地方病的种植番茄和微生物感染筛查在伊巴丹,尼日利亚

文摘

零星的疾病爆发在伊巴丹的商业农场,2011年尼日利亚和调查是由一个团队的病理学家。疾病的诊断和病理进行筛选,结果番茄植物遭受多重感染煽动的多样化的真菌菌株。

标准的实验室技术被用于隔离的特征。也进行了致病性和严重程度的测试(在体外和在活的有机体内)。这是观察到,根霉stolonifer,来自烟曲霉菌,答:sclerotirium每60%感染引起。观察到的症状包括叶,叶子枯萎的叶子和低严重坏死,萎蔫和白色菌丝的形成质量根,和在极端情况下死亡的整个番茄开枪。同时,水果腐烂和病变观察绿色(生)和成熟的水果。一个共同疾病管理策略迫在眉睫,势在必行。

关键字

坏死、疫病诊断,病变,菌丝,致病性

介绍

自发疾病暴发报告在一个商业番茄在伊巴丹,尼日利亚在2011年进行了一项调查来确定零星的疾病暴发的原因。几个品种的番茄种植蔬菜在商业领域受到影响不成熟(绿色水果)和成熟阶段(成熟的水果)。水果病变,并观察整个番茄叶坏死和死亡。可见菌丝生长被发现在一些感染番茄植物的根际环境表明真菌物种的角色发展的疾病。受感染的番茄田间测量周长约100000平方米。这是位于Apete,尼日利亚伊巴丹的郊区社区。

番茄(Lycopersicon esculentum轧机。同义词茄属植物Lycopersicon)富含维生素a(视黄醇:需要良好的视力和健康的皮肤),维生素C(抗坏血酸-需要提高人体的代谢功能和其他酶反应),番茄红素,和钾(1];已经走过了漫长的道路,不仅在距离它的起始点,而且在品种改良方面,疾病的弹性,增强存储品质和加工技术;今天,大量的转基因品种和基因修改后的混合动力车和胞质杂种是种植在世界所有地区2]。

这种多功能性加上新鲜水果的日益增长的需求,提供了一个倾斜的发展番茄的主要作物之一世纪(2]。新鲜的番茄果实的高需求的增长是威胁主要领域损失的番茄病原体(3),新鲜水果和储存设施不足,基于他们的高度易腐性质(4]。多数疾病暴发的诊断病例番茄作物生理活动的结果的土壤和空气中真菌承担(3];一些细菌和一些番茄果实蠕虫Heliothis来,导致青少年番茄叶和射击伤害(2]。

迈克尔et al。3)报道,大量的真菌菌株可以感染番茄植物和水果在球场上,在采后损失。Alippi et al。5)和Saygili et al。6)也公布了零星的自发传播的细菌性疾病栽培番茄在阿根廷被称为“番茄髓坏死”(土传病原引起的“假单胞菌corrugata”)导致大规模破坏的番茄植物和国家经济的巨大经济损失。Kwon和香港4),记录了番茄果实的灾难性爆发的软腐病在Jinju市场,由真菌引起的“毛霉菌racemosus”,这也导致了巨大的经济和金融损失。

因此,这项研究是确定的因果代理人进行自发的疾病爆发在商业蔬菜,西红柿的入口和感染的可能模式植物,过冬的来源可能感染的病原体和疾病的控制。这将会是一个漫长的过程在打击食品变质和在非洲和世界的粮食短缺。

材料和方法

农场的描述

商业番茄农场位于Apete村,在伊巴丹、尼日利亚伊巴丹的郊区。农场的植被和剪裁与经济重要树(棕榈树、芒果和木瓜),蔬菜(番茄、胡椒和其他绿叶蔬菜),和其他植物如木薯、菠萝、农田和玉米也种植的植物。农场位于尼日利亚的热带雨林地区植被带,因此享有最佳的气候条件有关农业活动。

GPS坐标

商业蔬菜农场位于世界地图在纬度:07年26°i57ii N和经度:03 52°i20ii E,分别。农场的坐标确定使用卫星全球定位系统(GPS)追踪所示图1。

的天气条件下蔬菜农场

商业蔬菜农田位于Apete,伊巴丹;欧州,尼日利亚每年享受周围降水从788毫米到1884毫米,年平均平均温度约为26.6°C和不断高与年平均相对湿度大于80%。

野外观测和疾病筛查

几个品种/番茄品种筛选手动在球场上(使用一个标准化的诊断过程)疾病的存在。感染射击,水果和土壤样本孤立在实验室进行分析。

样品收集

感染样本编号约三十六(36)番茄芽和水果被随机收集的六(6)不同品种的番茄植物;他们仔细地标记和放置在一个无菌的聚乙烯袋。土壤样本也来自感染番茄植物的根际环境(基本上从番茄芽显示严重疾病症状)和包装使用无菌过滤文件;样品被转移到病理学和真菌学研究实验室的植物学、伊巴丹大学;疾病诊断和进一步分析。

隔离的病原生物(s)

因果的过程用于隔离代理是一个修改的方法论Ijato et al。7]。感染叶样本切成小块的径向直径5毫米软木钻孔机使用无菌5毫米,表面在75%乙醇消毒和无菌蒸馏水冲洗在三个独立的变化,消除乙醇的痕迹;然后他们被接种使用直接电镀技术的复制刚做好的(即满力量。39 g / L)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。

感染番茄芽的茎和根被抽汲10%次氯酸钠消毒浮出水面。他们后来把维管束纵向暴露。已经暴露的茎和根是5毫米的进一步切成更小的单位垂直长度,在75%的酒精消毒,清洗在三(3)连续变化的无菌蒸馏水,然后镀刚做好的马铃薯葡萄糖琼脂(用于真菌生长)和营养琼脂(细菌增长)。培养样本标准孵化室温度(25±2°C),为期七天的真菌隔离和最多48小时细菌分离,之后得到了纯粹的文化从直接筛选和一系列的文化隔离。

分析样品制备

土壤样本受感染的植物被风干24小时在室温下的实验室。约,1 g的每个土样悬在10毫升无菌蒸馏水一段30分钟与常规手工动摇加强同质化。一毫升每个解决方案(股票)用移液器吸取到9毫升无菌蒸馏水滴定进试管。这个过程重复九(9)更多的试管,每个都包含9毫升无菌蒸馏水。稀释10倍¹,10²,10³,10⁴,10⁵,10⁶,10⁷,10⁸,10⁹,10^-10年获得了。

接种是使用倒板技术/方法完成的。从每个稀释因子一毫升无菌引入刚做好的媒体(PDA和营养琼脂)。中轻轻传得沸沸扬扬,倾析除去多余的水分。当时在25±2°C)孵化24小时- 48小时(用于细菌生长)和7天(真菌生长)在一个孵化器。

测定培养液大小(微生物负载)

每个分离纯培养是生长在一个完整的强度(39 g / L)马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)偏14毫升麦卡特尼瓶子和作为股票的文化。7天老纯培养分离获得的系列稀释从受感染的根际环境用于收集土壤样本进行这个实验。培养基是无菌蒸馏水淹了,夹杂着倾析到无菌的容器;提取孢子。1毫升孢子悬浮液的校准使用孢子计数器(伊巴丹的中央Laboratory-University)和孢子的数量每毫升被记录。获得由此产生的孢子价值乘以相应的稀释因子,给了一个真正的代表实际孢子计数。

识别因果代理(年代)

病原体的识别是使用标准的实验室技术完成的。识别隔离的协助下提供的信息Alexopoulos et al .,埃蒙斯et al .,基思•塞弗特约翰et al .,卢恩,Sarbhoy, Schipper [8- - - - - -14]。幻灯片准备每个隔离使用乳酚棉蓝色污点并检查Spectro-photomicroscope下。每个隔离仔细识别是基于其菌丝形态和取向文化板块;代谢物的生产;和存在的各种果期的身体像sporodochia(大孢子),phiallides,小孢子、分生孢子、孢囊。

致病性试验

为了建立隔离的事实从病变样本实际上因果代理获得疾病(症状)观察到的番茄植物和水果;隔离后受到screen-house分析方法引入的亚历山大·科赫(15]。

番茄种子的来源

三(3)品种的番茄种子被用于实验。他们是樱桃番茄(Lycopersicon esculentum var. cerasiforme)、醋栗番茄(l . pimpinellifolium),l . esculentum var。esculentum。种子从国家获得遗传资源与生物技术中心(NACGRAB)。

土壤灭菌

土壤的方法用于灭菌实验基本上是一个修改的标准技术/方法所使用的植物育种家在农村和小规模的农业。表层土壤收集从托儿所的植物学、伊巴丹大学。土壤是加载到波谷,浇水和蒸温度范围100°C之间一(1)小时焚化炉的控制;为了消除痕迹的自然“动植物”社区土壤基质。土壤被允许冷却之前转移到屏幕上种植。

土壤分析

土壤分析进行了使用标准技术。这个分析是确定土壤的微生物负载未感染土壤样本化验。1 g的消毒和未杀菌的土壤样本收集并适当地标记。灭菌的土壤样本在100°C六(1)小时。收集到的样本无菌引入到试管连续稀释的暂停了;1毫升稀释10倍³和10⁶无菌接种使用倾注平皿法,到刚做好的马铃薯葡萄糖琼脂(用于真菌生长)和营养琼脂(细菌增长)。

孢子悬液的制备

隔离是成长为成熟(如纯文化)。最后7^th天,包含纯粹的文化板块分离与无菌蒸馏水被淹没,夹杂着倾析成不同的无菌锥形烧瓶和标示隔离。串行孢子收集样品进行稀释和培养液大小决定使用血球计。培养液的大小保持在3.2×10⁶孢子每毫升的孢子样本。

分析实验设计为屏幕上房子

析因设计(FD)作为实验的设置。测试植物被铺设在3×3×13格式的屏幕。实验中获得的数据被表示为”意味着±标准差(SD)和方差分析进行了使用Minitab 16.0统计软件,统计上显著的手段分离用最小显著差(LSD),邓肯多个范围测试(DMRT)和渔民的成对比较(FPC)。图表和图形被雇佣为描述性的定性和定量数据的工具。

现场试验

第一个实验是为了确定每个隔离的作用的复制疾病症状的观察。大约50毫升的孢子悬液无菌浆移植幼苗的根际环境,然后是表层土壤覆盖着。实验被允许运行一段一个月,在此期间农艺参数的番茄幼苗株高、叶面积、茎周长,叶子,和数量的分支;每周访问和番茄植物可以生长在果期阶段进行密切观察屏幕的植物学。Re-isolation介绍的隔离进行了选定的样本显示典型的疾病症状。

结果

迄今为止的结果表明,隔离复制测试植物上的疾病症状不同程度的异常控制设置后第七(7^th)天接种(图2和3)。这一趋势观察14天(图4和5)。

这是观察到疾病严重程度不同的水平非常每周从物种的接种(图2- - - - - -5)。表示在表1,这是观察到根霉stolonifer,曲霉菌glaucus, a . sclerotirium a . terreus镰刀霉scirpi和f . verticilloides都有60%的疾病表现不同的测试植物用于实验(+ + +);然而,a . clavatus a . flavus f以上和答:尼日尔大约20%的水平温和重大疾病症状的表情实验番茄植物(+)。病圃和答:来自烟每个有五分之二的测试植物感染(+ +)即40%症状表达基于微生物活动在番茄(P < 0.05) (16]。

表1。疾病严重程度评分采用现场实验在屏幕上使用无病番茄植物。

同样的效果被发现在不同的两个测试植物在第七天(表2和3)。这是观察到,r . stolonifer,来自烟曲霉属真菌,答:sclerotirium表现出高水平的表达了观察到的番茄植物生理疾病症状(+ + +),计算下降60%的身体区域内测试的植物;紧随其后的是a . glaucus a . terreus flavus和f .以上(40%);另一个隔离对番茄植物几乎没有显著的影响(20%)。一个类似的趋势也描述了不同的三个番茄植物等生物a . glaucus来自烟和答:terreus显示60%(+ + +)疾病接种番茄植物表达,得到了r . stolonifer a . sclerotirium a . clavatus flavus和f .以上各有40%的疾病效果;而f . scirpi f . verticilloides圃和答:尼日尔有20%的疾病表现在植物接种后7^th天接种(表4)。

表2。疾病严重程度的测量和每个隔离的攻击性水平无病番茄幼苗在7天。

表3。疾病严重程度的测量和每个隔离的攻击性水平对疾病在第14天免费的番茄幼苗。

表4。疾病严重程度百分比的真菌分离后的7天免费的番茄幼苗接种到疾病。

此外,它是观察后14^th天的接种a . glaucus a . terreus a .来自烟sclerotirium和根霉stolonifer保持高度致命的至少两(2)的三(3)品种的番茄植物用于实验,生产类似症状观察到的字段(图6- - - - - -8),约60%的番茄芽感染(表5)。虽然隔离像f . verticilloides a尼日尔,a . clavatus a . flavus f以上scirpi和病圃急剧下降的诱发疾病接种番茄局势的能力(P < 0.05),平均水平的疾病的表达在三(3)≤40%的番茄品种用于实验(图9- - - - - -13)。

表5所示。疾病严重程度百分比的真菌分离后的14天免费的番茄幼苗接种到疾病。

讨论

长期接触的外推真菌病原体健康番茄幼苗感染导致生产(在球场上所观察到的类似)番茄植物经过一段时间的紧张的观察的一个缩影。大多数隔离能够复制疾病症状观察到在球场上,和症状观察(叶,枯树叶,较低的通用坏死、萎缩和死亡的番茄植物)观察基本上老叶子,茎和根的植物最接近土壤的影响,而年轻的叶子和那些新成立的没有显著影响。

这可能表明入口和传播疾病的模式(从下到上的植物);和病原体的起源(土壤在自然界承担)如上所述由Michael et al。3]。因此,它是可能的疾病传播可以通过雨水飞溅或溢出的水从土壤受感染。感染类似的模式也被联合国粮农组织(粮食及农业研究组织)的美国2]。

病原体如a . terreus a . sclerotirium a .来自烟glaucus,根霉stolonifer表现出高水平的侵略在所有品种的番茄植物调查。疾病症状产生增加,变得更加明显,因为它遍布整个拍摄关于时间,年龄和发展阶段的番茄植物。疾病的趋势,Alippi报道的同义et al。17)和Saygili et al。6]。这个结果也符合文件/报告的食品和农业研究组织美国(2]。

多数的番茄植物接种推断病原体显示降低株高,茎周长,传单,叶形线树枝和树叶的数量在宁静的致病性试验进行了隐居的缩影。这观察可能一定程度上是由于这一事实的影响高度复杂的致病性真菌病原体的活动(在宿主植物)有负面影响在发展阶段,可能感染番茄幼苗的生长速率,导致失去活力(萎缩),折旧在茎周长,叶面积减少;建议的无报酬的损失光合作用活动由于减少工厂规模和产量下降的番茄植物。这些发现与报告的食品和农业研究组织美国(2),说明大多数的伤害,在番茄植物病原体番茄的品质和产量有很大的影响在不同的发展阶段。

番茄与尖孢镰刀菌接种,答:clavatus和答:尼日尔显示积极增加宿主植物的农艺参数,如株高、茎围长和叶面积;虽然症状如叶,叶面坏死和疫病的感染番茄植物仍然存在。农艺的增加参数的一个可能的解释观察到的可能是由于这样的事实,这些真菌分离株的活动可能会引发一些生长激素的反应内在的寄主植物;或者这些病原体可能会产生大量的生长激素,导致经济增长率的增加或受影响番茄的加速发展阶段;这种情况是愚蠢的稻秧真菌引起的疾病”藤仓赤霉”(syn -镰刀菌素moniliforme和镰刀菌素verticilloides在日本(报道)15)在感染水稻营养生长很好。

这份报告与报告由默罕默德,他明确表示,尖孢镰刀菌引起的比例显著降低萌发和减少一些农艺参数如株高之间的其他形态数据表示感染番茄植物。

结论

病的病原体分离番茄样品产生相同的症状与最初观察到在球场上。疾病症状一般叶枯病、本地化和坏死,腐烂的番茄幼苗,枯萎和死亡的成熟植物成熟和未成熟的浆果是最常见的。健康番茄果实,与土壤接触了病也表明负责传染病的病原体主要是土壤。雷竞技网页版

目前在尼日利亚,自发的疾病爆发的报道领域作物和蔬菜,尤其是番茄一直关注农民和消费者的主要来源的番茄和番茄制品;最终在短收入下降的政府形式应付税下降货物。因此,十分关注应该显示和解决方案提出应对这些微生物叛乱分子和威胁他们开展番茄在其他缓解食物短缺材料和加强食品安全的国家和世界。

承认

我将感谢首席约翰o .和夫人的努力为他们的道德和以斯帖Etaware对完成本研究的财政支持。你的爱心和善举不会被奖赏,上帝保佑你。

道德的声明

这是确认教授o . j . Oyetunji宣称他没有利益冲突,他积极参与研究领域和材料采购的疾病在实验室分析。

引用

1. www.wizardrecipes.com/blog
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