双波长分光光度法测定西尼地平和替米沙坦联合剂型的含量。

摘要

本研究旨在实现简便、灵敏、快速、准确、精密分光光度法测定估计西尼地平(CIL)和替米沙坦(TEL)组合剂型．用甲醇溶解西尼地平和替米沙坦的纯药物样品。从重叠光谱中选取264 nm (λ1)、297.4 nm (λ2)、229 nm (λ3)和246.8 nm (λ4)四个波长，采用双波长分光光度法对两种药物进行定量分析。在TEL具有相同吸光度值时，通过测量λmax为264 nm和297.4 nm处的吸光度差来定量测定CIL。的定量测定通过测量在229 nm和246.8 nm处的吸光度差进行了TEL的测量，其中CIL在两个波长处的吸光度值相同。分析结果经统计和恢复研究验证，发现不受干扰。cil和tel2在2 ~ 6 μg/ml和3 ~ 15 μg/ml浓度范围内符合比尔定律。

关键字

分光光度法，西尼地平，替米沙坦

介绍

Cilnidipine是一种淡黄色的粉末。化学上它是1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸-2-甲氧基乙基(2E)-3苯基-2-丙烯基酯[1) (Fig.1.A)。它是降压药和钙通道阻滞剂。西尼地平是一种双L / n型钙通道蛋白抑制剂和阻滞剂。西尼地平在高血压患者中显示出肾脏和血管保护作用，并改善血压反射敏感性[1，2，3.，4，5]。替米沙坦(TEL)为白色结晶粉末。化学上，它是4 ' -[[4-甲基-6-(1-甲基- 1h -苯并咪唑-2-基)-2-丙基- 1h -苯并咪唑-1-基]甲基]联苯-2-羧酸[6，7，8(图1:B)。它极易溶于甲醇，几乎不溶于水。它是血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素II型1受体阻滞剂。替米沙坦作为血管紧张素II受体阻滞剂(ARB)的作用机制，对血管紧张素II受体1型(AT1)具有高亲和力，对AT1的结合亲和力是AT2的3000倍。它具有任何ARB中最长的半衰期(24小时)和最大的分布体积。il和TEL合用是一种降压药文献调查显示，西尼地平可通过分光光度法［10，11]和液相色谱法［12，13，14]单独或与其他药物联合使用，替米沙坦可通过分光光度法估计[15，16，17，18，19，20.，21]和用液相色谱法单独或与其他药物联合使用[22，23，24]。两种方法紫外光谱[25，26]已被报道对西尼地平和替米沙坦的联合剂型进行评估。双波长分光光度法是一种很好的替代方法，值得在常规药物分析中推广应用。本工作的目的是建立一种准确、可重复、灵敏、特异的紫外分光光度法测定制剂中CIL和TEL的方法，以满足ICH指南的要求。根据ICH指南及其更新的国际公约对所提出的方法进行了验证。

材料与方法

仪器

采用岛津UV-1800紫外/可见分光光度计，光谱宽度为1nm，波长精度为±0.3 nm，与石英细胞匹配1 cm，建立分析方法。

标准原液的制备(100μg/ml)

将准确称重的CIL和TEL 10 mg转移到10 ml容量瓶中，用甲醇溶解稀释至标记，得到CIL和TEL浓度(1000 μg/ml)的溶液。取1 ml移液于10 ml容瓶中，用甲醇稀释至标号，得到100 μg/ml的标准原液。

分析波长的选择

将准确称量的10 mg CIL和10 mg TEL分别装入100 ml容量瓶中，溶解于少量甲醇中。用甲醇调节体积至标记，得到CIL和TEL的终浓度(100 μg/ml)。取该溶液1 ml移入10 ml容量瓶中，用甲醇调节体积至标号，制得终浓度为10 μ g/ml。将CIL和TEL的标准溶液在1cm槽内对甲醇在200-400 nm紫外范围内进行空白扫描，测定最大吸光度，选择CIL和TEL的λ max，从重叠光谱中选择264 nm (λ1)、297.4 nm (λ2)、229 nm (λ3)和246.8 nm (λ4)四个波长，采用双波长分光光度法对两种药物进行定量分析。在TEL具有相同吸光度值时，通过测量λmax为264 nm和297.4 nm处的吸光度差来定量测定CIL。通过测量在229 nm和246.8 nm处的吸光度差来定量测定TEL，其中CIL在两个波长处的吸光度值相同。因此，229 nm和246.8 nm之间的吸光度差与TEL浓度成正比。

CIL和TEL的校准曲线

取适量原液于5个不同的10ml容量瓶中。用甲醇补足体积，分别得到终浓度为2、3、4、5、6g/ml的CIL和3、6、9、12、15 g/ml的TEL。

片剂剂型中CIL和TEL的估算

20片(标签声称为10mg CIL和40mg TEL)称重并精细通电。准确称量相当于10 mg CIL和40 mg TEL的粉末，并将其转移到添加甲醇的100 ml容量瓶中，超声15分钟。用甲醇标记体积。溶液用41号whatmann滤纸过滤。从该溶液中取1 ml转移到10 ml的容量瓶中，体积得到含有10 μg/ml CIL和40 μg/ml TEL的溶液，该溶液用于CIL和TEL的估计，分别在264 nm (λ1)、297.4 nm (λ2)、229 nm (λ3)和246.8 nm (λ4)处测量样品溶液的响应，以定量CIL和TEL。通过将吸光度分别代入CIL和TEL的回归方程来确定样品溶液中CIL和TEL的含量。

紫外线法的验证[27］

线性和范围

通过a来评估线性度线性回归分析．通过相关系数确定了CIL (2 ~ 6 μg/ml)在264 nm (λ1)、297.4 nm (λ2)和TEL (3 ~ 15 μg/ml)在229 nm (λ3)、246.8 nm (λ4)处的线性关系。

精度

为了证明该方法的准确性，采用标准加样法进行了回收率研究。在CIL浓度为2 μg/ml、TEL浓度为3μg/ml的制剂溶液中分别加入50%、100%和150%的CIL标准品(1、2、3μg/ml)和TEL标准品(1.5、3、4.5 μg/ml)。采用回归方程计算回收率。

精度

可重复性

制备CIL标准溶液(2、3、4、5、6 μg/ml)和TEL标准溶液(3、6、9、12、15 μg/ml)，记录光谱。以甲醇为空白，在252 nm处测定吸光度。测定相同浓度溶液的吸光度6次，计算%RSD。

日内和日间精度

分析3种不同浓度(2、4、6 μg/ml) CIL和(3、9、15 μg/ml) TEL在同一天(日内)和不同天(日内)结果的变化。日内精密度通过分析当天三次CIL和TEL来确定。

通过分析3天的逐日CIL和TEL来确定日间精度。

检测极限

根据线性曲线方程，计算了截距(响应)的标准差(SD)。然后用截面给出的数学表达式测量LOD。的limit of detection (LOD) of the drug was calculated by using the following equations designated by International Conference on Harmonization (ICH) guideline:

负载= 3.3 * σ/ s;

其中，σ =响应的标准差

S =校准曲线的斜率。

定量极限

根据线性曲线方程，计算了截距(响应)的标准差(SD)。然后用节中给出的数学表达式测量LOQ。的limit of quantification (LOQ) of the drug was calculated by using the following equations designated by International Conference on Harmonization (ICH) guideline:

Loq = 10 * σ/ s

其中，σ =响应的标准差

S =校准曲线的斜率。

溶液的稳定性

按照测试程序，每隔24小时用紫外线对样品进行分析。

紫外分光光度法的结果与探讨

溶剂的选择

CIL和TEL可溶于甲醇，但不溶于水。在甲醇中扫描了CIL和TEL的光谱。

分析波长的选择

用双波长法估计CIL和TEL;在这种方法中，一种药物需要两个波长，其中一种药物显示相似的吸光度，而另一种药物显示不同的吸光度。选择两个波长，CIL的吸光度相近，而其他药物TEL的吸光度差异较大。另外两个波长的选择使得TEL具有相似的吸光度，而CIL具有较大的吸光度差异。不同浓度CIL和TEL的覆盖光谱显示，在229 nm和246.8 nm处，不同浓度CIL的吸光度相近，而TEL的吸光度差异显著。同样，在264 nm和297.4 nm处，不同浓度的tel吸光度相近，而CIL吸光度差异显著。综上所述，估计CIL的波长选择264 nm和297.4 nm，估计tel2的波长选择229 nm和246.8 nm图4.1和4.2

紫外法的验证

线性度和量程

在2-6 μg/ml和3-15 μg/ml的浓度范围内，绘制的校准曲线在2-6 μg/ml和3-15 μg/ml的浓度范围内，绘制的校准曲线在3-15 μg/ml的浓度范围内呈线性回归系数(r2)分别为0.999和0.996。通过绘制吸光度VS浓度差，构建了CIL和TEL的校准曲线。（图2 (A)、图2 (B)验证了所建立的分光光度法。分光光度法测定CIL和TEL的线性范围、相关系数、检出限和标准偏差见表1．

精度

通过计算回收率来确定准确性。结果表明，该方法的回收率分别为99.7 ~ 101.89%和99.3 ~ 101.3% (表2和表3）.

精度

可重复性

可重复性数据见(表4)，其中，CIL和TEL的% RSD < 2，表明该方法是精确的。

日内和日间精度

分析当日(日内)、日(间)结果的变异情况。日间(n=3) CIL和TEL的% RSD分别为0.17-0.52和0.12-0.44，日间(n=3) CIL和TEL的% RSD分别为0.77-0.89和0.12-1.18 (表5）.两种药物的% RSD < 2，表明该方法是精确的。

检测极限和定量极限

在实验条件下，CIL和TEL的最低检出药量(LOD)分别为0.05 μg/ml和0.088 μg/ml。CIL和TEL的定量限分别为0.16 μg/ml和0.266 μg/ml, RSD < 2%。

溶液的稳定性

样品制剂按试验程序每隔24小时进行定期分析。该方法也很坚固，因为在甲醇溶液中制备24小时内吸光度没有变化(表6）.

强度

通过不同厂家的溶剂、分析剂和紫外可见分光光度计型号(表7）.

用该方法对市售制剂进行了分析，市售制剂的测定结果见表9

结论

紫外分光光度法测定CIL和TEL的相关系数分别为0.999和0.997。CIL和TEL的线性范围分别为2 ~ 6 μg/ml和3 ~ 15 μg/ml。

致谢

感谢J B Chemicals and Pharmaceuticals, Daman and Akums Drugs and Pharmaceuticals limited, Hardwar分别赠送标准西尼地平和替米沙坦样品。作者非常感谢SICART主任和indkakaipcowala药学院校长为开展研究工作提供了必要的设施。

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