评价抗菌的潜力Cyclopenta萘Tetraol萜类化合物分离姜黄caesia Roxb。

文摘

抗菌潜力评估的2、3、4、8、9、9 a-hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 - decahydro - 1 h - cyclopenta [b]萘- 1,2,3,4 a-tetraol是本文的主要目标其次是它的物理化学特性。化学描述的2、3、4、8,9,9 a-hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol通过UV, IR(红外光谱)、,8经和核磁共振光谱技术。其抗菌活性的评估进行了分别使用琼脂杯法和纸片扩散试验。抗菌化合物萜类化合物在自然和标识为2,3,4,8,9,9 a-hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol。麦克风测试值对不同植物病原真菌和细菌是不同的。这种化合物的MIC值是365μg /毫升,274μg /毫升,389μg /毫升,443μg / ml检测细菌粘质沙雷氏菌,欧文氏菌herbicola,黄sp.和节细菌属chlorophenolicus分别。我们所知这是第一次报告的2、3、4、8、9、9 a-hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol植物。由于其抗菌财产可能函数在植物防御或商业化作为环保作物保护剂。

关键字

姜黄caesiaRoxb。,2,3,4,8a, 9, 9a -hexamethyl-2,3,3a,4,4a,5,8,8a,9,9a-decahydro-1H-cyclopenta [b] naphthalene-1,2,3a,4a-tetraol, Antibacterial potentiality, Physicochemical characterization, Crop protectant.

介绍

姜黄caesiaRoxb。(黑姜黄)的家庭姜科自然三倍体,流行和ethnomedicinally重要的植物。这种植物被部落的印度东北部以其独特的药用价值。有几个黑人姜黄的生物活性潜力报告。到目前为止,已经有8名代谢物分离和特征姜黄caesiaRoxb。冰片、乙酸龙脑酯、1 8-Cineoleα-Curcumene,γ-Curcumene,β-Elemene, (E) -β-Ocimene ar-Turmerone等[1,2]。我们首次报告2,3,4,8,9,9 - hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol (图1阴凉干燥粉末的)姜黄caesiaRoxb。似乎我们所知这种化合物有一个小说没有早些时候报道。

材料和方法

收集的植物材料

整个工厂的c . caesia Roxb。收集2010年7月从植物学实验部门花园,Kalyani大学并被确认的植物学、Kalyani大学纳迪亚。

提取和分离的原油二次代谢物的内容

2.5公斤阴影黑姜黄植物的根状茎干粉状约1升为95%并提取三次EtOH在室温下给479 gms的提取。提取是蒸发减压和固体残留下质量。上面获得剩余样品受到重复制备薄层色谱使用不同的溶剂系统,e。1 g溶剂系统。甲醇(5%):苯(95%)和溶剂系统2。氯仿(60%):苯(30%):醋酸(10%)。三个均匀点收集溶剂系统2、Rf值为0.87,0.79和0.75。样本射频值0.87被进一步研究。这个示例是积极的在今后李伯曼测试[4],给紫色颜色指示其萜类化合物性质。化合物的熔点910 c。样本然后进一步分析通过紫外光谱等多种光谱技术(UV - 1601 pc,紫外可见分光光度计,日本岛津公司)、傅立叶变换红外光谱(珀金埃尔默光谱- 1分光光度计),高分辨率质谱法(JEOL - JMS 600仪器)和核磁共振光谱、1 h和13 c(力量皇冠- 400光谱仪)为其适当的物理化学特性。

抗菌试验

微生物、文化媒体和孵化环境

孤立的样本被单独测试一组微生物包括革兰氏阴性粘质沙雷氏菌(MTCC没有。7298)孵化30°C,欧文氏菌herbicola(MTCC没有。3609)孵化在37°C,黄(MTCC没有。7444)孵化300 c和革兰氏阳性节细菌属chlorophenolicus(MTCC没有。3706)孵化在28°C。所有菌株都获得微生物技术研究所(IMTECH)、昌迪加尔、印度。参考的菌株被保持在营养琼脂培养基和磅中等偏在4°C亚文化的30天内。

媒体的组成

的细节组成的媒体测试微生物增长了表1。

麦克法兰的制备标准

浊度标准是由混合0.5毫升的1.75% (w / v) BaCl₂.2H₂与99.5毫升的1% H O₂所以₄.BaSO₄(v / v)。标准是在螺旋盖子试管比较浊度。所选菌株的细菌培养出了48 - 72小时,随后与生理盐水混合。浊度是通过添加无菌生理盐水,直到纠正麦克法兰0.5贝索₄浊度标准10⁸集落形成单位(CFU)每毫升。这些接种物被用于播种的营养琼脂培养基和LB培养基。

纸片扩散试验

1毫克的孤立样本分别溶解在1毫升的丙二醇,然后音量调整至10毫升加入无菌水。最终的浓度达到10³μg /毫升和消毒过滤(0.22μm微孔过滤器)。的浓度在500年到100年μg /毫升在每种情况下。无菌纸光盘(6毫米直径)与10μl饱和溶液的化合物的浓度500 - 100μg /毫升和放置在接种10琼脂⁸cfu /毫升。抗菌测试是由阀瓣扩散方法[5]使用包含10 100μl悬挂⁸CFU /毫升细菌分别在营养琼脂培养基和LB培养基。负控制准备使用丙二醇。庆大霉素(10μg /盘)是作为积极的参考标准,以确定每个细菌的敏感性测试。接种板块在30°C,孵化37°C, 30°C和28°C分别为48 h, 24小时、48小时和72 h。抗菌活性是抑制评估通过测量区,这些区域的直径以毫米测试生物[6]。

确定最低抑制浓度

最低抑制浓度(MIC)值为细菌菌株进行了研究,在纸片扩散试验敏感化合物。菌株的接种物是从24 - 72小时准备汤文化和悬浮液麦克法兰标准浊度调整到0.5。化合物溶解在1毫升的丙二醇,然后连续稀释是为了获得浓度范围从500年到100年μg /毫升10毫升无菌试管中分别含有营养肉汤和磅肉汤培养基。麦克风的化合物对细菌菌株测定值基于微稀释方法如前所述7 - 8。板上覆盖着无菌盘封口机,然后在适当的温度下培养24 - 72 h在30°C, 37°C,分别为30°C和28°C。细菌生长在600 nm由吸光度,证实了电镀10μl样本,形成清晰的井分别在营养琼脂培养基或磅中等。麦克风被定义为最低浓度的化合物抑制微生物的生长。每个测试在这个研究是重复,至少三次。

结果与讨论

独立样本的化学特性

复合红褐色无定形固体,溶于甲醇。样品的熔点是91°C和结果紫色在今后李伯曼测试[3]。

拜耳的测试双键或三键的存在

在˜2 - 3毫克甲醇分离化合物的添加的稀释碱性高锰酸钾溶液。反应混合物的紫色粉色变成棕色表明存在一个活跃的不饱和化合物(双键或三键)

紫外光谱的孤立的样本

methanolic频谱的样本显示λmax 364.5 nm, 337.5 nm, 333.00 nm, 214.00 nm和吸光度= 0.0025,0.0025,0.0035,2.2272(分别图2)。

红外(IR)光谱的孤立的样本

样品的红外光谱显示,n - (cm¹):3339,2966,2924,2879,2858,1669,1448,1377年、1057年和1003年(图3)。

高分辨率质谱法的独立样本

样品的质量是指出(TOF MS ES⁺)347.0627 (M + Na) (图4)。

核磁共振光谱学的孤立的样本

1 h NMR (400 MHz, CDCl₃):

δ。5.40 (1 H, dt, J = 6.8, 0.8赫兹,Oliphinic H), 5.10 (1 H, dt, J = 6.8, 0.2赫兹,Oliphinic H), 4.12 (2 H d J = 6.8 Hz), 3.64 (1 H, m), 2.6 (2 H, br s), 2.10 (2 H, m, HC = CH-CH₂),2.0 (2 h, m, CH = CH-CH₂),1.68 (6 h, s, CH₃),1.66 (6 h, s, CH₃),1.60 (6 h, s, CH₃),1.36 (1 h, m), 1.17 (1 h, m)和0.90 (1 h, J = 6.8赫兹)。(图5)。

13 c NMR和部门- 135 (100 MHz, CDCl₃):

δ。139.3,131.6,131.2,124.7,123.9,123.4,60.9,59.1,39.78,39.5,37.2,29.2,26.4,25.7,25.6,25.4,19.4,17.6和16.2 (图6&7)。

抗菌潜力评估

抗菌试验进行了2、3、4、8、9、9 -hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol对四种植物病原细菌和麦克风值365μg /毫升,274μg /毫升,389μg /毫升和443μg /毫升细菌粘质沙雷氏菌(MTCC没有。7298年),欧文氏菌herbicola(MTCC没有。3609)、黄(MTCC没有。7444)和节细菌属chlorophenolicus (MTCC没有。3706)分别为(表2)。

解释结构的孤立的化合物

U。V频段的化合物甲醇显示强烈的吸收峰(λmax)在217 nm,非结合的但烷基取代的发色团的双键与auxochromic附加功能(图2)。当我。R这种化合物的光谱被记录,特征官能团地区的强吸收峰也被发现。3339厘米的广泛和很强的吸收¹被指派为脂肪族地伸展。脂肪族碳氢键拉伸被发现在2966厘米¹(不对称)和2824厘米¹(对称)。此外,适度的吸收峰强度在1669厘米¹也观察表明脂肪族的存在C = C拉伸[4](图3)。

1 h - nmr谱的化合物图1展出的32个质子。其中δ= 5.40 ppm (1 h, dt, J = 6.8, 0.8赫兹)和5.10 ppm (1 h, dt, J = 6.8, 0.2赫兹)证实的存在两个olifinic质子。两种不同类型的ch₂——(美)质子也观察到2.10 ppm (2 h, m)和2.0 ppm (2 h, m)。两个质子-哦是位于4.12 ppm (2 h d J = 6.8 Hz),另一个两个-哦质子被发现在2.6 ppm (2 h, br)与其他剩余的1 h - nmr)谱特征质子,它支持proton-skeleton孤立的化合物(图- 5)。

十个山峰在13个c-nmr-spectrum注明19个不同的碳原子的存在证实了上述carbon-skeleton保持化合物(图6)。

,8经-光谱分离的化合物被发现347.0627 (M⁺Na) (图- 7)。因此,孤立的分子式分数必须C₁₉H₃₂O₄及其结构所示图1。

结论

孤立的分数2、3、4、8,9,9 a-hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol显示抗菌活性对一些主要植物病原菌。隔离和表征的萜类化合物包括评价抗菌的潜力也可能帮助我们使用2、3、4、8、9、9 -hexamethyl-2, 3, 3, 4, 4、5、8、8, 9, 9 a-decahydro-1h-cyclopenta [b] naphthalene-1, 2, 3, 4 a-tetraol作物protactant。

确认

这项工作是在援助赠款支持DST -钱包(批准号FD / 1626,日期:29.1.2013)和大学Kalyani(批准号12 - 13的牧师/ 1124,日期:28.2.2013),纳迪亚,西孟加拉邦

引用

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