评估植物化学物质和不同溶剂提取物的体外抗氧化活性的Grewia Asiatica水果

文摘

Grewia asiatica绝壁。(Grewoideae)已经被认为是一个传统的植物的各种人类疾病的治疗。本研究的目的是评估不同提取物(正己烷、二氯甲烷、甲醇和水)估计的水果植物成份和抗氧化剂活动。我们的研究结果表明甲醇水果提取物表现出很强的抗氧化潜力的DPPH (1-diphenyl - 2 picrylhydrazyl) 90.1% (ic50 - 62.75±0.069μg), abt (2, 2’-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic酸)65.98%(224±0.032μg),过氧化物(ic50 - 53.6±0.05μg)和71.1%收紧(铁减少抗氧化潜力)测定7.68±0.04μmole铁(II) / mg)生成的自由基。此外,总酚含量之间的线性相关性研究被执行,总类黄酮含量和收紧化验,确定回归系数为0.827和0.956(分别为总酚含量和总类黄酮含量)。此外,甲醇提取物表现出显著的哦,彻底清除91.1% (IC50 43.80±0.03μg)。,目前的研究表明甲醇水果提取物作为潜在的抗氧化剂来源用于ethno-medical系统、解释治疗free-radical-induced疾病的应用。甲醇提取物也被确认为2-furancarboxaldehyde, 5 -(羟甲基);2 3-dihydro-3 5 - dihydroxy-6-methyl-4h-pyran;Cis-vaccenic酸主要由气体色谱法- - - - - -质谱分析分析。

关键字

Grewia asiatica、总酚含量、总类黄酮含量,Ethanomedical

介绍

植物产品是无毒的,没有副作用,组织良好、防护以及养护物业现在一天的中心吸引研究人员开发新的药物支架。自古以来,药用植物一直练习治愈的疾病和人类的健康1- - - - - -3]。现代药理学的药物的多样性是由植物来源的化合物(4]。这些化合物是神奇的资源开发新药物和展示丰富生物活性抗氧化化合物,用于食品和医药行业(5,6]。过度的一代又一代的自由基氧化应激的原因,这在一些疾病中起着重要的作用[7]。

自由基,如羟基自由基、超氧化物阴离子和H₂O₂活性氧,负责刺激引起的氧化应激和脂质过氧化,损伤范围广泛的其他生物分子通过这一过程应该是与各种疾病如糖尿病的病因,心脏疾病,中风,类风湿性关节炎和癌症(8- - - - - -11]。抗氧化剂清除自由基起着关键作用,从而保护人类免受感染和退化性疾病,最近关注主要关于合成一个的决心不寻常的副作用在人类8,12,13]。两个最常见的已知的合成抗氧化剂(叔丁基羟基茴香醚和丁羟甲苯)并没有在实践中由于其毒性作用[14,15]。此外,经常合成药物有副作用,而草本配方在这方面相对更安全。广泛的民族植物学的检查投影检测的重要配方在过去几十年里(16,17]。传统药用植物通常是可用的,经济上有利的替代合成药物。大约60%到80%的世界人口仍然依赖传统配方治疗一般疾病(18]。抗氧化化合物中和自由基,这将有利于人类发展的新的治疗从药用植物天然化合物19]。这些生物活性化合物的各种类phytocompounds如类黄酮、皂苷、类固醇、生物碱、萜类化合物、多糖和单宁,帮助在古代和近代各种bio-actions养护方法(20.,21]。传统的处理系统的阿育吠陀提到许多草药药物治疗各种疾病。Grewia asiatica Grewoideae家庭是一个重要的药用植物,广泛用于传统治疗(22]。在目前的研究中,选择水果提取物的g . asiatica探索其抗氧化活性。然而,很少有研究推测的抗氧化性质Grewia asiatica [23]。本研究评估和确认潜在的抗氧化活性不同的协议不同的自由基。本研究的累积,并用gc - ms方法来识别潜在的phytocompounds与不同提取物的抗氧化潜力有关。

材料和方法

收集的样本

植物标本收集积分附近大学的勒克瑙,被确认为Grewia asiatica l . Birbal萨尼古植物学研究所,印度勒克瑙(参考样品提交BSIP标本的标本)。

准备的提取

样本收集和阴影干果碎在杵臼细粉。进行提取,正己烷、二氯甲烷、甲醇和水溶剂索格利特方法所描述的唠叨和他的同事(24]。不同提取物的总百分比收益率是衡量以下公式:

不同提取的产率被发现正己烷:1.95%,二氯甲烷:甲醇:3.2% 8.30%,水4.9%。

植物化学的估计

总酚含量测定(TPC)

测定总酚类水果的Folin-Ciocalteu方法(25]。标准曲线的制备使用12.5μg /毫升到500μg /毫升溶液中没食子酸的甲醇。总酚值表示的没食子酸当量(μg /毫克干质量)。

总类黄酮含量测定(交通)

定量估计了spectrophotometrically氯化铝的方法的基础上,形成复杂的flavonoid-aluminium [20.]。校准曲线制备槲皮素标准解决方案在不同浓度12.5μg /毫升到500μg /毫升甲醇。总类黄酮值表示的槲皮素(μg /毫克干质量)。

抗氧化试验

DPPH自由基清除活性

根据之前报道的抗氧化潜力评估方法1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)自由基抑制[26]。不同浓度的甲醇也准备了水果提取物和抗坏血酸。自由基清除活性的抑制百分比计算通过使用以下公式:

在那里,一个_控制的吸收控制和一个吗_样本对于不同的测试样例。

此外,集成电路₅₀价值观代表提取物表现出50%的浓度抑制DPPH自由基。

abt自由基清除活性

abt (2, 2’-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic酸)自由基清除活性分析了标准协议后et al。(26]。抑制百分比测定使用以下公式:

在那里,一个_控制的吸收控制和一个吗_样本对于不同的测试样例。

氢氧自由基清除实验

体外氢氧自由基清除分析分析了标准协议的27]。在分析不同浓度的g . asiatica水果提取物进行了分析。百分比抑制OH自由基的由以下公式计算,此外,IC₅₀值代表提取物表现出50%的浓度抑制羟自由基。羟基自由基清除活性百分比计算公式:

在那里,一个_控制是吸收控制和_样本对于不同的测试样例。

铁减少潜在抗氧化剂(捆牢)

能够降低铁离子测定不同溶剂提取物的g . asiatica使用Benzie描述的方法和应变28]。新鲜FeSO工作的解决方案₄用于校准。基于能力的抗氧化能力降低铁离子的计算示例线性校正曲线表示为μmol菲^{+ 2}每μg等价物的样本。

超氧化物自由基清除活性

过氧化物的净化试验激进的是由Kunchandy和饶的标准协议29日]。不同浓度的测试样本分析和使用抗坏血酸作为一个标准。超氧化物自由基清除的百分比计算通过使用以下公式:

气相色谱质谱分析

甲醇提取物的干粉末溶解在相应的溶剂和样品进行了gc - ms分析。样本(1μL)注入RTX-5列的gc - ms (gc - ms - qp - 2010 +模型,日本岛津公司制造)。氦,载气,使用一个常数列1.2毫升/分钟的流量。温度编程是维护从100°C到200°C不断上升5°C / min,然后举行等温温度在200°C 6分钟进一步增加了10°C /分钟到290°C和再次举行iso-thermal 10分钟的290°C。离子源和喷油器温度为250°C和270°C,分别。质谱被碎片从40到950道尔顿和扫描的间隔0.5秒70 eV。选民终于证实了电脑匹配的质谱峰威利和国家标准和技术(NIST)库质量光谱数据库。

统计分析

所有的数据报告为平均数±标准差。平均值的计算是基于数据从至少三个独立的实验在不同的日子。统计分析是用ANNOVA统计软件包。所有的样品都准备一式三份和分析。

结果

估计酚和类黄酮含量

最大酚醛(22.9±0.045μg)和类黄酮(76.69±0.038μg)估计在甲醇提取物的水果(表1),其次是水、二氯甲烷和正己烷提取物。表达的酚和类黄酮含量分别相当于没食子酸和槲皮素。

表1。植物化学的估计与收紧的价值观。

抗氧化活性

抗氧化活性的DPPH方法揭示了甲醇提取的水果的最大百分比自由基清除活性,即90.1% (IC₅₀-62.75±0.06μg)比水65.09%,二氯甲烷和己烷19.35% (39.4%表2)。抗坏血酸作为标准参考化合物表现出96.49% (IC₅₀-5.4±0.05μg)自由基(表3)。

表2。抗氧化试验的样本。

在一个最大浓度(500μg /毫升)甲醇叶提取物抑制65.98%的abt自由基其次是水、正己烷和二氯甲烷提取物。而标准的抗坏血酸抑制79.9% abt自由基的浓度(表2)。的集成电路₅₀值也计算在甲醇提取物显示224μg±0.032μg其次是水提物431.4μg±0.05μg,而标准抗坏血酸是显示96μg±0.033μg IC₅₀值(表3)。

表3。集成电路₅₀不同的抗氧化剂化验值。

不同的水果提取物也被检查为H₂O₂自由基清除方法。在这个分析甲醇提取确定为羟基自由基的一种最有效的抑制剂抑制最大比例91.1%的H₂O₂生成的自由基(IC₅₀-43.80μg±0.03μg)其次是水(78.4%,IC₅₀-238年μg±0.06μg)、二氯甲烷(54.2%,IC₅₀-248.70μg±0.075μg)和正己烷(12.6%)提取(表2和3)。

研究说明,甲醇提取物有更高的收紧值(7.68μmol±0.04μmol铁(II) /毫克),与其他提取相比,然而标准抗坏血酸降低最大铁离子(12.76μmol±0.54μmol铁(II) /毫克)(表1)。

我们的研究结果发现,最大超氧化物自由基清除能力71.5%甲醇提取(IC₅₀- 53.6μg±0.05μg)其次是水57.3% (IC₅₀-246.8μg±0.08μg)、二氯甲烷和正己烷31.8%浓度的21.2%提取500μg /毫升(表2)。总酚类化合物之间的线性相关,总类黄酮和收紧的值是所示图1分别确定系数为0.827和0.956 (TPC和交通)TPC之间,交通和收紧。这个活动表明,酚和类黄酮提取的内容负责清除自由基。

气相色谱和质谱法(gc - ms)分析

gc - ms分析的光谱结果进行比较与NIST /威利库。13个化合物被确定甲醇水果提取物的g . asiatica命名为2-furancarboxaldehyde 5 -(羟甲基(62.22%),2,3-dihydro-3, 5-dihydroxy-6——methyl-4h-pyran (11.05%), 1, 3, 5-triazine-2, 4, 6-triamine (5.10%)、3-methyl-2, 5-furandione(4.13%)、十五烷酸(2.93%),2,4-dihydroxy-2, 5-dimethyl-3 (2 h) -furan-3-one (2.18%)、4-oxopentanoic酸(1.58%)、cis-dimethyl吗啉(1.47%)联氨酰胺、2 - (2-ethylcyclohexylidene)——(1.43%)氧双(甲基)(0.79%)furancarboxaldehyde, 5、5 ' - (0.79%) Cis-vaccenic酸(0.40%)Cyclo-hexane羧酸(0.56%)(图2和表4)。主要是确定化合物被称为酚、类黄酮和醛。这种化合物的化学式是确定NIST和威利库的基础上。

表4。methanolic水果的gc - ms鉴定化合物中提取。

讨论

在本研究的多样性phytocompounds提取与己烷、二氯甲烷、甲醇和水溶剂从水果和总酚和类黄酮含量的特点。毫无成效和同事(22报道的最大隔离这些从g . asiatica phytocompounds在甲醇溶剂中。其他植物化学的研究与生物活性复合隔离报告最大的酚和类黄酮在甲醇溶剂中(30.]。当甲醇水果提取物的总酚含量与其他溶剂提取相比,水提物显示第二高酚含量是紧随其后的是乙醇,氯仿,二氯甲烷和正己烷。这证实了隔离phytocompounds基于极性的提取。然而,各自的极性溶剂提取中发挥着关键作用更具体的生物活性化合物(酚类和黄酮类)潜在的抗氧化活性31日,32]。

植物酚类化合物是一种重要的化合物作为自由基清除。多酚类化合物和羟基芳香族苯环取代,包括功能的衍生品。能中和自由基,可以螯合各种金属离子,可以启动活性氧的生成,激活脂质过氧化作用。在所有类型的植物化学的多酚,类黄酮是重要的,因为他们保护人类对抗疾病。黄酮类化合物的分子结构有助于抗氧化活动。这些phytocompounds丰富植物中发现它们的糖苷(33]。最丰富的黄酮类槲皮素具有有效的抗氧化性质,因为它具备所有相关结构取向清除自由基(34]。因此,可以说,酚类和黄酮类内容可能与其他植物化学物质出现在g . asiatica并使其很重要的药用价值。

在目前的研究中,g的抗氧化潜力asiatica使用不同的分析测定,即收紧、DPPH, abt、氢氧自由基和过氧化物抗氧化活性。单一抗氧化试验将无法正确评估结果的植物提取物的抗氧化性能。因此,有必要分析潜在(超过一种类型的抗氧化能力35]。DPPH nitrogen-centered自由基有一个奇怪的电子使一个强大的吸收在517海里,它的颜色从紫色变为黄色当DPPH奇数电子配对的游离基清除剂形成DPPH-H减少。abt试验依赖于抗氧化化合物清除abt激进的能力。通过这个分析,我们可以测量亲脂性的的抗氧化能力和亲水性化合物在相同的样本。

重要的氢氧自由基也是活性氧在生物系统与细胞膜脂肪酸复合物和受损细胞(36]。过氧化氢自然存在于空气、水、植物、食物和人体在低浓度(37]。H₂O₂迅速产生氢氧自由基,造成脂质/氧化以及DNA损伤(38]。

铁降低抗氧化能力(收紧)分析取决于铁离子的还原成亚铁离子(28]。线性相关研究还建议酚类和黄酮类内容负责强有力的抗氧化活性。

超氧化物自由基试验被认为是一个重要的来源的活性氧在生物系统(39]。超氧化物阴离子生成羟基自由基负责氧化应激(40]。我们的研究结果表明,酚和类黄酮含量在甲醇提取物可能是抗氧化活性为集成电路的主要内容₅₀值的自由基清除活性提取物的g . asiatica和酚醛树脂或类黄酮含量表现出显著相关性。以上所有活动被发现显著的g . asiatica methanolic水果中提取的。此外,进行了gc - ms分析识别methanolic提取显示各种化合物的化合物。有13个化合物被确定,呋喃carboxaldehyde, 5 -(羟甲基)拥有最大百分比(62.22%)面积其次是2,3-dihydro-3 5-dihydroxy——6-methyl-4h-pyra(11.05%)和其他化合物。在分析甲醇提取了最大的抗氧化活性可能是由于这些物质的存在和可能是一个协同效应。单个化合物的gc - ms分析已经在先前的研究报道抗氧化,抗炎,抗菌防腐剂活动(41,42]。基于各种自由基清除活性结果显著的g . asiatica methanolic提取可能是由于水果中的酚和类黄酮提取(43]。

确认

作者要感谢尊敬的校长,教授s w·艾克塔提供实验室设备去做研究工作。我们也要承认Ajay Kumar博士(AIRF JNU) gc - ms分析。

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