木槿花萼花青素和抗坏血酸对2,4 -二硝基苯肼诱导家兔抗氧化酶活性变化的影响

摘要

本研究评价了富花青素木槿花萼提取物和抗坏血酸对2,4 -二硝基苯肼(DNPH)诱导的家兔抗氧化酶水平变化的影响。检查的器官包括血液、大脑和肝脏。30只雄性成年兔子被分为六组。对照组1只饮水，2、3、5、6组给予100 mg/kg体重的提取物，每日1次，连续28天。治疗22 d后，第4、5、6组给予28 mg/kg体重的DNPH，继续治疗5 d，结束后处死。与无DNPH组相比，暴露于28 mg/kg体重的DNPH组过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性显著升高(P<0.05)。与对照组相比，DNPH处理后血清中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性也显著升高(p<0.05)。然而，分别以(100 mg/kg体重)HS花青素和抗坏血酸预处理对dnph诱导的生化变化具有不同程度的保护作用。与对照组相比，提取物和抗坏血酸处理显著降低了抗氧化酶活性(P<0.05)。分别检查和比较，两种处理似乎都对dnph诱导的氧化损伤提供了有效的保护，尽管花青素分离物似乎在这方面更有效。 Our findings show that Hibiscus sabdariffa anthocyanins are probably more potent antioxidants than ascorbate.

关键字

木槿，富花青素提取物，血酸酯，抗氧化酶，2,4-二硝基苯肼。

简介

sabdariffa Linn(玫瑰)属于锦葵科，原产于旧世界热带地区，可能在东印度群岛;现在热带地区都有种植[5］．这种蔬菜在尼日利亚北部广泛种植，通常用作港口草药或汤。在尼日利亚，特别是在北部地区，红色花萼的提取物是一种被称为zobo的饮料。

关于木芙蓉的民族植物学资料揭示了以下药用用途:利尿剂、发汗剂、抗菌剂、抑菌剂、轻度泻药、镇静剂、降压剂、治疗胃肠疾病、治疗高胆固醇血症、治疗肾结石、治疗肝损伤、降低血液粘度的药剂、治疗醉酒后症状的药剂[1，7］．孟花的化学成分为黄酮类化合物、棉素、木蓉素、花青素[20.］．飞燕草苷-3-单葡糖苷氰化-3-单葡糖苷的若干种化合物，它们构成了硫氰酸苷[9］．

一些研究报道，木槿可有效降低总脂类、胆固醇和三酰甘油的水平，提示木槿可能具有降血脂功能[7，13］．然而，关于木槿花萼提取物对抗氧化酶活性影响的研究较少。因此，本研究旨在评估与scorbate相比，sabdariff花色苷对2,4-二硝基苯肼诱导的兔抗氧化酶的变化的影响。

苯肼及其衍生物2,4 -二硝基苯肼毒物。它们的毒性是由于它们的脱水氧化能力。这种增加的氧化电位使它们能够氧化酶，膜蛋白血红蛋白。苯肼可引发膜磷脂中的脂质过氧化[8]而2,4-二硝基苯肼已被证明能够诱导家兔脂质过氧化和其他氧化损伤[14，15，16] and rats [10］．2,4- dnph诱导脂质过氧化和其他自由基损伤的能力使其不适合用于测试木槿花萼提取物可以保护组织免受氧化应激诱导的变化和其他生化变化的说法。

材料与方法

植物材料

鲜花萼采自尼日利亚夸拉州伊洛林大学植物园。它们在持续的气流下干燥，保持25℃，直到恒定重量。鉴定和分类分类由尼日利亚埃多州贝宁市贝宁大学植物生物技术系donet植物标本室进行。

动物

本研究使用的30只兔(Oryctolagus cuniculus)来自贝宁市的私人饲养员。购买时体重800-1000克的幼马经兽医确认健康状况良好。将幼兔关在100cmX40cmX30cm的金属丝网组成的临时兔笼中，光照/暗光照14小时/10小时。它们被喂食种植者麦芽粉(从尼日利亚埃多州Ewu的Bendel Floursnd饲料磨坊获得)和水。在整个治疗期间，通过适当的兽医管理，保护幼鱼免受寄生虫侵害。

从植物原料中提取富花青素的制备

根据我们以前的报道(Ologundudu etl.)中描述的方法，从木槿中提取富含花青素的提取物。， 2009a, b)。

实验设计

本研究选用体重800-1000克的30只兔子。他们被随机分为六(6)个实验组，如下图所示。试验期28 d。

第1组:水处理对照。每只家兔给予蒸馏水2.5 ml/kg体重

第2组:以100 mg/kg体重的剂量给家兔灌胃富花青素提取物。

第三组:每只兔灌胃scorbate，剂量为100 mg/kg体重。

第四组:在死亡前28天研究期的最后5天，每只兔腹腔注射2,4 - dnph，剂量为28 mg/kg体重。

第5组:本组家兔从第24天(2,4- dnph处理第5天)开始，每天腹腔注射富花青素提取物100 mg/kg体重，连用28天。

第6组:从第24天(2,4- dnph处理5天)开始，每天腹腔注射2,4-二硝基苯肼，以100 mg/kg体重的剂量给每只兔，连续28天。

生化决定

采用Sinha(1971)的方法，通过H₂O₂．用Misrand Fridovich(1972)的方法测定了超氧化物歧化度。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的偷窃性用英国Randox实验室的试剂盒测定。手册/传单上描述了方法。

Statisticalnalysis

使用SAS软件(SAS Inst. Inc.1999)对所得数据进行标准方差统计分析(ANOVA)。采用同一软件的Duncan程序比较治疗手段。显著性水平为P<0.05。

结果

本文报道了DNPH、hsnthocyaninsnscorbate对家兔血清肝脏中G6PD活性的影响表1DNPH组(4组)显著(p<0.05)提高血清G6PD水平。与对照组相比，在DNPH给药前分别接受富氰氰酸提取物和scorbate的兔子(第5组和第6组)血清和肝脏中酶的水平均未显示，但与单纯DNPH组相比，血清中酶的水平显著降低。

本文介绍了DNPH、hsnthocyaninsscorbate对家兔血清、肝脏和大脑过氧化氢酶特异性的影响表2与对照组(组1)相比，给予DNPH(组4)可使血清催化活性显著降低(p<0.05)，但可使大脑和肝脏的酶水平显著升高。与对照组相比，给予nthocyanin extractlone(组2)可使肝脏酶水平显著升高。与只给DNPH组(4组)相比，给DNPH组(5组)和给DNPH组(6组)的兔血清过氧化氢水平显著升高，而肝脑中过氧化氢水平显著降低。

本文介绍了DNPH、hsnthocyaninsnscorbate对家兔血清、肝、脑SOD特异性的影响表3．与对照组相比，DNPH处理显著降低血清SOD活性(p<0.05)，但显著提高肝脑SOD活性(Group1)。nthocyaninndscorbate组在给药前(第5组和第6组)与对照组相比，组织中酶的活性没有显著差异。

讨论

近年来，天然氧化剂在生物系统中的保护作用及其作用机制成为人们关注的焦点。酚类化合物广泛分布于植物中，目前被认为是本抗氧化剂，能够防止生命系统中的氧化损伤(Wang etl, 2000;Stanner etl, 2004)。本文研究了氨基青素类酚类化合物及其抗氧化作用，并将其与血酸盐进行了比较。

Glucose-6-phosphate脱氢酶

给药DNPHnd可诱导组织毒性，毒性是通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶血清特异性的显著增加而建立的[6，18］．DNPH的这一特性已被很好地描述，它源于其细胞破坏和氧化损伤导致溶血。还原性谷胱甘肽维持红细胞膜的完整性，而还原性谷胱甘肽的水平又取决于磷酸戊糖途径中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶反应的代谢产物NADPH的细胞水平。因此，观察到的在dnphd给药条件下葡萄糖-6-磷酸脱氢酶特异性的显著增加是毒性反应，这对于维持红细胞膜的完整性和预防氧化损伤是必要的[18］．

每一种scorbatendnthocyanin分离物的处理对肝脏血清中G6PD水平没有显著影响，但在DNPH处理前预防性给药每种scorbatendnthocyanin提供了显著的保护，这可以通过与DNPHlone组相比，在DNPH处理前预处理过每种scorbatendnthocyanin提取物的兔血清葡萄糖-6-磷酸脱氢酶特异性水平的显著降低来证明[18，22］．这表明抗氧化剂制剂对血液细胞的化学损伤具有预防性的保护作用。此外，两个处理组(第5组和第6组)之间没有显著差异，这表明两个nththocyaninsscorbate在抵消dnph诱导的G6PD偷窃性变化方面的效果是相当的。肝脏中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量丰富，但并非绝对来源，但其在肝脏匀浆中的活性可以帮助我们了解肝脏正常细胞代谢过程中可能产生的基础自由基，以及细胞对产生的自由基的反应。此外，由于一些兔子用DNPH治疗，有必要了解肝细胞如何管理氧化损伤及其涟漪效应。

记录到的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在肝脏中的特异性增加，与水对照相比，nthocyaninsnscorbatations的结果可能表明制剂能够单独诱导该酶在肝细胞中的特异性表达[17，19］．

DNPH可导致肝脏匀浆中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶降低。DNPH的这一特性已被很好地描述，它源于其细胞破坏和氧化损伤[8，15，16］．这些因素导致细胞坏死，随着pH变化，细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶泄漏出肝细胞进入血液，从而解释了在肝脏给药dnphh条件下葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的特异性降低。后一种现象可能是用DNPH处理的动物血清中酶水平升高的原因[12，16］．预防性给药的每一种氧化剂制剂和随后的DNPH兔治疗显示了相似的模式，分离出的花青素表明，与scorbate相比，花青素具有更高的清除DNPH产生的自由基的能力，并降低葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的表达[4］．

过氧化氢酶

与水对照相比，dphd组肝脏脑过氧化氢酶特异性显著提高(P<0.05)。这可能是由于细胞需要解毒在DNPH中毒期间产生的增加的过氧化氢。抗氧化酶，如过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物转移酶存在于氧气处理细胞中，这些细胞是细胞抵御氧化损伤的第一道防线，在它们相互作用形成更多活性自由基之前分解o2 H2O2 [2，8，14，16］．在dnph处理的模型中过氧化氢酶偷窃性的增加是有效保护的必要条件。过氧化氢酶血清活性的显著降低是由于DNPH的血毒作用导致产酶基因水平的降低，从而导致血清中酶水平的降低。

先给nthocyanin提取物和维生素C，然后用DNPH处理，与DNPHlone处理的家兔相比，肝脏脑过氧化氢酶的特异性显著降低，而血清中酶的特异性相对于DNPH处理的家兔显著提高，并保持对照水平。实验结果表明，nocyanin对DNPH的抗氧化作用可能比scorbates更有效，第5组和第6组的肝脏脑的催化作用有显著差异。

值得注意的是，比较三种组织中过氧化氢酶的活性，血清最低。这种低活性可能是由于其他可解毒过氧化氢的物质，包括膳食酸氧化剂和胆红素的存在，后者是血红素降解的产物，主要存在于血细胞循环中。

超氧化物歧化酶

与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶一样，超氧化物歧化酶也是一种在组织中广泛分布的酶，其作用是早期催化超氧化物解毒的酶之一，已被充分证明[3.］．它不仅代表了超氧化物代谢酶的第一种主要酶，而且它的缺乏与危及生命的病理状况有关[6］．它的确定在本研究中具有重要意义，因为它代表了防止超氧自由基与磷脂的不饱和脂肪基叠加时引发过氧化反应的主要酶;预示其他下游反应的反应，如红细胞溶血和组织坏死[22］．

用DNPHlone处理的兔血清中SOD特异性的显著降低是由于DNPH诱导红细胞溶血的事实。细胞溶解主要是由细胞膜脂质上的自由基反应引起的，自由基反应最终耗尽，从而降低了超氧化物歧化酶的血清特异性[16］．

花青素提取物(组2)和血酸酯(组3)处理组的肝脑超氧化物歧化酶特异性与水对照无显著性差异。然而，组2的SOD特异性高于组3，尽管差异不显著。另一方面，与水对照相比，DNPH处理显著提高了超氧化物歧化酶特异性(P<0.05)。DNPH在肝脏中的累积一定显著增加了超氧化物的生成速率，可能高于基础酶活性所能应付的速率。因此，为了挽救超氧化物组织坏死的过氧化物性细胞，通过诱导n SOS反应来提高超氧化物歧化酶的细胞表达，这就是dnphd给药后肝脑超氧化物歧化性显著增加的原因。与DNPHlone处理相比，预防性给药硫氰酸苷提取物和维生素C，然后用DNPH处理，可显著降低超氧化物歧化酶的特异性。而NOVA在两组间无显著性差异。结果表明，由于它们的极性相似，氰氰酸酯提取物和蛇血酸酯具有相似的活性。

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