评估可行的结核分枝杆菌的检测方法使用显微镜,结核病治疗的痰标本进行随访

文摘

跟进的反应患者抗结核(TB)治疗(ATT),需要基本的和有效的治疗监测工具。常用的监控工具用于外围结核病实验室resourcelimited设置是抗酸杆菌的显微观察使用Ziehl - Neelsen(锌)或金胺OFluorescent染色。如果涂阳病人在治疗开始后的第三个月,跟踪的可行性杆菌痰,是由结核分枝杆菌(M.tb)培养和药物敏感性试验(C & DST)。

涂片积极性在治疗开始后的第五个月或以后,信号可能治疗失败。重要的是要注意的边界显微镜不能区分可行和死去的杆菌。大量的患者在治疗可能继续咯死从坏死杆菌肺腔,因此被列为“涂片阳性”虽然他们应对治疗。因此接受长期的风险或修改治疗方案与有限的访问设置结核分枝杆菌文化。痰培养可以识别可行的杆菌,但是需要几个星期到达结果,熟练的实验室工作人员和基础设施。

最近的研究提出对结核病治疗及其方法监测可以在外围结核病实验室已有的基础设施。这一点的护理(POC)技术基于荧光标记可行性fluorescein-diacetate能力(FDA),作为痰涂片显微镜检查的一个污点。

的有效fluorescein-diacetate (FDA)染色法检测的可行性结核分枝杆菌567年痰跟进肺结核病例的样本相比增长自动液体培养系统(文化积极的97.64%)。FDA敏感性温和(97.62%,95%的置信区间),和特异性(98.4%)。被鼓励的负面预测值94.8%干达人阴性似然比为0.2建议使用这种方法排除治疗失败在低收入和高负担设置。

关键字

锌、FDA、MGIT ATT(抗结核病治疗),特种加工(非结核分枝杆菌)。

介绍

检查肺结核病人抗结核治疗的预后(ATT)是重要的早期发现治疗失败或耐药性1]。资源有限和高负担的监控工具常用的设置通常是显微观察痰涂片使用Ziehl-Neelsen(锌)或金胺Ostaining [1,2]。积极的涂片后的第三个月开始ATT或晚进一步调查C&DST m .结核病。涂片积极性在第五个月或以后就意味着贫穷或者失败的治疗的反应(1]。

重要的是要注意,使用锌或金胺O染色涂片镜检,不能区分可行的和死杆菌。大量患者ATT继续咳嗽死从坏死杆菌肺部空洞和保持涂阳尽管他们应对治疗(1,3- - - - - -7]。这些患者接受长期的风险或不必要的新治疗方案。

分枝杆菌培养是唯一的方法,可以最终确定可行的杆菌。不幸的是需要许多周结果的读取和还需要高度熟练的人力资源除了昂贵的实验室基础设施。当代研究提出当场及其和ATT监测的方法,根据痰涂片染色使用fluorescein-diacetate从跟进情况下(FDA), afluorescent可行性标记,显微镜(之前8- - - - - -10]。

方法

FDA活体染色方法相比,M。结核病文化使用567跟进肺结核病人痰标本,在中间参考实验室(IRL)在SDS疗养院,NIMHANS,班加罗尔,在常规ATT监测在第二、第三(如果积极的在第二个月),第五、第六个月治疗新的肺结核病例和在第三,第四(如果积极在第三个月),第五和第八个月以前治疗的肺结核病例的治疗。

连续两个标本/跟进月每例显微镜下检查使用锌染色(2]。仅靠锌染色涂片阳性标本研究包括。他们使用FDA染色涂片镜检后2天内样品收据(9]。FDA股票的解决方案(荧光素二醋酸盐- ca 596-09-8 -Calbiochem西格玛奥德里奇),25毫克/毫升在丙酮中,储存在-20°C)被用来准备新鲜的染色,全局(0.5毫克/毫升)磷酸盐(pH值7.3,80年0.05%的渐变)。风干后,FDA涂片荧光显微镜检查×1000使用一个Labomed荧光显微镜放大LX 400英语,配有FluoLed蓝色(480海里)发光二极管(LED)和48 - 75毫米的带通滤波器。FDA涂片被定义为正(FDA +),至少1荧光观察芽孢杆菌/ 100大功率领域(2]。

剩余的样本用于建立文化结核分枝杆菌在固体和液体媒体中间参考实验室(IRL)在SDS疗养院,NIMHANS,班加罗尔。去污的样品是按照国家规定的标准操作程序(sop)肺结核消除项目(NTEP),使用氢氧化N-acetyl-L-cysteinesodium支持-氢氧化钠),最后一个氢氧化钠浓度为2%,持续15分钟。一种文化管自动孵化的MGIT 960液体培养系统和两个管与固体鸡蛋Lowenstein-Jensen培养基接种/标本。

来自积极文化的涂片观察FDA染色后显微镜下,锌染色、和识别文化的M。结核病是使用快速侧流免疫层析试验(Capilia结核病测试)也被报道的分化结核分枝杆菌复杂的特种加工。如果可行的分枝杆菌存在于一个接种标本,他们在MGIT介质将增长,将视觉以及荧光检测。报告结果只有当MGIT管是正的仪器和涂片由FDA积极肉汤也积极的空军基地。如果所有这三个媒体对固体和液体管文化被发现被污染,样品被认为是“污染”。一种文化被分类为“结核分枝杆菌积极”只有在快速的鉴别试验(Capilia结核病测试)这三个文化管接种在固体和液体文化是积极的。受污染的文化被排除在性能分析。

567年Ziehl-Neelsen染色涂片阳性样本(锌+)随访病例包括2019年6月至2019年9月。79.4%锌积极就小巫见大巫了,定义为幻灯片1到9杆菌/ 100大功率领域,67.2%是密集的最后阶段或长期治疗方案,但文化积极的强化阶段只有80 (14.10%)。

结果与讨论

总计567标本中,250人被FDA涂阳317人表示要FDA -在250年FDA涂片阳性,244(97.62%)被发现是积极的结核分枝杆菌文化,2(0.80%)特种加工是积极的,2(0.8%)文化-,2个(0.8%)被污染。,250(26.4%)的跟进样品被FDA涂片阳性,其中175(70%)被发现缺乏积极的。FDA涂片的敏感性是97.6%,特异性是98.4%。

FDA彩色幻灯片中假阳性结果并不是所有在FDA(246/250, 98.40%)与锌积极涂片80/567(14.10%)相比,文化(表1- - - - - -3,图1和2)。

表1。包括数量的锌+痰标本和FDA痰+ ve标本。锌+ Ziehl-Neelsen, FDA stain-positive痰涂片;MTB +,结核分枝杆菌阳性的文化;特种加工+非结核性mycobacterium-positive文化在不同的治疗阶段;锌缺乏的+ 1到9杆菌/ 100高通滤波器;锌> 1 + > 10杆菌/ 100高通滤波器,FDA的40 + ve1 4杆菌/高通滤波器;FDA > 1 +, > 10杆菌/ 40高通滤波器,(锌涂片抽样)。

表2。这代表了积极MTB总量的增长,没有增长,特种加工,在不同的阶段的抽样和污染。

表3。这代表了积极MTB总量的增长,没有增长,特种加工,污染在不同阶段的抽样(FDA涂片)。

讨论

FDA的整体性能很好。ZN-positive稀疏的研究人群包括主要从患者身上提取的标本显示延迟对治疗的反应,伴随着文化积极率低。事实上,FDA精度似乎完美的特定的标本和他们的文化。此外,FDA culturenegative特异性可能已经理解的结果。文化污染率很低,很可能一些细菌,可能从pauci杆状的标本,可能被杀害在净化过程中11]。此外,施拉姆等人观察到细菌的生存能力定义为FDA积极(氟chrome激活酶活性)不一定意味着“生存能力”的芽孢杆菌繁殖的能力被定义为文化(12]。这可能是更明显的标本患者早期治疗阶段。

在这项研究中评估可行的使用FDA染色方法染色的杆菌,性能足够准确提出FDA涂片方法对结核病治疗监测作为一个独立的工具。在资源有限的环境中,这种方法也许发现有价值的确定情况下需要文化。这样的应用程序需要进一步评估种群中有更高比例的治疗失败。

确认

作者谦恭地承认他们的任期期间提供的帮助研究人员中间参考实验室(IRL),在SDS疗养院,NiMHANS,班加罗尔。

引用

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