木槿中总酚、单宁、生物碱和黄酮类化合物的含量测定。木提取物。

摘要

对木槿木材石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物中总酚、单宁、生物碱和类黄酮的含量进行了测定。在索氏装置中，以石油醚、乙酸乙酯和甲醇为溶剂，采用连续热渗流法提取木屑粉末。以没食子酸为标准品，用福林-乔卡卢法测定总酚和单宁。用氯化物比色法测定总生物碱的含量槲皮素作为标准。结果表明，与以阿托品为对照品的溴甲酚绿溶液相比，乙酸乙酯提取物的总酚、单宁、生物碱和类黄酮含量较高。用铝-石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物测定总黄酮含量。乙酸乙酯提取物中总酚含量为30.18毫克，单宁含量为83.03毫克没食子酸生物碱66.01 mg /阿托品当量(AE)，黄酮类化合物91.01 mg /槲皮素当量(QE)。

关键字

苯酚、类黄酮、生物碱、单宁、木槿tiliaceus

介绍

几个世纪以来，植物为人类提供了治疗多种疾病的草药。在印度草药一直是传统方法治疗和治愈各种疾病的基础，如阿育吠陀乌纳尼和悉达。从古代起，植物和动物源性药材的治疗潜力就被利用在简单的过程中，而不需要分离出纯净的化合物。生药的药理作用是由其成分的性质决定的。因此，植物可以被认为是一个生物合成物种，它不仅含有被动物和人类用作食物的化合物，如蛋白质、碳水化合物和脂肪，而且还含有大量的化合物，包括生物碱、萜类、黄酮类、苷类等，它们具有一定的生理作用。这些化合物主要负责期望的有益特性。[1］天然产物从锦葵科植物中提取，在世界范围内用于治疗许多疾病。这个科的一个重要属是木槿属，有220多种分布在热带和亚热带地区。2］木槿tiliaceusl．是一种典型的热带气候植物，大量生长在红树林地区。[3.木材和鲜花的水萃取物是治疗皮肤病的有效方法。4-5最近有研究表明，甲醇花提取物对酵母具有抗氧化作用酿酒酵母防止过氧化氢(H2O2)和叔丁基过氧化氢(t-BHP)细胞毒性．此外，该提取物不具有诱变性鼠伤寒沙门氏菌或酿酒酵母并对氧化诱变剂表现出明显的抗诱变作用酿酒酵母．[2传统上也有报道说，它的叶子用来治疗发烧和咳嗽，树皮用来治疗痢疾，花用来治疗耳部感染和脓肿。6先前对木槿属植物的药理学研究表明，存在具有有益生物活性的物种。迄今为止进行的研究表明，木槿属植物有可能提供能够阻止恶性细胞增殖的生物活性化合物。因此，木槿属值得额外的评价作为提供者chemopreventive代理。事实上，目前需要新的植物源性生物活性分子;用于开发新药，并可能提供治疗发展中世界癌症和其他疾病的成本效益高的手段[7-8］．

本研究对黄芪油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物中总酚、单宁、生物碱和类黄酮的含量进行了筛选评价木槿tiliaceus木头。

材料和方法

植物材料

木槿tiliaceusl客栈。木材采集自马哈拉施特拉邦Ratnagiri地区沿海地区，经印度浦那植物调查主任“C”级科学家J. Jayanthi博士鉴定。BSI/WRC/TECH/2010凭证号HIBCA1VIT。植物标本室保存在浦那BSI，供进一步参考。

化学品和试剂

氯化铝、碳酸钠、亚硝酸钠、氢氧化钠购自普拉瓦拉那加农村药学院药物化学系。Folin-Ciocalteu酚试剂、氯化铝和没食子酸、槲皮素的标准样品来自Pravaranagar市Pravara农村药学院生药学部。

仪器使用

紫外/可见分光光度计

提取物的制备

本研究采用索氏装置连续热萃取法提取。新收集的木材部分被切成块，在阴凉处干燥，并磨成细粉。将250克木粉通过第1号筛。60，在索氏装置中包装，以石油醚、乙酸乙酯和甲醇为溶剂提取。滤液在旋转蒸发器中浓缩，并计算萃取物的萃取值。

总酚含量的测定

用分光光度法测定了植物提取物中酚类物质的浓度。9用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量。反应混合物由1ml提取物和9ml蒸馏水组成，取于量瓶(25ml)中。将1毫升福林-乔卡尔多酚试剂处理成混合物，摇匀。5分钟后，将10毫升7%碳酸钠(Na2CO3)溶液处理成混合物。积至25ml，按上述方法配制没食子酸标准溶液(20、40、40、60、80、100 μg/ml)。室温孵育90 min，用紫外/可见分光光度计对试剂空白在550 nm处测定被试溶液和标准溶液的吸光度。总酚含量以mg /gm提取物表示。10-12］

单宁含量的测定

采用Folin - Ciocalteu法测定单宁含量。将约0.1 ml的样品提取物加入容量瓶(10 ml)中，其中含有7.5 ml蒸馏水和0.5 ml福林-钙酚试剂，1 ml 35% Na2CO3溶液，用蒸馏水稀释至10 ml。将混合液摇匀，室温保存30min。按上述方法配制没食子酸20、40、60、80、100 μg/ml参比标准溶液。用紫外/可见分光光度计对空白在725 nm处测定被试溶液和标准溶液的吸光度。单宁含量以提取物的mg /g表示。13-16］

生物碱的测定

将植物提取物(1mg)溶于二甲基亚砜(DMSO)中，加入1ml 2n HCl过滤。将该溶液转移到分离漏斗中，加入5 ml溴甲酚绿溶液和5 ml磷酸盐缓冲液。将混合物用1、2、3和4 ml氯仿剧烈摇动，收集在一个10 ml的容量瓶中，用氯仿稀释到相应的体积。按上述方法制备阿托品标准溶液(20、40、60、80、100 μg/ml)。用紫外/可见分光光度计对试剂空白在470 nm处测定被试溶液和标准溶液的吸光度。总生物碱含量以提取物的AE/g mg表示。[17-18］

总黄酮含量的测定

用氯化铝比色法测定总黄酮含量。反应混合物由1ml提取物和4ml蒸馏水组成，取于10ml容量烧瓶中。在烧瓶中，处理0.30 ml 5%亚硝酸钠，5分钟后，混合0.3 ml 10%氯化铝。5分钟后，取1M氢氧化钠2 ml，用蒸馏水稀释至10 ml。采用相同方法制备槲皮素标准溶液(20、40、60、80、100 μg/ml)。用紫外/可见分光光度计对试剂空白在510 nm处测定被试溶液和标准溶液的吸光度。总黄酮含量以mg QE/g提取物表示。19-22］

结果与讨论

分别制备石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物，测定其总酚、单宁、生物碱和类黄酮含量。提取值及总酚、单宁、生物碱、黄酮类含量的测定结果列于表1、2、3、4、5分别。总酚、单宁、生物碱和类黄酮含量的校准图见图1、2、3和4分别。

用Folin-Ciocalteu试剂测定的植物提取物中总酚含量用没食子酸当量表示(标准曲线方程:y = 0.006x - 0.002, R²= 0.997)。得到的总酚浓度的值表示为mg GA/g提取物(表2)。总酚含量在11.90 ~ 30.18 mg GA/g之间。乙酸乙酯提取物中酚类物质含量最高。石油醚和甲醇提取物中酚类物质的浓度较低。本种植物提取物中总酚含量木槿tiliaceus取决于萃取物的类型，即萃取时所用溶剂的极性。苯酚在极性溶剂中的高溶解度使得这些化合物在使用极性溶剂萃取得到的提取物中具有高浓度。[qh]23-24］

用Folin-Ciocalteu试剂测定植物提取物中的单宁含量，用没食子酸当量表示(标准曲线方程:y = 0.057x - 0.071, R)²= 0.997)。得到的单宁含量的浓度值表示为mg GA/g提取物。单宁含量最高的是83.03乙酸乙酯提取物(表3)。

测定了植物提取物中生物碱的含量，并以阿托品当量(mg AE/g提取物)表示(标准曲线方程:y = 0.006x - 0.003, R²= 0.997)。生物碱浓度最高的是乙酸乙酯(表4)。

不同植物提取物中黄酮类化合物的浓度木槿tiliaceus采用氯化铝分光光度法测定木质素。用槲皮素当量表示黄酮类含量(标准曲线方程:y = 0.009x- 0.006, R²= 0.999)， mg QE/g提取物(表5)。木材乙酸乙酯提取物类黄酮含量最高，为91.01 mg QE/g。甲醇提取物中黄酮类化合物的浓度为66.08 mg QE/g。测定了石油提取物中黄酮类化合物的最低浓度。植物提取物中黄酮类化合物的浓度取决于提取物制备中所用溶剂的极性。25］

所有校正图均显示出较强的正线性相关(r)，接近于+1。这些图表表明，随着浓度值的增加，吸光度值也随之增加。乙酸乙酯提取物中总酚、单宁、生物碱和类黄酮含量分别为GAE/gm 30.18 mg、GAE/gm 83.03 mg、AE/gm 66.01 mg和QE/gm 91.01 mg。石油醚和甲醇提取物的总酚、单宁、生物碱和类黄酮含量较低。

结论

本研究对石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物中总酚、单宁、生物碱和类黄酮的含量进行了测定木槿tiliaceusl．woodwere调查。与石油醚和甲醇提取物相比，乙酸乙酯提取物的酚、生物碱、类黄酮和单宁含量较高。乙酸乙酯提取物的药理作用木槿tiliaceusl．木材将由这些化合物的性质决定，这些化合物负责所需的治疗特性和确定的生理效果。

确认

作者感谢Pravaranagar Pravara农村药学院校长允许在该机构进行研究。

参考文献

1. Mukherjee。中草药质量控制教材(植物药评价方法)《商业视野》编辑。印度新德里:第248页;2002.
2. 曾廷辉，李永杰，东亚民间药用植物天然及合成化合物对癌症中介作用的评价。抗癌药物在医学化学中的应用;2006;[6:6 5]: 347。
3. Rosa RM, Melecchi MI, da Costa Halmenschlager R, Abad FC, Simoni CR, Caramao EB, Henriques JA, Saffi J和de Paula Ramos AL.抗氧化和抗诱变性能木槿tiliaceusl．Methanolic提取。食品科学与技术，2006;33 (4):326 - 326
4. 惠斯勒西澳库克群岛的传统和草药。[J] .中国生物医学工程学报，2006;22 (3):389 - 398
5. Melecchi MI, Peres VF, Dariva C, Zini CA, Abad FC, Martinez MM, Caramao EB(2006)超声提取方法的优化木槿tiliaceusl．花。超声波Sonochemistry2006;13: 242 - 50
6. 佩塔德·p·奎尔奎斯:《波利尼西亚、法国、塔希提岛植物》，塔希提岛版，帕皮提，1986。
7. 黄大伟，黄大伟，金合欢和木芙蓉抗炎活性的研究，中华医学杂志，1996;24: 263 - 9。
8. Sachdewa, A.和L.D. Khemani，木芙蓉乙醇花提取物对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠血糖和血脂的影响。中华医学杂志;2003;89: 61 - 6。
9. Singleton VL, Orthofer R, Lamuela-Raventos RM。用福林-钙化剂分析总酚和其他氧化底物及抗氧化剂。方法:中华微生物学杂志。1999;29(2):152-178。
10. Ali Ghasemzadeh，夏威夷，夏威夷。Jaafar AsmahRahmat。两个马来西亚幼姜品种的抗氧化活性、总酚和黄酮类化合物含量。摩尔。2010;15: 4324 - 4333。
11. Nasir Rasool, KomalRizwan, Muhammad Zubair, Kaleem Ur Rahman Naveed, Imran Imran, Viqar Uddin Ahmed。红花芽不同提取物及组分的抗氧化活性。植物病理学杂志。2011;1(3): 108 - 114。
12. 米兰·s·斯坦科维奇。黄麻总酚含量、黄酮类化合物浓度及抗氧化活性研究。提取物。中国生物医学工程学报，2011;33(3):693 - 693。
13. D Marinova, F Ribarova, M Atanassova。保加利亚水果和蔬菜中的总酚类和总黄酮。中国化工大学学报(自然科学版);2005;40(3): 255-260。
14. Rajeev Singh, Pawan Kumar Verma, Gagandeep Singh。苦艾不同提取物的总酚、总黄酮和单宁含量。中华民族医学杂志。2012;1(2): 101-104。
15. AfifyAel-M, El-Beltagi HS, El-Salam SM, Omran AA。3个白高粱品种浸泡过程中酚类、黄酮类、单宁类、维生素E、β-胡萝卜素及抗氧化活性的生化变化亚太生物医学杂志。2012;2(3): 203 - 9。
16. Miean K.H, Mohamed S.可食用热带植物类黄酮(杨梅素、槲皮素、山奈酚、木犀草素和芹菜素)含量。食品化学学报(英文版);2001;49(6): 3106-12。
17. FazelShamsa, HamidrezaMonsef, RouhollahGhamooshi, MohammadrezaVerdian-rizi。分光光度法测定伊朗部分药用植物中总生物碱。泰国药学杂志。2008;32: 17 - 20。
18. T Mallikarjuna Rao, B Ganga Rao, Y Venkateswara Rao。枳壳提取物的抗氧化活性研究。植物药理杂志。2012;3(2): 216 - 220。
19. S Kaviarasan, GH Naik, R Gangabhagirathi, CV Anuradha, KI Priyadarsini。胡芦巴种子抗自由基和抗氧化活性的体外研究。食品化学。2007;103: 31-37。
20. Hanane El Hajaji, nadya alachkar, KatimAlaoui, YahyaCherrah, Abdellah Farah, AbdesslamEnnabili等。三种摩洛哥角豆树叶片的抗氧化性能和总酚含量。Rec Nat project 2010;4(4): 193 - 204。
21. 徐保军，常世春。不同加工方法对月食黑豆总酚含量和抗氧化性能的影响。食品科学学报。2008;73 (2): H19-27。
22. Lee Wei Har, intansfinar Ismail报道。合欢蓼叶的抗氧化活性、总酚和总黄酮含量。植物学报，2012;2(2): 219 - 228。
23. Mohsen, m.s.， Ammar, S.M.A.。玉米穗子提取物的总酚含量和抗氧化活性。食品化学，2008;12:595-598。
24. 周凯，于磊。提取溶剂对麦麸抗氧化活性测定的影响。轻型。2004;37: 717 - 721。
25. 闵刚，春昭，李。水母雪莲细胞中黄酮类化合物提取工艺的比较。世界微生物学杂志2005;21日:1461 - 1463。