金银花醇提物的抗癌活性评价。叶子

摘要

目的:研究金银花醇提物的抗癌活性。叶子。

方法:凤仙花醇提物的研究。对叶片(EEPC)进行评价抗癌本研究采用两种浓度的金银花乙醇提取物对携带瑞士白化病小鼠的埃利希腹水癌(EAC)进行抗癌研究。(EEPC)在1%羧甲基纤维素(CMC)中分别以100 mg/kg和200 mg/kg的剂量给药，口服。

结果:选取金银花叶片为研究对象，根据ethanobotanical资料显示，它用于治疗一种最危险的疾病癌症，并显示出显著的反应。

结论:凤仙花的叶子。的研究比较并给出详细的报告药理研究过了。

关键字

抗癌，埃利希腹水癌(EAC)，乙醇提取物Premna corymbosa(EEPC)。

介绍

草药有时被称为草药学或植物药，是使用草药为他们治疗或者药用价值。草本植物是一种植物或植物的一部分，因其药用、芳香或美味的品质而受到重视。草本植物产生并含有多种作用于人体的化学物质[1]。几个世纪以来，药用植物一直被用来治疗人类疾病。将它们用作药物的原因在于它们含有具有治疗价值的化学成分[2]。植物的药用价值在于某些化学物质(通常是次要的)代谢物)，产生一个确定的生理对人体的作用。这些植物中最重要的生物活性化合物是生物碱，类黄酮，单宁和酚醛［3.]。全世界每年有600多万人死于癌症。2001年，美国报告了大约1,268,000例新的癌症病例和553,400例死亡[4]。很长一段时间以来，植物被用来治疗癌症。5]。据估计，50%的乳腺癌患者和37%的前列腺癌患者使用草药产品[6]。目前使用的抗癌剂中有60%以上是以这种或那种方式从天然来源获得的[7，8]。生物植物中的活性成分是新药的重要来源，可能会带来新的更好的乳腺癌治疗方法。由于化疗在破坏癌细胞的同时也破坏了正常细胞，有时癌细胞会通过突变对治疗产生抗药性[9]。世界卫生组织(世卫组织)估计，目前有40亿人(占世界人口的80%)在初级卫生保健的某些方面使用草药。草药是所有土著人民传统医学的主要组成部分，也是土著人民传统医学的共同组成部分阿育吠陀、顺势疗法、自然疗法、传统东方疗法和美洲印第安原住民医学。世卫组织指出，在119种植物衍生药物中，约74%用于现代医学的方式与其作为植物药物的传统用途直接相关[10]。

的叶子Premna corymbosa马鞭草属马鞭草科。冠状动脉。是一种大灌木或小乔木，高可达9毫米，树皮带黄色被皮，多刺的大枝和黄褐色木质芳香根。它常见于印度和安达曼海岸。它也发生在阿萨姆邦平原和卡西山，靠近从孟买到马六甲、锡兰、安达曼、尼科巴群岛的海边。Premna corymbosa据报道，罗特尔含有谷甾醇、异恶唑生物碱、普利纳唑、黄酮类化合物和鲁特欧林，该植物的叶子用于胃、驱风、催乳，对消化不良、胀气、绞痛、咳嗽和发烧有用。叶子是很好的外敷痔疮和肿瘤和根有苦味，辛辣，热，泻药的味道;对贫血，vata，糖尿病乳糜尿，炎症，肿胀有用，对支气管炎，消化不良，痔疮，便秘，发烧也有用。其根被制成汤剂，作为一种精神和滋补剂。它们对神经痛也有用，心脏疾病、肝病、咳嗽、哮喘、麻风病等皮肤病。Premna corymbosaRottl。已被用于不同的疾病，如痔疮，肿瘤，肠胃胀气，咳嗽，黏膜炎和发烧。它也适用于神经痛，心脏疾病，肝病，咳嗽，哮喘，麻风病和皮肤病。对叶子进行的植物化学和生物学研究很少[11-14]。因此，我们有兴趣报道Premna corymbosaRottl。的叶子抗癌活动。

材料与方法

标本收集

这种植物Premna corymbosaRottl。马鞭草科的马鞭草广泛分布在整个印度平原，沿着印度和安达曼海岸，它也出现在阿萨姆邦平原和卡西山。被提议进行研究的物种Premna corymbosaRottl。于7月在金奈收集。注意植株的年龄和健康状况，以获得最佳状态的叶片部分。

分类识别

被提议研究的物种被鉴定为Premna corymbosa金奈植物解剖研究中心(PARC)植物学家P. Jayaraman博士。

治疗

叶子用水冲洗，第一个小时在阳光下晒干，然后在阴凉处晒干。将干叶用粉碎机粗磨成粉，经筛分。60用于粉末显微镜，粗粉用于进一步研究。

提取物的制备

乙醇提取

根粗粉(300 gm)在索氏装置中包装好，用90%乙醇连续热提取18-20小时。提取液在高温下过滤，得到的提取液在减压下真空蒸馏，以完全去除溶剂，干燥并保存在干燥器中。称量所得萃取物(深绿色)，以风干粉末状原料计算得率[15]。

急性口服毒性₅₀)研究

在评估和评价一种物质的毒性特性时，急性口服毒性的测定通常是第一步。急性口服毒性采用OECD经济合作与发展组织指南-423 -固定剂量程序(FDP)进行。固定剂量程序(FDP)是一种评估急性口服毒性的方法，涉及确定引起非致死毒性证据(明显毒性)的剂量水平，该剂量水平描述了给药后试验物质的明确毒性迹象，例如增加到下一个最高固定剂量将导致严重毒性迹象的发展，并可能导致死亡率LD₅₀(口服致死中位数剂量，是经统计得出的某一物质单剂量，经口服可导致50%的动物死亡。LD的₅₀数值以试验动物每单位重量所含试验物质的重量(mg/kg)表示[16]。

观察

在选定和治疗的动物中，没有观察到这些给定剂量水平的毒性或死亡。所以LD₅₀的乙醇提取物Premna corymbosaRottl。(EEPC)，根据经合组织指南-420大于2000毫克/公斤(LD)₅₀> 2000mg /kg)。因此，乙醇提取物的生物剂量固定为200 mg/kg。

提取物药物的制备及给药方式

在本次抗癌研究中，我们使用了两种浓度的乙醇提取物Premna corymbosaRottl。(EEPC)在1%羧甲基纤维素(CMC)中分别以100 mg/kg和200 mg/kg的剂量给药，口服。

动物

研究是用体重在18-25克之间的成年瑞士白化小鼠进行的。它们来自泰米尔纳德邦特里希的Periyar药学院。实验期间，将小鼠分组置于聚丙烯笼中，笼内垫料为稻壳，置于标准实验室环境(温度- 25°C±2°C)和光照条件下(光照时间分别为14小时和10小时)。研究人员给小鼠喂食标准颗粒饲料，并随意饮水。这项研究得到了泰米尔纳德邦特里希市动物伦理学院药学学院的批准

抗癌活性

的乙醇提取物Premna corymbosaRottl。研究了叶(EEPC)对携带瑞士白化小鼠埃利希腹水癌(EAC)的抗癌作用。

癌细胞系

埃利希腹水癌(EAC)细胞由印度Trissure的Amla癌症研究中心提供。按照以下步骤将埃利希腹水癌(EAC)细胞移植到动物体内[17]。

肿瘤移植手术

所有实验均在5-6周龄、体重18-25克的瑞士雌雄小鼠身上进行。

本研究选择腹水形式的埃利希腹水癌(EAC)，已知肿瘤细胞在宿主腹腔中以均匀细胞悬液的形式生长。在5-6周龄发育良好的小鼠体内，通过肿瘤细胞(I.P.)的连续移植，使埃利希腹水癌(EAC)维持在腹水形态腹水的肿瘤移植后10-14天左右产生大量的肿瘤单核细胞。取供体小鼠埃利希腹水癌(EAC)的腹水，用生理盐水pH(0.9%)和等温液(1 × 10)稀释⁶将稀释后的细胞/ 0.25 ml注射到小鼠体内。

治疗计划［18-20.]

将体重18-25 gms的瑞士白化小鼠分为5组，每组12只(n = 12)。

治疗组划分如下:

第1组-正常(生理盐水)

第二组:作为肿瘤对照组(1 × 10)⁶EAC细胞/毫升)

第三组:口服乙醇提取物100 mg/kg

第4组:口服乙醇提取物200 mg/kg

5组作为参考标准品(5氟尿嘧啶-20 mg/kg IP)

(四)治疗持续14天

(四)最后一次给药18小时后，每组处死6只小鼠进行抗肿瘤活性和血液学指标的研究。

其余动物组留置，检测肿瘤惊吓小鼠的平均生存时间(MST)和寿命增加(% ILS)。

肿瘤生长反应

枸杞醇提物的抗癌作用Premna corymbosa通过观察体重、腹水肿瘤体积、活和非活肿瘤细胞计数、平均生存时间(MST)和寿命增加百分比(% ILS)的变化来评估Rottl (EEPC)。

肿瘤体积及计数

14 d后，每组各处死6只小鼠，测定肿瘤体积。载玻片制备肿瘤涂片，用Leishmans染色，光镜下检查肿瘤细胞，测定血象。

血液研究

为进行血液学研究，取末次给药后18小时自由流动的尾静脉血液。红细胞和白细胞的总计数，将血液分别吸入RBC和WBC移液管，稀释后在Neuber计数室中计数。采用sahli血红蛋白仪测定血红蛋白浓度。用Leishman’s染色法在新鲜抽取的血膜上进行白细胞的相对计数。从正常、EAC(对照)、标准和乙醇提取物中估计RBC、WBC、Hb%和差异计数Premna corymbosaRottl。(EEPC)处理组[21，22]。

结果

药理研究从急性毒性研究开始逐步进行，然后同时进行抗癌活性筛选。

急性口服毒性研究按照OECD指南420对乙醇提取物进行检测。固定剂量程序，其中给予固定剂量水平的提取物，从50、20、200、500、1000开始，增加到2000 mg/kg体重，并在接下来的48小时内观察毒性体征和症状，实验大鼠未观察到毒性或死亡，发现提取物的LD50大于2000 mg/kg。因此，生物剂量固定为200 mg/kg乙醇提取物。

抗癌活性的筛选

本研究表明，金银花的乙醇提取物。(EEPC)对EAC小鼠有明显的抗癌活性。EEPC在100mg /kg和200mg /kg剂量下对各参数的影响如下:

平均生存时间与肿瘤生长的影响

凤仙花乙醇提取物的处理。与EAC对照组相比，EEPC在100和200 mg/kg剂量下显著减少肿瘤体积和活细胞计数，且呈剂量依赖性。此外，与EAC对照组相比，不同剂量EEPC的非活肿瘤细胞计数增加，如图表1。

表1:枸杞叶乙醇提取物的药理作用Premna corymbosaRottl (Eepc)对EAC小鼠肿瘤生长的影响。

EEPC剂量为100 mg/kg和200 mg/kg对EEPC小鼠平均存活时间和寿命增加的影响见表2和图1。EEPC治疗组的平均生存时间分别为36.5±2.9 (100 mg/kg)天和42.9±3.9 (200 mg/kg)天，其中标准药物5氟尿嘧啶(20 mg/kg)，治疗组平均生存时间49.5±4.1 d。

表2:枸杞叶乙醇提取物的作用Premna corymbosaRottl。(eepc)对EAC小鼠平均存活时间的影响。

对血液学参数的影响

如图所示表3和图2与正常小鼠相比，EAC对照小鼠血红蛋白含量(9.65 g%)显著降低。EEPC剂量为100和200 mg/kg时，EAC处理小鼠血红蛋白含量分别升高10.15 g和11.70 g%。在提取液处理的小鼠中观察到红细胞计数的适度变化。与正常小鼠相比，含EAC小鼠白细胞总数显著增加;然而，与对照组相比，EEPC处理小鼠的WBC计数显著降低。白细胞计数差异，EAC对照组淋巴细胞百分比降低，中性粒细胞百分比增加;与EAC对照组相比，EEPC处理小鼠淋巴细胞明显增加，中性粒细胞明显减少。

表3:枸杞叶乙醇提取物的作用Premna corymbosaRottl (eepc)对EAC处理小鼠血液学参数的影响。

活细胞和非活细胞计数

对腹水细胞进行活细胞和非活细胞的计数，用色氨酸蓝(0.4%生理盐水)染色，在Neuber计数室进行染料排除试验和计数。不接受染色的细胞是可存活的，接受染色的细胞是不可存活的(图1）.

讨论

草药有时被称为草药学或植物医学，是使用草药的治疗或药用价值。草本植物是一种植物或植物的一部分，因其药用、芳香或美味的品质而受到重视。草本植物产生并含有多种作用于人体的化学物质。草药医生使用植物的叶子、花、茎、浆果和根来预防、缓解和治疗疾病。从“科学”的角度来看，许多草药疗法被认为是实验性的。然而，事实是，草药有着悠久而受人尊敬的历史。20世纪的许多常见药物都是从古代的治疗传统发展而来的，这些传统是用特定的植物来治疗健康问题的。今天，科学已经分离出大量植物的药用特性，并提取和分析了它们的治疗成分。许多植物成分现在是在大型实验室中合成的，用于药物制剂。例如，长春新碱(一种抗肿瘤药物)、洋地黄(一种心脏调节剂)和麻黄碱(一种用于减少呼吸阻塞的支气管扩张剂)最初都是通过对植物的研究发现的。 The leaf of Premna corymbosa Rottl was selected for our project, on the basis of ethanobotanical information which reveals its use against one of the most hazardous disease cancer. Literature survey showed that very less work has been performed on this plant and ethnobotanical information about the uses of the leaf part of the plant showing activities against various diseases. So we can validate scientifically for folk claim for its therapeutic activity.

本研究旨在评价EEPC对EAC小鼠的抗癌作用。100、200 mg/kg剂量的EEPC对小鼠肿瘤体积、肿瘤细胞数量均有明显抑制作用，血液学指标基本恢复正常。在携带EAC的小鼠中，发现腹水肿瘤体积有规律地快速增加。腹水是肿瘤细胞的直接营养来源，随着肿瘤的生长，腹水的迅速增加将是满足肿瘤细胞营养需求的一种手段。EEPC能抑制荷瘤小鼠的肿瘤体积、肿瘤细胞计数，并增加了斑痣蓝阳性染色的死细胞百分比。判断任何抗癌药物价值的可靠标准是延长动物的寿命。EEPC降低了腹水体积、活细胞数，延长了寿命百分比。荷瘤小鼠的贫血主要是由于红细胞或血红蛋白百分比的减少，这可能是由于缺铁或溶血或肌病引起的。EEPC治疗可使血红蛋白含量、红细胞和白细胞计数或多或少恢复到正常水平。

结论

根据经合组织指南第423条(固定剂量程序)进行的急性口服毒性研究表明，高达2000 mg/kg的乙醇提取物是无毒和安全的。药理研究表明，乙醇提取物具有不同程度的抗癌活性。乙醇提取物显示出这些活性，可能是由于提取物中含有黄酮类、三萜和类固醇。乙醇提取物(200 mg/kg)对红细胞和血红蛋白百分比等血液指标有显著影响，并能延长动物寿命，因此可作为其他抗癌药物的良好辅助剂，在癌症植物药物的开发中具有广阔的应用前景。因此，目前的研究结果证明了使用植物治疗癌症的民间疗法是正确的。进一步以不同模式对该植物的不同生物活性进行研究，不仅可以验证阿育吠陀、悉达和民间传统从业者所声称的活性类型，而且可以在药学领域带来创新。

确认

作者感谢印度金奈植物解剖研究中心(PARC)主任P. Jayaraman博士对植物鉴定的帮助。

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