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效应作用于心脏的Methanolic原理提取葱属植物的种树叶在全球缺血性鼠的心

Dobhal友吉达常常结伴1*,Versha Parcha2和D.C.Dhasmana3

1药品科学Sardar Bhagwan辛格PG生物医学科学研究所和研究,Balawala,乌北阿坎德邦、印度

2化学系,Sardar Bhagwan辛格PG生物医学科学研究所和研究,Balawala,乌北阿坎德邦、印度

3H.I.M.S.药理学系Doiwala,乌北阿坎德邦,印度

*通讯作者:
Dobha友吉达常常结伴
制药科学系的
Sardar Bhagwan辛格PG生物医学科学研究所和研究
Balawala,乌北阿坎德邦,印度
电话:09410790829
电子邮件: (电子邮件保护)

收到:17/08/2015接受:07/09/2015

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文摘

目的:本研究在有效成分的功效(于ah -) Methanolic提取葱属植物的种叶子一直限制在缺血性心肌损伤大鼠心脏的评估。材料和方法:不同提取物的阿根廷蚂蚁叶子准备使用溶剂极性增加。Methanolic提取在所有其他提取物进一步纯化使用色谱技术四个主要结果分数A1, A2, A3、A4。心血管的潜力。在这些分数A4被发现活跃的一部分。于ah -(有效成分)从分数A4使用柱层析法分离技术和评估保护作用。结果:a .阿根廷蚂蚁的Methanolic提取叶子和进一步分数A4 Methanolic提取显著预防心肌梗塞大小与标准相比雷米普利在书房里。从分数A4 Methanolic提取、孤立的主动原则于ah -显示心脏保护作用的剂量水平50毫克/公斤体重。结论:研究表明,于ah -活跃心血管Methanolic原理提取葱属植物的种叶子和被发现显著(p˂0.05)。

关键字

葱属植物的种,色谱法,缺血,雷米普利,再灌注。

介绍

根据阿育吠陀,印度药用植物丰富的物质来源,有几个治疗属性包括有氧运动保护。大约75 - 85的世界人口,植物提取产品仍在初级卫生保健中起着必不可少的作用,主要是在发展中国家。这主要是因为一般认为使用草药制剂没有任何不利影响,便宜,很容易和本地可用的1,2]。草药制剂的使用是提高治疗心血管疾病由于各种可能的机制参与有氧运动的保护。因此,传统上使用的草药提取物,评估与限制的有害影响缺血和再灌注诱导心肌损伤。此外,预防性的结果统计分析和验证方法和作为标准治疗缺血和兼职reperfusion-induced心肌损伤(3,4]。

葱属植物属现代医学的吸引了特别关注,因为它广泛的健康使用世界各地,珍视的信仰,它有助于防止疾病和保持良好健康提供更多的活力。到目前为止,许多有利的实验和临床效果葱属植物物种已报告(5- - - - - -7]。葱属植物阿根廷蚂蚁(Alliaceae),发现在高海拔地区,3000 - 4000的喜马拉雅山脉8]。可食植物部分包括花、叶、根和灯泡。叶和花序被用作调味品代理和其他报告描述抗菌素(9)、血液净化、抗炎症、抗氧化剂(10),抗哮喘和抗糖尿病活动(11,12]。A.humile占总土地面积的70 - 75%在药用植物栽培。在栽培物种,葱属植物阿根廷蚂蚁获得最高的经济效益比其他物种探索药用用途(更少13]。因此,在目前的研究葱属植物阿根廷蚂蚁已经被孤立的有效成分可能负责保护作用。

材料和方法

药物和化学物质

雷米普利长血管紧张素转换酶抑制剂。它是广泛分布于组织和可能抑制肾素血管紧张素系统在更大程度上和拥有心血管品质。血浆t1/28 - 18小时的活性代谢物,动作持续时间> 24小时和生物利用度是60%比其他药物相同的类别。

雷米普利是作为一个礼物样本USV Baddi, Himanchal Pradesh, Himanchal,印度。在这项研究中所使用的所有试剂均为分析纯,使用前总是刚做好的。

植物材料

的叶子葱属植物阿根廷蚂蚁从Chamoli收集区,Uttaranchal印度。植物材料被确认来自植物的调查印度,印度北部地区中心,乌与参考号码BSI / NRC 9(科技)/ 2010 - 03/839/12796。

准备的提取

新鲜的叶子答:阿根廷蚂蚁在阴凉干燥室温2天之后干燥(40 - 50°C)为3 - 4小时和粉粗粉。980克粉的A.humile树叶中提取,石油醚、氯仿、丙酮和甲醇先后收集四个不同极性化合物的提取。蒸发的溶剂被降低的压力下获得半固体的质量。结果提取被保存在一个单独的干燥器随后称重计算每个提取的百分比收益率指空气的干叶子答:阿根廷蚂蚁

隔离和净化的原理从活跃的部分组成

Methanolic提取显示良好保护作用受到使用硅胶柱层析法筛孔尺寸200 - 400μ和氯仿:甲醇作为流动相在不同的比率在隔离的四个分数,A1, A2, A3、A4。心血管活动为所有四个评估分数分数A4的甲醇提取物被发现显著有效。分数的进一步净化A4如上过程导致孤立于ah -说,AH-2 AH-3。所有这些化合物进一步评估心血管活动。在所有这些化合物AH1被发现明显比其他化合物(有效14]。

急性毒性研究

白化病老鼠每组10动物和重20 - 25 g管理分级剂量(100 - 2000毫克/公斤体重,口头)的甲醇提取的A.humile。管理后提取小鼠观察到毒性作用经过48小时的治疗。毒理学效应观察表示为LD的死亡率50。期间死亡的动物数量。LD的50Litchfield和Wilcoxon提取决心的15]。没有观察到死亡因此提取使用是安全的,即使在剂量2000毫克/公斤体重口服。

孤立的老鼠心脏准备

老鼠heparinised (500 IU / L, i.p。)和牺牲20分钟后颈椎错位。心迅速切除并立即安装在Langendorff的装置16]。温度保持在37°C循环热水。准备与克雷布斯Henseleit灌注(k - h)缓冲区(氯化钠118毫米;氯化钾4.7毫米;CaCl22.5毫米;MgSO4.7H2O 1.2毫米;KH2阿宝41.2毫米;C6H12O611毫米),pH值7.4和95%都洋溢着O2和5%的公司2。冠状动脉流量是保持6 - 9毫升/分钟和灌注压力保持不变在70毫米汞柱。全球30分钟缺血是通过完全关闭的流入生理溶液和紧随其后的是120分钟的再灌注。冠状污水收集局部贫血之前,立即再灌注后5分钟、30分钟和120分钟的估计LDH以及[17]。

心肌损伤的评估

心肌梗塞大小测量使用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法。LDH水平以及(西门子医疗解决方案诊断有限公司,巴罗达,印度)在冠状动脉废水估计使用商业上可用的工具。LDH值以及在国际单位表示每升(IU / L)。

评估心肌梗死大小

心被撤Langendorff的装置。auricals和主动脉根切除,和心室一夜之间保持在4°C的温度。冷冻心室被切成均匀的部分1-2mm厚度。片孵化在0.2 w / v TTC解1% Tris-chloride缓冲区,pH值7.8 20分钟在37°C。和代数余子式NADH脱氢酶酶存在于可行的心肌与四唑盐反应形成formazone色素的。酶和cofactorare失去了心脏细胞的效果。因此,仍是清白的,而可行的效果部分心肌与TTC染色砖红色。梗塞大小是衡量宏观体积法(18,19]。

试验协议

在所有组,孤立的鼠心灌注与k - h的解决方案,允许稳定10分钟。

组1:(虚假的控制;n = 5)后稳定孤立鼠心灌注持续160分钟的k - h缓冲区。不让全球局部贫血。

组2:(车辆控制;n = 5)老鼠注射1%渐变80口头为7天;此后,在7th天,孤立的老鼠心脏稳定后,受到了全球30分钟的缺血再灌注120分钟紧随其后。

第三组:(标准;n = 5)雷米普利(1毫克/公斤)溶解在1%渐变80和7天每天口服一次老鼠;此后,在7th天,孤立的老鼠心脏稳定后,受到了30分钟的全球缺血再灌注120分钟紧随其后。

第四组:(甲醇提取;n = 5)甲醇提取物(100毫克/公斤)溶解在1%渐变80和7天每天口服一次老鼠;此后,在7th天,孤立的老鼠心脏稳定后,受到了全球30分钟的缺血再灌注120分钟紧随其后。

甲醇提取物组5:(分数4;n = 5)分数A4的甲醇提取物(100毫克/公斤)溶解在1%渐变80和7天每天口服一次老鼠;此后,在7th天,孤立的老鼠心脏稳定后,受到了全球30分钟的缺血再灌注120分钟紧随其后

集团6:主动原则于ah -甲醇提取;n = 5)主动原则于ah -甲醇提取物(50毫克/公斤)溶解在1%渐变80和7天每天口服一次老鼠;之后,第七天,孤立的老鼠心脏稳定后,受到了全球30分钟的缺血再灌注120分钟紧随其后。

统计分析

所有酶值数据(LDH以及)和梗塞大小被表示为±SEM。使用图垫棱镜软件执行统计分析。值统计分析使用单向方差分析(方差分析)其次是图基的多重比较检验。值P˂0.05被认为是具有统计学意义。

结果与讨论

作用于ah -从Methanolic提取物作用于心脏的原则答:阿根廷蚂蚁叶子在心肌梗塞大小

不同提取物的答:阿根廷蚂蚁叶子viz.石油醚、氯仿、丙酮和甲醇进行评估缺血和再灌注诱导增加心肌梗塞大小,分别。在提取甲醇提取的答:阿根廷蚂蚁叶子发现活跃。进一步净化活性提取物进行了使用柱层析法,导致隔离的四个部分即A1, A2, A3、A4。再次进行了对上面说效果和在所有分数分数A4显著减毒缺血和再灌注诱导增加心肌梗塞尺寸?分数的进一步净化A4导致隔离于ah -, AH-2 AH-3。于ah -进一步评估心血管活动,这是更重要的比其他的化合物来衡量宏观体积方法(图1)。

pharmaceutical-sciences-Effect-AH-1-Myocardial-Infarct

图1:作用于ah -从Methanolic提取物作用于心脏的原则答:阿根廷蚂蚁叶子在心肌梗塞大小。梗死体积大小是衡量方法。值表示为±SEM。= P˂0.05与虚假的控制;b = P˂0.05与控制;c = P˂0.05 vs标准。方差分析之后,土耳其的多重比较测试。

作用于ah -从Methanolic提取物作用于心脏的原则答:阿根廷蚂蚁叶子在LDH的释放

不同提取物的答:阿根廷蚂蚁叶子即石油醚、氯仿、丙酮和甲醇进行评估缺血和再灌注诱导LDH的释放增加冠状动脉废水立即测量,再灌注后30分钟,分别。相似,在提取甲醇提取的A.humile叶子和孤立的分数A4从甲醇提取物显著降低冠状废水LDH的释放。进一步活跃的原则于ah -隔绝分数A4的甲醇提取物显著减毒的LDH释放冠状动脉再灌注后立即测量废水和30分钟。此外,标准治疗(雷米普利,1毫克/公斤)在冠状动脉明显减少LDH的释放污水相比于ah -活性化合物,测量立即和再灌注后30分钟(图2)。

pharmaceutical-sciences-Effect-AH-1-LDH-release

图2:作用于ah -从Methanolic提取物作用于心脏的原则答:阿根廷蚂蚁叶子在LDH释放。LDH估计在冠状动脉废水稳定(基底)后,立即(Imm 'Rep)和再灌注后30分钟(30“众议员)。值表示为±SEM。= P˂0.05与虚假的控制;b = P˂0.05与控制;c = P˂0.05 vs标准。方差分析之后,土耳其的多重比较测试。

作用于ah -从Methanolic提取物作用于心脏的原则答:阿根廷蚂蚁叶子水平释放

不同提取物的A.humile叶子即石油醚、氯仿、丙酮和甲醇进行评估缺血和再灌注诱导增加释放水平测量冠状动脉废水收集后5分钟再灌注,分别。相似,在提取甲醇提取的答:阿根廷蚂蚁叶子和孤立的分数A4从甲醇提取物显著降低水平在冠状动脉流出物的释放。进一步活跃的原则于ah -隔绝分数A4的甲醇提取物显著减毒缺血和再灌注诱导释放水平增加冠状动脉废水收集后5分钟再灌注。此外,标准治疗(雷米普利,1毫克/公斤)显著减少释放水平在冠状动脉废水活性化合物相比于ah -,收集5分钟再灌注(图3)。

pharmaceutical-sciences-Effect-AH-1-CK-MB-release

图3:作用于ah -从Methanolic提取物作用于心脏的原则答:阿根廷蚂蚁叶子上水平。水平估计在冠状动脉废水稳定(基底)和5分钟后再灌注(5 '众议员)。值表示为±SEM。= P˂0.05与虚假的控制;b = P˂0.05与控制;c = P˂0.05 vs标准。方差分析之后,土耳其的多重比较测试。

结论

急性心肌梗塞(AMI)和随后的左心室功能障碍和心力衰竭仍然是西方世界的发病率和死亡率的主要原因。快速治疗AMI的进步,主要是通过及时的再灌注,大大改善急性冠脉综合征患者结果和特别的st段抬高心肌梗死。大量的研究已经发表在各种药物和介入技术来防止心肌细胞死亡在缺血的时间和随后的再灌注[20]。传统药物和额外的临床前和临床研究需要进一步研究新的心血管策略继续当前的趋势改善AMI后的结果。

流行病学研究显示之间的负相关葱属植物属消费和减少心血管疾病进展的风险。的消费答:阿根廷蚂蚁建议重要的保护作用,包括动物实验。但某些问题的正确使用传统的草药,即使用不同的准备,剂量、持续时间和互动与仿制药应该优化。在目前的研究各种提取的答:阿根廷蚂蚁叶子viz.石油醚、丙酮、氯仿和甲醇100毫克/公斤的剂量水平是评估缺血和再灌注诱导心肌损伤。进一步净化活性提取物进行了使用柱层析法,导致隔离四分数即A1, A2, A3、A4。这些分数再评估剂量100毫克/公斤以上水平说效果,在所有的分数A4显著减毒缺血和再灌注诱导增加心肌梗塞大小和LDH的释放以及冠状动脉流出物。分数的进一步净化A4导致隔离三个化合物即于ah -, AH-2 AH-3。以上说的所有化合物筛选活动剂量水平50毫克/公斤。复合于ah -明显减少梗塞大小,释放乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(水平)在冠状动脉废水再灌注与对照组相比。目前的研究结果表明,复合于ah -分数A4的甲醇提取的答:阿根廷蚂蚁叶子明显有效改善心肌缺血性损伤和缺血和再灌注诱导对照组。此外,一些广泛的工作在这个方向也可能导致孤立的化合物的性质特征,探讨可能的机制对缺血和再灌注诱导心肌损伤。

确认

作者欣然承认SBSPGI董事和管理,Balawala,乌吉,印度在这实验研究提供必要的设施。

引用

全球技术峰会