表皮生长因子受体和Ki-67在成釉细胞瘤中的免疫组化表达

摘要

成釉细胞瘤是发生在颌骨的牙源性肿瘤中最常见的良性肿瘤。然而，手术后的复发率很高。表皮生长因子受体(EGFR)在某些类型的肿瘤如实体性多房性成釉细胞瘤的发生和行为中具有重要作用。Ki-67是一种很容易在增殖细胞中检测到的分子，以便了解肿瘤内细胞的生长速度。本研究的目的是检测EGFR和Ki-67的表达率，以阐明它们在病变生物学行为中的作用。大马士革大学牙科学院口腔病理科在2005年10月至2010年10月期间接受了25例成釉细胞瘤标本。用抗EGFR和抗Ki-67单克隆抗体进行免疫组化研究。本研究将这些牙芽与10个正常的牙芽进行比较，这些牙芽是根据相关法律从一个7个月大的流产胎儿身上取下的。结果显示，采集样本的患者平均年龄为43.2岁。观察到影响女性的趋势(72%的受影响患者为女性)。 Observed tumor types were as follows: 12 follicle type, 7 plexiform type, 6 of them were admixed. EGFR was found to be highly expressed in 19 specimens, mildly expressed in 5 specimens, and negative in only one specimen. Ki-67 expression was close to that of EGFR. There was a statistically significant relationship between the expression of the EGFR and Ki-67 monoclonal antibodies and the different patterns of the tumor islands (p<0.01). In conclusion, ameloblastoma is a positive EGFR tumor. There was a high Ki-67 index, which is associated with a high proliferation rate, which may indicate a high recurrence rate as proven by other studies

关键字

造釉细胞瘤， EGFR，免疫组化，Ki-67，单克隆抗体，蛋白表达

简介

成釉细胞瘤是一种生长缓慢、局部侵袭性的牙源性肿瘤肿瘤具有潜在的破坏性行为和高复发率[1］．有可能转化为恶性肿瘤，尽管它们通常是良性的。然而，它们生长迅速，可以改变和破坏周围的骨骼。成釉细胞瘤发生于颌骨，常发生于第三磨牙部位，很少发生于眼窝或鼻窦组织[2］．世界卫生组织在2005年的肿瘤分类中将成釉细胞瘤归类为一组肿瘤;本组肿瘤的每一种肿瘤都有自己的临床表现和影像学表现。局部侵犯和邻近结构的破坏是成釉细胞瘤的危险来源[3.，4］．然而，手术后的复发率很高。在过去的二十年中，人们进行了大量的免疫组化研究，试图阐明这种肿瘤的病因和治疗方式[5］．表皮生长因子(EGF)是ErbB家族的一员，是一种跨膜糖蛋白，通过与其表皮生长因子受体(EGFR)结合来刺激细胞的生长、增殖和分化，而Ki-67是一种可以在生长细胞中容易检测到的分子，以了解肿瘤内细胞的生长速率[6-9］

材料与方法

本回顾性研究对2005年10月至2010年10月大马士革大学牙科学院口腔病理科接受的25例下颌骨成釉细胞瘤标本进行了研究。临床资料从档案病人档案中检索。每个标本都有编码，出于伦理原因，患者的名字没有显示出来。对患者年龄、性别、肿瘤大小、部位及复发情况进行了修正。所有病例均经复查，除组织病理学报告外，根据临床资料及其他调查进行精确科学诊断。

这项研究还包括10个牙芽(发育阶段不同)，这些牙芽取自一个7个月大的流产胎儿，仅作为对照，根据相关法律。

组织学部分

从存档的成釉细胞瘤组织的福尔马林固定石蜡包埋块中取4 μm厚的连续切片，常规H和E，其他切片在带电载玻片上制备免疫组织化学使用3%双氧水15分钟后，内源性过氧化物酶活性被阻断。然后对载玻片进行免疫染色。在奥林巴斯光学显微镜下观察每个标本的3个肿瘤切片。

免疫组织化学

用标记链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术对肿瘤切片进行EGFR和Ki-67免疫组化分析。所用抗体为抗EGFR的单克隆抗体。(DAKO, DakoCytomation)和Ki-67(克隆MIB-1, N1633, DAKO Corporation)。EGFR免疫染色需要0.2%胰蛋白酶提取抗原，Ki-67免疫染色需要1mm EDTA (pH 8.0)在微波炉中预处理20分钟。进行适当的阳性和阴性对照。芽取自流产7个月的胎儿(考虑到已批准的伦理标准)，并用于EGFR阳性对照，Ki-67扁桃体(根据制造商数据表的建议)。作为阴性对照，切片染色时不添加一抗。

免疫组织化学分析

两名病理学家进行免疫组化评估。幻灯片在X40中观看放大．选择10个细胞区域，在X400倍镜下进行评估。

Egfr评估

当免疫组化结束时，靶抗原与添加的抗体发生反应，使切片呈棕色，这意味着与对照组相比反应性为阳性。

对所有切片进行EGFR评估(根据制造商数据表)。染色强度评价为+++;免疫组化染色阳性为++ +，阴性为- [10-13］．

Ki-67的评估

核Ki-67标记与表达染色强度的关系评价为+++;免疫组化染色阳性为++ +，阴性为- [14］．

统计分析

所有临床和免疫组化参数均采用统计学分析，使用SPSS 17版程序进行评估。比例比较采用卡方检验。小于0.05的概率值(p-value)被认为有统计学意义。

结果

这项回顾性研究包括25个样本。患者年龄21 ~ 80岁，平均年龄43.2岁。50岁以下患者占72%，50岁后患者占28%。患者年龄的算术平均值为43.2岁。关于患者年龄分布的进一步信息见表1．男性7例(28%)，女性18例(72%)。

表1。按年龄组的病例分布情况。

本研究发现最突出的组织学类型是卵泡型，有12例。7例为丛状，其余6例均为囊性岛状(图1和表2)．

表2。病例按组织学类型分布。

免疫组织化学结果

EGFR高表达8例，中表达11例。其中滤泡型12例(图2、3及表3)．

表3。EGFR的免疫组织化学表达。

Ki-67高表达7例，中表达13例，微弱表达4例，未表达1例(图4和表4)．所有高阳性表达的病例均为肿瘤滤泡病理类型。患者年龄与Ki-67之间的关系研究显示无相关性;卡方Pearson相关性无统计学意义(P>0.05)。

表4。Ki-67的免疫组化表达。

讨论

EGFR基因突变可导致不受控制细胞分裂以及癌症的发展[15-17］．EGFR上调似乎在肺癌等多种肿瘤中选择性表达[18-20.］．

本研究显示了人体生长因子受体检测仪的影响。表皮生长因子受体在周周细胞和中心细胞之间有明显的影响肿瘤每个标本中的上皮岛。增殖活性随着肿瘤岛的增大而增加。结果显示，8个样本(32%)表现为强表达，11个样本(44%)表现为中等表达，5个样本(20%)表现为弱表达。只有一个样本对EGFR有负面影响。一些研究表明，膜质部分和细胞质部分肿瘤细胞采用EGFR免疫组化染色，而其他仅采用膜性染色[6，7］．

根据这些研究，必须预期成釉细胞瘤侵袭邻近组织，因此有复发的倾向。这些肿瘤的治疗建议根治性切除受累骨。

12例肿瘤组织类型中滤泡型EGFR高表达(48%)，滤泡型与EGFR有显著相关性(P<0.05)。其他组织学类型表达较少(P>0.05)。这表明传统类型的肿瘤岛代表中央卫星样细胞滤泡类型与EGFR相关。其他研究表明，这些细胞中的一些生物学因素影响肿瘤的增殖。我们可以根据肿瘤的组织学分类，通过测量细胞分裂指数来指示肿瘤的生物学行为及其对治疗和预后的反应[5］．

与其他研究一样，本研究Ki-67表达率较高，这可能与肿瘤的高复发率有关，也可能提示其预后。Ki-67是有丝分裂特异性的增殖标记物，从未在细胞周期的非增殖阶段发现。Ki-67在滤泡型中高表达(60%)，并与EGFR显著相关。其他类型较少出现，这可能是由于本研究的样本量较小[21-23］．

在本研究中，患者的年龄与EGFR的表达呈负相关。年轻患者免疫组化表达最阳性;年轻患者的肿瘤在生物学行为上更活跃，这就是为什么如果不积极治疗并完全切除，它的复发率很高。虽然年龄与Ki-67之间没有明显的关系，但这可能是由于不同年龄组肿瘤细胞的活跃增殖率不同所致[14，24-29］．

结论

Ki-67状态评估与常规组织学评估可以帮助提供更多关于肿瘤生物学行为的信息，而EGFR可能是一类不断扩展的抗癌治疗的靶点。由于成釉细胞瘤是egfr阳性的肿瘤，抗egfr药物可以被认为是减小大肿瘤的大小，并治疗靠近重要结构的不可切除肿瘤。识别肿瘤中的增殖活动可能有助于预测其生物学行为。Ki-67蛋白是维持细胞周期所必需的核非组蛋白。Ki-67在活跃细胞周期的所有阶段(G1、S、G2和M期)增殖细胞中表达，但在静息(G0)细胞中不表达，这就是为什么Ki-67被用来确定成釉细胞瘤的增殖率。

参考文献

1. Eversole LR。恶性上皮性牙源性肿瘤。SeminDiagnPathol。1999; 16:3l7 - 324。
2. 考森R和奥德尔e考森的蛋白石病理学和口腔医学要点。国际学生版。Elsevier科学有限公司。2003.
3. Funaoka K，等。23例成釉细胞瘤增殖细胞核抗原(PCNA)的免疫组化检测中华口腔肿瘤杂志，1996;29(2):329 -332。
4. Barnes L等(2005)世界卫生组织肿瘤分类。头颈部肿瘤的病理学和遗传学。IARC出版社，里昂。
5. Fain berg SE和Steinberg B.成釉细胞瘤的外科治疗。文献现状。口腔外科，口腔医学，口腔病理学，1996;81:383-388。
6. Shrestha P，等。牙源性囊肿和肿瘤中的表皮生长因子受体。中华口腔疾病杂志1992;21:314-317。
7. Ueno S，等。成釉细胞瘤表皮生长因子受体表达的免疫组化研究。《病理学杂志》1994;173:33-38。
8. Bologna-Molina R，等。Syndecan-1 (CD138)和Ki-67在不同亚型成釉细胞瘤中的表达。Oral Oncol, 2008;44:805-811。
9. Azza Abdel-Aziz和Maha M Amin。成釉细胞瘤中EGFR、CD10和增殖标志物Ki67的表达:可能在局部复发中起作用。DiagnPathol。2012; 7:14)。
10. 亚当斯JC。生物素和辣根过氧化物酶信号在组织化学染色中的扩增。J HistochemCytochem。1992; 40:1457 - 1463。
11. Kroese女性生殖器切割。免疫组织化学与免疫病理。收录:Herzenberg LA, Herzenberg DW, Weir C(编辑)。威尔实验免疫学手册(第五版)。Blackwell科学，剑桥，英国。4:203.1 1997; 210.8。
12. 右旋糖酐聚合物共轭免疫组化两步可视化系统。En Vision+与两种三步亲和素生物素技术的比较。ApplImmunohistochem。1998; 6:3-10。
13. 平山T，等。成釉细胞瘤细胞增殖和抑制的免疫组化分析，特别以丛状和滤泡型成釉细胞瘤为例。ActaHistochemCytochem。2004; 37:391 - 398。
14. Sandra F，等人。成釉细胞瘤中PCNA和Ki-67的免疫组化评价。Oral Oncol, 2001;37:193-198。
15. Kato Y，等。新型表皮生长因子受体突变特异性抗体用于非小细胞肺癌:免疫组化作为一种可能的筛选表皮生长因子受体突变的方法。J ThoracOncol。2010; 5:1551 - 1558。
16. 北村A，等。肺癌中EGFR突变的免疫组化检测临床癌症Res. 2010;16:3349-335。
17. 吴光生，等。在评分中包括EGFR总染色，可以提高突变特异性抗体检测EGFR突变和EGFR TKIs反应预测。科学通报。2011;6:e23303。
18. Nouri AM，等。人类恶性肿瘤中表皮生长因子受体(EGFr)表达的概况:暴露于EGF的影响及其对已建立的人类肿瘤细胞系的生物学影响。中华分子医学杂志2000;6:495-500。
19. vevem，等。表皮生长因子受体在成釉细胞瘤中的表达。Oral Oncol, 2003;39:138-143。
20. Payeras MR等。成釉细胞瘤嗜银核仁组织区及表皮生长因子受体的定量分析。中华口腔病理学杂志2007;36:99-104。
21. Ong'uti MN，等。肯尼亚54例成釉细胞瘤中Ki-67抗原与临床和组织学参数的相关性。中华口腔颌面外科杂志，2001;26:376-379。
22. 基-67蛋白:来自已知和未知。中国生物医学工程学报，2000;
23. 柴田，等。颊黏膜成釉细胞瘤。案件报告。中华口腔颌面外科杂志，1990;19(3):344 - 344。
24. Meer S，等。成釉细胞瘤增殖细胞核抗原及Ki67免疫反应性的研究。口腔外科，口腔医学，口腔病理，口腔放射。2003; 95:213 - 221。
25. Beesley JE(1993)免疫细胞化学:一种实用的方法。牛津大学出版社，英国牛津。
26. Brevet M，等。通过免疫组织化学评估肺腺癌中的EGFR突变状态，使用针对两种主要形式的EGFR突变的抗体。J MolDiagn。2010; 12:169 - 176。
27. 李天杰，等。牙源性角化囊肿中的上皮细胞增殖:Ki67在单纯、复发性和基底细胞痣综合征(BCNS)相关病变中的比较免疫细胞化学研究口腔病理学杂志199524:221-226。
28. 田田K，等。表皮生长因子受体信号通路的综合图谱。MolSyst生物学，2005。
29. Pinheiro J，等。成釉细胞瘤的局部侵袭性。基质金属蛋白酶与增殖活性的作用。组织病理学。2004;45:65 - 72。