银杏叶的影响在大鼠肾缺血再灌注诱导氧化应激

文摘

银杏叶提取物是预防评估值对大鼠肾缺血再灌注诱导氧化剂压力受到瞬态单侧肾动脉结扎。口服银杏叶治疗(2毫克/公斤)是由不同的时间表之前实验诱导缺血再灌注损伤。丙二醛作为指示器了缺血再灌注损伤产生的自由基损伤。三个小时药物预处理的最突出的抑制影响的组织和血浆丙二醛脂质过氧化水平。此外,组织和血浆丙二醛水平的相对抑制允许来推断药物影响的一代,但不是丙二醛的间隙。无显著差异的结果1、2和3天治疗表明在这方面没有累积,因此安全。银杏叶治疗出现有效和安全的预防缺血后的再灌注损伤catastrophies。

关键字

银杏叶、丙二醛、脂质过氧化反应,缺血再灌注损伤。

介绍

缺血再灌注损伤的主要原因是器官功能障碍,甚至非功能移植后,边际的主要器官。缺血再灌注损伤也限制了器官移植的长期生存。缺血再灌注损伤影响O2-dependent组织和器官的细胞,如心、脑、肝、肾、肠。肾缺血再灌注损伤是急性肾功能衰竭的主要原因和肾移植功能障碍(1]。缺血再灌注损伤是一个多层面的现象链接不仅细胞损伤过程,也是一个有害的炎症反应。细胞内的损伤过程和有害事件的炎症反应是相互关联的2]。缺血组织缺氧状态伴随着减少冲刷产生的代谢物(3]。在缺血缺氧细胞损伤主导阶段。缺氧损伤开始减少线粒体能源生产。

再灌注是恢复缺血组织的血液循环。血液补给后,启动炎症反应。在这种炎症反应,巨噬细胞、内皮细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血小板、薄壁组织的细胞,以及无细胞的元素,包括补体系统、凝血级联,活性氧,一氧化氮,赞成和抗炎细胞因子除了其他介质可能参与和微血管灌注可能受损2]。尽管有明确的好处再灌注缺血组织的血液,再灌注本身可以引起一连串的不良反应,矛盾的是伤害组织(4]。事实上,再灌注损伤在文献中描述很引起器官损伤大脑,心脏,肺,肝脏,肾脏和骨骼肌肉。敏感性的组织缺血再灌注损伤(IRI)是一个主要的障碍都再灌注后梗塞和成功的器官移植。

氧气可以减少一个,两个或四个电子转移产生超氧阴离子(O2 -),过氧化阴离子(HO2)最后氢氧离子(HO)分别在生物系统。次优的抗氧化防御系统会导致氧化应激。氧化应激的主要成分是单线态氧(1 O2)过氧化物(O2 -), hydroperoxyl (O2H),过氧化氢(H2O2),氢氧自由基(OH), hypochlorus酸(HOCL)和trioxocarbonate激进(CO3.)。nitroxidant活动的增加和次优反nitroxidant防御系统导致nitroxidative压力。nitroxidative压力的主要组件是peroxinitrite阴离子(ONOO -), peroxynitrous酸(ONOOH -), nitronium离子(NO2 +),激进二氧化氮(NO2),硝基氯(NO2Cl)和亚硝酸盐离子(NO2)。没有和过氧亚硝基(ONOO -)是主要的活性氮物种在生物系统5]。

活性氧(ROS)参与许多细胞代谢和信号流程和认为衰老作用[6]。ROS容易与大多数生物大分子反应导致其退化和破坏。ROS磷脂可以通过他们的行动引起细胞损伤,蛋白质和核酸。高氧化应激导致损耗的酶和非酶的抗氧化剂7]。细胞膜不饱和脂质分子的特别容易受到有害自由基的过程,容易导致不受控制的链式反应。

因此,解毒,消除对于正常细胞生理活动和生存是必要的。ROS的关键网站攻击是细胞内细胞器的膜,如phospholipid-rich溶酶体膜。脂质过氧化脂类物质的氧化破坏的过程,涉及本地化主要在细胞膜。脂质过氧化反应,与氧化应激强度,是一种连锁反应,多不饱和脂肪酸的降解小,更多的活性粒子如共轭二烯烃、脂质氢过氧化物,硫代巴比土acid-reactive物质(TBARs) [8]。生物已经开发出复杂的抗氧化系统来抵消活性氧并减少器官损伤。这些抗氧化系统包括酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶;大分子如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白;和各种小分子,包括抗坏血酸,α-tocopherol,β-carotene, ubiquinol-10,减少谷胱甘肽、蛋氨酸、尿酸、胆红素(9]。

本研究的目的是确定银杏叶的作用在治疗缺血再灌注损伤的大鼠模型,一种oxidant-mediated障碍。植物提取物可以替代目前使用的抗氧化剂控制疾病引起的过度氧化压力,因为它们构成丰富的生物活性的化学物质。最重要的这些生物活性成分的植物酚类、生物碱、丹宁酸、苷类、黄酮类和精油。他们可能会导致新类的发展可能更安全的疾病控制代理。银杏叶来自最古老的家族生活植物物种早2亿多年。他们第一个植物再生后引爆的核弹在广岛和免费的基因突变的迹象。银杏叶的影响可能是由于单一活性成分或许多活性剂的联合行动中提取。最重要的类黄酮物质(黄酮糖苷)和萜类化合物(ginkagolides和bilobalide)。类黄酮最重要camferol苷,槲皮素和异鼠李亭葡萄糖鼠李糖。灌注缺血/ reperfused Ginkagobiloba的有益影响大鼠和豚鼠心脏体外和体内缺血大鼠心脏10]。

银杏叶提取物有建立microcirculatory功能障碍的治疗和血栓形成的风险。它显示对抗platelate激活因子(11]。银杏叶提取物的抗氧化作用已被证明为额外的有益的属性(12]。后者将特别有关减轻自由基损伤的缺血与再灌注损伤的组织。损害可能最终显示的脂质per-oxidation在受影响的组织和在流通,assayable由丙二醛水平(13]。关键考虑任何预防或减轻与银杏叶治疗这样的条件可能是药物作用的时间进程。所确定的问题是复杂的病理生理事件和动态药物动力学和/或行为。目前的报告试图检查相同,采用不同方案的银杏预处理大鼠受到瞬态实验肾缺血再灌注损伤单侧肾动脉阻塞。

材料和方法

天生的查尔斯·福斯特(CF)应变白鼠体重200 - 250 g的性行为,从中央动物医学科学研究所,贝拿勒斯印度教大学,瓦拉纳西被保存在部门动物屋260±20 c, 44 - 56%相对湿度和14小时L: D周期一周之前和期间的实验。动物提供标准啮齿动物颗粒饮食和水被随意。实验动物保健原则(NIH没有出版。82 - 23日修订1985年)随访指导方针。动物伦理委员会的批准机构拍摄前实验工作。实验组由六个动物。

动物禁食过夜是麻醉pentobarbitone(40毫克/公斤,i.p。)通过横向侧切口,左肾被访问。左肾动脉闭塞与非创伤性血管夹1小时内。因此夹被释放,允许5分钟之后(再灌注),血液样本是与心脏内的最大愿望叶面喷洒。左肾受到过程被删除,轻快地在寒冷的(40 c)生理盐水冲洗和之前在烧杯和生理盐水1下降1%β羟基甲苯的解决方案。相同的演绎组织的重量又重了。

对照组动物的遗憾是没有运营的肾动脉回旋余地。平凡的1小时后手术后期血液样本和左肾被同样的收获。所有的动物都被严厉批评颈椎错位。

银杏叶治疗

银杏叶提取物(Ginkoba-Microlab)(2毫克/ 100克)的口服药物在水1%的阿拉伯树胶悬挂。预处理之后安排下:单剂量,在肾动脉结扎前一小时,三个小时前肾动脉结扎和肾动脉结扎的前一天。多个剂量,每天两次剂量前2天前2天,每天三次。

丙二醛估计(14]

血浆丙二醛:反应混合物中含有0.4毫升的等离子体,0.2毫升的十二烷基硫酸钠,1.5毫升的20%醋酸和1.5毫升的0.8%硫代巴比土酸的水溶液。混合物终于4毫升蒸馏水和加热在950 c 60分钟。与自来水冷却后,1毫升蒸馏水和5毫升的添加了正丁醇和吡啶的混合物,混合物和大力动摇了在4000 rpm 10分钟。离心后,有机层的吸光度测量在532 nm分光光度计(Systronic)。丙二醛(nM)估计完成从标准曲线准备1,1,3,3-tetra甲氧基丙烷。

组织丙二醛:反应混合物中含有0.4毫升的组织匀浆,0.2毫升的十二烷基硫酸钠,1.5毫升的20%醋酸和1.5毫升的0.8%硫代巴比土酸的水溶液。混合物终于4毫升蒸馏水和加热在950 c 60分钟。与自来水冷却后,1毫升蒸馏水和5毫升的添加了正丁醇和吡啶的混合物,混合物和大力动摇了在4000 rpm 10分钟。离心后,有机层的吸光度测量在532 nm分光光度计(Systronic)。丙二醛(nM)估计完成从标准曲线准备1,1,3,3-tetra甲氧基丙烷。

统计分析

统计分析的数据是使用方差分析测试完成的。

结果

血浆和组织丙二醛概要表示为nanomoles每升使用1,1,3,3-tetra甲氧基丙烷标准曲线显示在表1和图1。上面的基础实验(银杏叶治疗效果不同的时间表在白鼠实验诱导肾缺血再灌注损伤)后的结果可能会吸引。

银杏是前1小时诱导肾缺血再灌注损伤在血液25%组织丙二醛水平降低65%。管理相同剂量诱导肾缺血再灌注损伤前3小时,丙二醛水平降低了95%,在血液和组织的56%。然而,银杏叶1天前也会降低血液和组织丙二醛水平分别约57%和35%。

银杏给出2天(每天两次)和3天(每天三次)不显示任何优势在银杏前一天诱导肾缺血再灌注损伤。

讨论

缺氧损伤开始减少线粒体能源生产。胞质pH值降低直接由于ATP退化,增加糖酵解速率,并可能解放的H +受损的溶酶体。胞质pH值降低直接由于ATP退化,增加糖酵解速率,并可能解放的H +受损的溶酶体。几乎同时,细胞离子体内平衡成为受损,最终导致胞质Na +和Ca2 +的浓度增加。胞质钙离子浓度的增加可能激活水解酶,如磷脂酶(尤其是磷脂酶A2)和蛋白酶(钙蛋白酶等)。水解酶可能进一步增强基质的损伤过程退化(如calpain-mediated细胞骨架蛋白的蛋白水解作用)。增加细胞可能导致钠渗透肿胀,这可能导致破坏的质膜(2)。血液补给后,启动炎症反应。在缺血性阶段电子转换酶,如线粒体呼吸链的,可能会损坏。再灌注后仍然可行的细胞,电子转移到O2的破坏酶,导致活性氧的形成,从而启动活性氧speciesmediated伤害这些细胞(15]。

肾动脉结扎诱导肾缺血再灌注损伤的实验取得了显著升高组织和血浆脂质过氧化指标丙二醛水平,验证应用程序。所有的银杏预处理指示保护作用显著降低上调。抑制脂质过氧化作用在治疗后3小时最为明显,在组织和等离子体。应该反映药物浓度的最佳课程建设在受伤的网站。组织丙二醛水平可能表明缺血再灌注损伤诱导生成自由基压力一致,更加突出。血浆丙二醛水平可能被受伤组织丙二醛棚的结果。银杏在血浆丙二醛水平效果更加突出。

无显著差异在抑制概要文件的银杏系列更密集的安排1、2和3天显示缺乏累积的研究计划。临床推理的发现是,银杏叶治疗缺血性发作后减轻再灌注损伤有保护价值甚至可能是安全的,当使用高剂量由于低累积的可能性。

引用

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