分离条件PCM和PAM。发现流动相含有磷酸盐缓冲剂(pH-4):甲醇(65:35v / v) 1.0毫升/分钟的流量检测波长270 nm给满意的结果与夏普,定义良好和解决峰值最小尾矿相比其他移动阶段。在这些条件下的保留时间一般是4.04分钟PCM PAM和7.367分钟(图4)中描述和优化色谱条件(表1)。
图4:标准溶液的色谱PCM (tR 4.04分钟)和PAM (tR 7.367分钟)。
表1:优化色谱条件同时估计PCM和PAM
验证产物的优化方法进行了以下参数。
线性PCM和PAM被评估的反应浓度范围32.5 - -97.5μg /毫升和2.5 - -7.5μg /毫升的标准解决方案,分别。
PAM和PCM的灵敏度测量的使用该方法估计的检测极限(LOD)和定量限度(定量限)。LOD和定量限计算使用以下方程。
LOD = 3.3×σ/ S
定量限= 10×σ/ S
在那里,
σ=响应的标准偏差
S =校准曲线的斜率。
方法的精度由重复性验证,盘中interday和精度。重复性研究是由三种不同浓度的药物分析六个复制在同一天。盘中精度是由分析示例解决方案在不同的时间间隔在同一天interday精度和不同的一天。
pre-analysed样本,一个已知数量的标准溶液的纯药物(PCM和PAM)飙升在三个不同的水平。这些研究是在80%、100%和120%的水平。
鲁棒性是由故意改变色谱条件。被研究的重要参数是两座山峰之间的分辨率。鲁棒性是通过改变参数后检查一个接一个:
改变流动相比例的±0.2毫升(磷酸盐缓冲剂(pH值4):甲醇(67:33v / v)和磷酸盐缓冲剂(pH值4):甲醇(63:37v / v))
改变流量±0.2毫升/分钟(0.8毫升/分钟。和1.2毫升/分钟)。每个变更后,样品溶液注入和%与系统适用性试验参数检查。
改变酸碱±0.2的流动相(磷酸盐缓冲剂(pH值4.2):甲醇(65:35v / v)和磷酸盐缓冲剂(pH值3.8):甲醇(65:35v / v)]。
检查系统适用性,理论板数、分辨率、保留时间和拖尾因子测定(17]。
20片的体重,他们的平均体重是决定最后粉。准确称取平板粉相当于650毫克的PCM和50毫克PAM然后转移到10毫升容量瓶包含5毫升甲醇和用了20分钟。解决办法是透过0.45μm过滤和音量调整了与甲醇马克。从上面的解决方案1毫升被带进一个10毫升容量瓶和成交量调整马克与甲醇的最终浓度PCM(65μg /毫升)和帕姆(5μg /毫升)。20μl测试解决方案是注入色谱相同的记录和计算药物的数量(18]。
方法开发和验证研究结果同时评估PCM和PAM在当前的研究中涉及磷酸盐缓冲剂(pH-4)和甲醇(65:35v / v)作为流动相为rp -下面给出。
PCM和PAM完全分离,rp - C18柱使用iso-cratic磷酸盐缓冲剂和甲醇作为流动相洗脱。当甲醇比例从80%减少了每5%的递减,扩大,面对和尾矿的峰出现。由于降低甲醇的比例和使用磷酸缓冲(pH-4)尖锐指出,观察峰分离。随着甲醇浓度逐渐降低了峰展宽,面对和尾矿被显著降低。最终妥善解决实现1毫升/分钟的流量和使用磷酸缓冲(pH-4):甲醇(65:35 v / v)为流动相产物。(图4)(表1)
分析的线性过程的能力(在一定范围内)获得的测试结果直接与浓度成正比(量)分析物的样品。6)药物反应是线性PCM (R2 = 0.9995和0.9995 PAM)在32.5 - -97.5之间的浓度范围μg PCM /毫升,2.5 - -7.5μg PAM /毫升。结果显示在(表2)。
表2:该方法线性PCM和PAM的数据。
个人的检测极限分析过程中被测物能被定量测定的最低金额,可以检测到,但不一定量化作为精确值。定量限制个人的分析过程中被测物能被定量测定的最低金额,可以定量地确定合适的精密度和准确度(6]。LOD和定量限的计算是通过各自的方程。LOD值是2.26和6.86分别μg /毫升PCM和PAM。定量限的值被发现和0.16和0.55分别μg /毫升PCM和PAM。(表2)
分析过程的精确表达了亲密之间的协议(分散程度)的一系列测量获得的多个采样相同的均匀样品在规定的条件下。精度可以考虑在三个层面:重复性、中间精密度和重现性(6]。结果的可重复性,盘中和inter-day精度实验分别显示了(表3)和(表4)。发达的方法被发现精确的相对标准偏差值可重复性盘中interday精度研究< 2%。
表3:可重复性研究PCM和PAM。
表4:当天和inter-day研究PCM与PAM。
分析过程的准确性表达亲密之间的协议价值被接受作为一个传统的真实价值或一个公认的参考价值和价值发现。6]所示(表5)和(表6),良好的复苏的PCM和PAM的范围从101%到99得到在不同添加浓度。
表5:PCM的测定精度。
表6:PAM的测定精度
峰面积计算的标准偏差为每个参数和% RSD为不到2%。结果表明低%相对标准偏差所示的值(表7)和表示方法的鲁棒性。
表7:鲁棒性研究对PCM和PAM。
系统适用性测试是许多分析方法不可或缺的一部分。测试的概念是基于设备、电子产品、分析操作和样品分析构成一个完整的系统,可以被评估。6]列效率、分辨率和峰值不对称计算标准的解决方案和结果提到在(表8)[17]。
表8:系统适用性参数。
剂型时,分析了PCM和PAM给夏普和定义良好的峰保留时间4.04分钟,7.36分钟分别扫描时270海里。销售配方的试验结果所示(表9)[18]。
表9:定量测定在制药配方。
rp方法的开发和验证发现简单,准确,精确、经济。这些方法可以应用常规定量分析的扑热息痛和散装pamabraom制药剂型。
作者感谢Ami生命科学Pvt Ltd .)和阿斯特朗医药、印度古吉拉特邦提供免费样品。我们想表达我们的感谢Anthus制药、钦奈,印度提供销售的配方。我们衷心地感谢坐在Kaival药学院,印度古吉拉特邦的完美的物流支持和指导他们已经延伸到我们。
