EDTA对牛根治性牙本质的影响:R语言积分统计分析

摘要

背景/目的:在根管学中，17% EDTA的使用在根管的清洁和成形过程中是很常见的。本研究的目的是分析17% EDTA对牛根牙本质的重量和钙含量的化学作用，通过应用对参数假设调整后的数据进行积分统计分析。材料和方法:取刚宰幼牛的牙，取牙冠和牙根，纵切近端和远端两半。用棉钳取髓，用刮匙和手术刀刮水泥。用蒸馏水清洗根本质，20°C干燥。用2 ml 17% EDTA接触每半根30分雷竞技网页版钟;另一半在同样的时间里放入双沸水中。每一块都在接触之前和之后称重。雷竞技网页版采用原子吸收光谱法测定酸性水解溶液中的原子钙。统计分析采用相关样本的t检验，因为变量调整为正态分布，且方差相等。 In R language, the experimental data were exposed to the analysis of the parametric assumptions, to the tests to compare two paired samples and to the analysis of correlation. Results: A significant difference was evidenced between the weight of the dentin pieces before and after 30 minutes contact with 17% EDTA. A direct but non-significant association between calcium tramped by 17% EDTA and decrease in weight of the dentin was also found. Conclusion: The decrease in the dentinal weight at contact with 17% EDTA for 30 minutes could be associated with the loss of its organic component as a consequence of the mineral loss. The R language, software of free availability and virtual consultation, facilitates the integral statistical analysis of quantitative related paired data.

关键字

原子钙，牛牙本质，牙髓学，EDTA, R语言

简介

EDTA 17%常用于牙髓学在根管清洁和成形过程中作为灌溉溶液。它的螯合作用很有效，[1]去除牙本质的钙质，根据作用时间的不同，可能会影响组织成分[2并削弱它。

在离体研究中，我们展示了EDTA 17%和其他溶液对人类牙管的化学作用[3.］．在连续三次冲洗根管40秒后，定量17% EDTA溶液中存在的蛋白质;可溶性非胶原蛋白与牙本质相连钙，而螯合剂长期的作用会使与之结合的钙离子脱除，影响基质的有机成分[4］．另一方面，当我们比较接触螯合剂后的人髓组织提取物和牛的蛋白质谱时，我们得到了分子量相似的条带，这将在测试的实验条件下验证牛牙齿作为模型的有效性[雷竞技网页版5］．17% EDTA溶液在人和牛牙本质中的螯合作用也得到了相似的结果[1，6］．

在根管准备过程中，灌溉溶液的有效作用可以实现更大的清洁度，并有助于管道的构造。理想的冲洗液具有最大的活性，对牙本质组织的毒性最小[7］．在实验条件下，17%的EDTA在人和牛牙本质中产生侵蚀迹象[8］．通过与螯合剂接触而不应用仪器在组织中的机械作用来测定从牙本质中提取的钙，目前尚无先例。雷竞技网页版

R语言是一个免费的统计软件，由许多贡献者的合作项目产生，可以从网站(http://www.R-project.org/Licenses/)下载。其应用包括对产出信息的解释[9-11］．

箱线图是由一个框和两个扩展或须组成的图，允许表示对极端数据不敏感的五个描述性统计量(m=最小值，Q1=四分位数1,Q2=中位数，Q3=四分位数3,m=最大值)。方框包含50%的中心数据(上面的线表示Q3，下面的线表示Q1，四分位范围IQR=Q3-Q1的高度)，将方框分为两部分的线表示Q2，可以可视化中心数据的对称性。上界代表最大值(M)或极限' Q3+1.5*IQR '，取其较小者。较低的扩展代表最小值(m)或极限' Q1-1,5*IQR '。晶须允许数据被识别为异常值。盒子和晶须越长，数据的可变性就越大。

在统计推断中，假设检验(假设对比或显著性检验)允许根据在代表性样本中获得的信息对假设的总体属性进行判断。他们通过指定一个给定的假设和一个备选假设来解决统计问题，然后根据与统计权力概念相关的实验信息试图在它们之间解决问题，类型I和II错误的概念分别定义了将错误事件视为真实或将真实事件视为虚假的可能性。

参数检验假设数据的频率为正态分布，非参数检验不存在这类假设，其中非参数检验总是可以使用，而参数检验的分辨率较大。学生t检验是参数化的，可以检查两个样本的均值是否相等，或者检查样本的平均值是否等于一个确定的参考值。Wilcoxon符号秩检验(适用于成对样本)和U Mann-Whitney检验(最适用于独立样本)是当数据不调整到正态分布时的替代方法。不正确地使用不符合正态的变量的参数检验，会导致低效的估计和近似显著性的对比。

一系列数据的正态性由表示响应变量符合正态分布的图和/或假设检验估计。在R语言中，用shapiro函数得到了在样本量不大时最常用和最有效的shapiro - wilk检验。test (X)，其中X表示包含研究变量数据的数值向量。

为了检验两个样本的方差，使用Fisher的f检验，对于两个以上的数据序列，可以使用Bartlett检验和Levene检验(后者与对比组数无关)，在R语言中使用var.test函数进行检验。

这项工作的目的是通过R语言的积分程序，确定与EDTA 17%接触30分钟前后牛牙本质重量的统计差异，并衡量牙本质重量下降与溶液中存在的钙原子之间的关系。雷竞技网页版

材料与方法

5根无根的冠牙齿消灭2-3岁的幼牛。根的近端和远端未被破坏，用棉签提取髓。用刮匙和手术刀称水泥，用大量蒸馏水清洗牙本质片，20°C干燥。每个牙根的一半牙本质用2ml 17% EDTA接触30分钟，其雷竞技网页版余一半牙本质用等量的双蒸馏水接触(对照)。用精确的分析天平(Acculab, Buenos Aires, Argentina)测定每片牙本质的克重，在(AT)和(DT)处理前，通过接触17%的EDTA。雷竞技网页版此外，在pH=1.5-2.0的酸性介质中水解后，原子吸收光谱法定量了与螯合剂相连的溶液中存在的原子钙(CA)。单位为mg/dl。

用R语言进行综合统计分析，程序如下:

1)为了生成实验数据向量，在“R Commander”窗口中执行命令:

AT <- c(0.4545, 0.3880, 0.3301, 0.4032, 0.3439) #创建具有处理前权重的AT向量

DT <- c(0.4469, 0.3766, 0.3206, 0.3944, 0.3320) #创建权重在后面的DT向量治疗

DP <- c(0.0076, 0.0114, 0.0095, 0.0088, 0.0119) #使用减重数据创建DP向量

CA <- c(173.9, 208.3, 145.4, 101.7, 135.1) #使用原子钙数据创建CA向量。

2)为了用箱形图和扩展(箱线图)将处理前后权重的样本可视化，执行以下命令:

boxplot (AT, DT, names=c ("AT"， "DT")) #表示每个样本的箱线图

均值<- c(均值(AT)，均值(DT)) #将均值赋给向量Medias

点(袜子，pch=24, col="red") #用红色记号笔指出袜子。

3)为了分析数据序列与牙本质权重的正态性、同方差性和独立性的参数假设，执行命令:

夏皮罗。测试(AT) #用于处理前样品与权重的正态性

夏皮罗。测试(DT) #处理后的样品与权重的正常性

var.test (AT, DT) #用于样本之间的同方差性(方差相等)

co .test (AT, DT) #用于处理前后样品之间的独立性。

4)为了比较符合参数假设的配对数据样本，执行如下命令:

t.test (AT, DT, var.equal=TRUE, paired=TRUE) #选项(alternative=' 2。站”,conf.level = 0.95)。

5)如果数据序列没有被调整到正态分布，一个有效的选项是非参数检验，适合配对样本的Wilcoxon符号秩检验，通过执行以下命令得到:

威尔科克斯。test (AT, DT, paired=TRUE) #配对数据用参数paired=TRUE表示。

6)为了用色散图显示牙本质重量的减少与溶液中原子钙之间的联系形式，执行命令:

plot (DP, CA) #表示DP变量和CA变量的联合行为。

7)为了量化变量dentinal weight reduction (DP)与CA含量之间的关联程度，在变量趋于正态的情况下，通过执行以下命令进行Pearson相关分析:

夏皮罗。试验(DP) #量化可变体重减轻的正常程度

夏皮罗。测试(CA) #量化可变原子钙的正常程度

co .test (DP, CA) #量化前面变量之间的关联。

结果

对照溶液中未检出CA牙本质或者在双静水中。在17% EDTA溶液中接触30min后得到的牛根牙本质片重和CA含量的实验数据和统计指标的矩阵见雷竞技网页版表1．百分比变化系数，通过将标准偏差与其平均值联系起来，可以比较不同样本的离散度与正测度。AT(13.02%)和DP(13.63%)之间有相似的变异性，DP(20.33%)和CA(26.36%)之间有一定的相似性。

表1。用EDTA 17%处理前后(AT)、溶液中存在重量减轻和原子钙的牛根本质重量的数据矩阵。

在图1AT和DT数据系列的箱形图和扩展表明，它们具有相似的对称分布(在两种情况下，Q2更接近Q3，因此可以估计数据中的负不对称)，并且没有异常值(在胡须之外的数据，由星号标识)。由于盒子沿垂直轴重叠，可以假设平均权重除了随机变化外没有其他差异。然而，平均权重之间的统计差异只能通过参数或非参数假设检验来确定。

在参数检验(Student’st检验)和非参数检验(Wilcoxon检验)之间比较配对样本的正确程序的决定是基于对参数假设(正态性、同方差和独立性)的分析，其结果载于表2．正态性检验的概率值(0.7611和0.7142)都大于I型误差(0.05)，这使我们能够估计样本AT和DT来自正态分布的总体，从而正确地进行了参数程序检验的后续分析。

表2。正态性、同方差和独立性假设分析。

当对比两个样本(AT和DT)的方差时，中报告的概率值表2对于Fisher检验(0.964)，大于I型误差(0.05)，导致认为方差相等，必须采用配对样本的检验t的变量，使用参数成对=TRUE。

最后，为了确定样本AT和DT是否独立，我们使用Pearson简单相关分析，在R语言中使用cor.test函数(AT, DT)进行相关分析。中报告的概率值表2由于相关性(7.869 e-06=0.000007869)小于I型误差(0.05)，导致拒绝样本是独立的假设，那么必须使用变量var.equal=TRUE的相关或配对样本的检验t。

t检验的结果，在其版本的配对样本和方差相等，报告在表3．为了便于比较，还提出了Wilcoxon检验的结果，不适合目前的实验数据。

表3。相关样本的学生t检验和wilcoxon t检验。

检验t的概率值(0.0002545)小于I型误差(0.05)，可以得出AT和DT样本的均值差异显著(由于接触EDTA 17%，牙本质的重量损失显著)。雷竞技网页版如果样本没有调整到正态分布，则Wilcoxon符号秩检验是正确的，结果将导致不同的结论(p值=0.0625)。

在量化解决方案中DP和CA变量之间的联系之前，对的色散图图2，这使我们能够估计变量之间的直接但不显著的关联。

中提出的Pearson相关分析的结果证实了先前的假设表4，在确定两个变量的正态性后。应用于变量DP和CA的Shapiro-Wilk检验的概率值(0.6825和0.9769)表明，两者都调整为正态分布，因此与Pearson相关的分析是相关的，可以量化它们之间的关联大小。相关系数(r=0.202)表明变量之间存在直接关联，但不显著(p-value=0.7445)。

表4。减重(DP)与原子钙(CA)的相关性分析。

讨论与结论

EDTA 17%捕获双价阳离子;在…前面牙质它与钙结合，具有穿透能力[12]，使表面物质与牙本质接触，以便在修雷竞技网页版复时更好地清洁和密封。

人类在健康状态下拔下的单根牙齿很少，通常是为了矫正牙齿而获得[13］．这限制了它们的可用性。因此，用其他物种的牙齿进行了实验测试，包括牛的牙齿[14］．门牙比同一批人的门牙大，很容易从被宰杀的幼兽身上获得[15，16］．它们被用作研究灌溉溶液对根牙本质作用的实验模型[13，17，18］．

以前的在体外根据溶液和仪器的共同作用，研究证实了螯合剂的功效[19］．在目前的离体实验中，在不考虑仪器作用的情况下，edta17%与牛根牙本质接触时产生的化学作用所引起的变化。雷竞技网页版测试的时间，优于治疗期间通常应用的时间，将放大螯合剂对牙本质的化学作用。EDTA中CA的定量为17%，牛根本质DP的定量为接触溶液30 min前后的定量。雷竞技网页版

EDTA 17%缓冲液在pH值7.3时使用。它可以去除牙本质中的可溶性或部分可溶性成分，包括与钙化过程相关的非胶原蛋白磷-磷蛋白[4］．因此，螯合溶液消除了浅表钙化，也影响了牙本质的性质，如硬度，[20.]当其使用时间延长时，会显著降低[2，21］．

在根管治疗中，用于根管的清洁和构象牙根， 17% EDTA使用时间小于15分钟，并与其他灌溉溶液交替使用。在本研究中，17%的EDTA与牛牙本质接触30分钟，平均每100 ml螯合液提取雷竞技网页版155.9 mg CA，证实了先前的研究结果[3.-17］．

通过对参数假设的分析，对对应于变量AT和DT的牙本质权重的正态性、同源性和独立性进行检验，支持对配对样本使用检验t的变量和方差相等。在测试时间内，牙本质重量显著下降(0.00984 g)，得出的结论是，当得到p值=0.0002545时，平均值之间的差异非常显著。此外，牙本质重量的减少与螯合溶液中CA的存在之间存在直接联系(r=0.202)，但不显著(p=0.7445)。CA在溶液中的存在可能是由于与EDTA 17%接触时间延长导致牙本质磷光蛋白部分溶解，而不完全是由于所述溶液的螯合作用。雷竞技网页版

这些结果与之前在离体人类牙齿中的研究相吻合，该研究在灌溉期间从根管中吸入的溶液中证实了钙的存在[3.］．由于牙本质有70%的无机成分和20%的有机成分，所以它是亲水的蛋白质与富含I型胶原蛋白的基质结合的磷蛋白结合矿化前沿的钙、钠和钾，[22，23矿物质的提取会影响牙本质组织的硬度，降低其在治疗后时间内的抵抗力和稳定性。基本上，牙本质部分脱矿牙髓学的治疗可通过氢氧化钙膏体的钙化再矿化，但不可弥补的蛋白质损失影响其自然稳定性。

R语言，除了它的免费可用性和在互联网上有广泛的咨询领域，通过一个简单的例程，促进了对配对数据样本的全面统计分析。

Acknowlegment

国立大学牙科学院Tucumán (font)，科学、艺术和技术创新秘书处(SCAIT)，国立大学Tucumán (UNT)。

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