鸡冠花乙醇提取物的抗癌活性评价。叶子

摘要

目的:研究伞鼻草乙醇提取物的抗肿瘤活性。叶子。

方法:伞鼻草乙醇提取物。对叶片(EEPC)进行评价抗癌在目前的抗癌研究中，我们使用了两种浓度的corymbosa Rottl乙醇提取物。(EEPC)剂量为100 mg/kg, 1%羧甲基纤维素(CMC)剂量为200 mg/kg，并口服。

结果:本研究以corymbosa Rottl的叶片为材料，在此基础上ethanobotanical这一信息揭示了它对最危险的疾病之一癌症的治疗效果显著。

结论:corymbosa Rottl的叶子。研究比较并给出详细的报告药理研究过。

关键字

抗癌，Ehrlich腹水癌(EAC)，乙醇提取物Premna corymbosa(EEPC)。

简介

草药有时被称为草药学或植物药，是用草药治其病治疗或者药用价值。草本植物是因其药用、芳香或美味的特性而有价值的植物或植物部分。草本植物产生并含有多种作用于人体的化学物质[1］．药用植物用于治疗人类疾病已有几个世纪的历史。将它们用作药物的原因是它们含有具有治疗价值的化学成分[2］．植物的药用价值在于某些化学物质(通常是次要的)代谢物)，产生一个明确的生理对人体的作用。植物的这些生物活性化合物中最重要的是生物碱、类黄酮、单宁和酚醛［3.］．世界上每年有600多万人死于癌症。2001年，美国报告了约1,268,000例新发癌症病例和553,400例死亡病例[4］．长期以来，植物一直被用于治疗癌症。5］．据估计，50%的乳腺癌患者和37%的前列腺癌患者使用草药产品[6］．目前使用的60%以上的抗癌药都以这样或那样的方式来自自然来源[7，8］．生物植物中的活性成分是新药的重要来源，有可能为乳腺癌带来新的更好的治疗方法。由于化疗在破坏癌细胞的同时也会破坏正常细胞，有时癌细胞会通过突变对治疗产生耐药性[9］．世界卫生组织(世卫组织)估计，目前有40亿人(占世界人口的80%)在初级卫生保健的某些方面使用草药。草药是所有土著人民传统医学的一个主要组成部分，也是阿育吠陀顺势疗法、自然疗法、传统东方医学和美洲印第安医学。世卫组织指出，在119种植物来源的药物中，约74%在现代医学中的使用方式与其作为当地文化植物药物的传统用途直接相关[10］．

叶子Premna corymbosa马鞭草科rotl属。伞鼻草。是一种大灌木或小乔木，高可达9毫米，黄色的圆孔状树皮，多刺的大树枝和黄褐色的木质芳香根。它常见于印度和安达曼海岸。它也发生在阿萨姆平原和卡西山，从孟买到马六甲，锡兰，安达曼，尼科巴群岛的海边。Premna corymbosa据报道，Rottl含有谷甾醇，异恶唑生物碱:Premnazole，黄酮类化合物和鲁特奥林，植物的叶子用于胃，泄气，催乳，对消化不良，胀气，绞痛，咳嗽和发烧有用。叶外敷于痔疮和肿瘤，根有苦、辣、热、通便之味;对贫血，腹胀，糖尿病，乳尿，炎症，肿胀，支气管炎，消化不良，痔疮，便秘，发热有帮助。根在汤剂中作为一种滋补。它们对神经痛也很有用，心脏疾病、肝病、咳嗽、哮喘、麻风病等皮肤病．Premna corymbosaRottl。已用于不同的疾病，如痔疮，肿瘤，胀气，咳嗽，粘膜炎和发烧。对神经痛、心脏疾病、肝病、咳嗽、哮喘、麻风病及皮肤病也有疗效。对叶片进行的植物化学和生物学研究非常少[11-14］．因此，我们对此很感兴趣Premna corymbosaRottl。的叶子抗癌活动。

材料与方法

标本采集

这种植物Premna corymbosaRottl。马鞭草属马鞭草科，广泛分布在印度平原，沿印度和安达曼海岸，也出现在阿萨姆邦平原和卡西山区。也就是我们研究的物种Premna corymbosaRottl。是7月份在金奈采集的。对植物的年龄和健康状况进行了护理，以获得最佳状态的叶片部分。

分类识别

拟研究的物种被鉴定和鉴定为Premna corymbosa由P. Jayaraman博士，植物学家，植物解剖研究中心(PARC)，金奈。

治疗

叶子用水清洗，在阳光下晒干，然后在阴凉处晒干。将干燥的叶片用研磨机粗磨成粉，并通过筛。60用于粉末显微镜&粗粉用于进一步研究。

提取物的制备

乙醇提取

将深干粗粉(300克)装入索氏仪中，用90%乙醇连续热萃取18-20小时。萃取物在高温下过滤，所得萃取物在减压下在真空中蒸馏，以完全去除溶剂，干燥并保存在干燥器中。称量所得到的萃取物(深绿色)，并以风干的粉状粗料计算得率[15］．

急性口服毒性(ld₅₀)研究

在评估和评价一种物质的毒性特性时，急性口服毒性的测定通常是第一步。急性口服毒性采用OECD指南-423(经济合作与发展组织)-固定剂量程序(FDP)进行。固定剂量程序(FDP)是一种评估急性口服毒性的方法，包括确定引起非致死毒性证据(明显毒性)的剂量水平，描述试验物质给药后的明显毒性迹象，例如增加到下一个最高固定剂量将导致严重毒性迹象的发展，并可能导致死亡₅₀(口服中位数致死剂量，是一种经统计得出的单剂量物质，经口服给药可导致50%的动物死亡。LD的₅₀数值以试验物质重量/试验动物单位重量(mg/kg)表示[16］．

观察

在选定和治疗的动物中，没有观察到这些给定剂量水平的毒性或死亡。所以LD₅₀的乙醇提取物Premna corymbosaRottl。(EEPC)根据OECD指南-420大于2000毫克/公斤(LD₅₀> 2000 mg/kg)。因此，乙醇提取物的生物剂量固定为200 mg/kg。

提取物的制备及给药方式

对于目前的抗癌研究，我们使用了两种浓度的乙醇提取物Premna corymbosaRottl。(EEPC)剂量为100 mg/kg, 1%羧甲基纤维素(CMC)剂量为200 mg/kg，并口服。

动物

研究对象是成年瑞士白化小鼠，体重在18-25克之间。它们来自泰米尔纳德邦特里希的佩里亚尔药学院。在整个实验过程中，小鼠被分组安置在含有稻壳的聚丙烯笼中，并在标准实验室条件(温度- 25°C±2°C)和光照(分别为14小时和10小时)下饲养。这些小鼠被喂食标准的颗粒饮食，并自由饮水。这项研究得到了泰米尔纳德邦Trichy的动物伦理佩里亚尔药学院的批准

抗癌活性

乙醇提取物Premna corymbosaRottl。评价叶(EEPC)对Ehrlich腹水癌(EAC)荷瘤小鼠的抗癌活性。

癌细胞系

埃利希腹水癌(EAC)细胞由印度Trissure的Amla癌症研究中心提供。将Ehrlich腹水癌(EAC)细胞按以下步骤移植到动物体内[17］．

肿瘤移植手术

所有实验都是在5-6周龄、体重18-25克的瑞士雌雄小鼠身上进行的。

本研究选择腹水形式的埃利希腹水癌(EAC)，已知肿瘤细胞在宿主腹腔内呈均匀细胞悬浮状生长。在5-6周龄小鼠中，通过连续移植肿瘤细胞(I.P.)，埃利希腹水癌(EAC)在瑞士小鼠中保持腹水形态腹水的肿瘤含有移植后10-14天左右产生的大量肿瘤单眼细胞。从供体小鼠中提取EAC腹水，用pH(0.9%)和(1 × 10)稀释⁶细胞/ 0.25 ml)的稀释溶液注入小鼠体内。

治疗计划［18-20.］

体重18-25克的瑞士白化小鼠被分为5组，每组12只(n = 12)。

正在治疗的组被指定如下。

第1组-正常(生理盐水)

第2组-肿瘤对照(1 × 10⁶EAC细胞/毫升)

第三组-口服乙醇提取物100 mg/kg

第4组-口服乙醇提取物200 mg/kg

作为参考标准(5氟尿嘧啶- 20mg /kg IP)

(四)均连续治疗14 d

(六)在最后一次18小时禁食后，每组各取6只小鼠进行抗肿瘤活性和血液学参数研究。

(三)保留其余动物组，检测肿瘤惊吓小鼠的平均生存时间(MST)和寿命延长(% ILS)。

肿瘤生长反应

枸杞乙醇提取物的抗癌作用Premna corymbosaRottl， (EEPC)通过观察体重、腹水肿瘤体积、存活和非存活肿瘤细胞计数、平均生存时间(MST)和寿命增加百分比(% ILS)的变化来评估。

肿瘤体积和数量

14天结束时，每组6只小鼠被处死，测量肿瘤体积。取肿瘤涂片，用利什曼染色，光镜下检查肿瘤细胞，测定血象。

血液研究

对于血液学研究，血液是从最后一次给药18小时后自由流动的尾静脉血液中获得的。将血液分别抽入RBC和WBC移液管中，在Neuber计数室中稀释并计数，计算红细胞和白细胞总数。采用沙氏血红蛋白仪测定血红蛋白浓度。用利什曼a染色法对新鲜抽取的血膜进行白细胞计数。从正常、EAC(对照)、标准和乙醇提取物中估计RBC、WBC、Hb%和差异计数Premna corymbosaRottl。(EEPC)治疗组[21，22］．

结果

药理研究从急性毒性研究开始，逐步进行，同时详细筛选抗癌活性。

急性口服毒性研究按照经合组织指南420对乙醇提取物进行。固定剂量程序，即给予固定剂量的提取物，从50、20、20、500、1000开始，增加到2000 mg/kg体重，并在接下来的48小时内观察毒性症状和体征，在实验大鼠中没有观察到毒性或死亡，并且发现提取物的LD50大于2000 mg/kg。因此生物剂量固定为200 mg/kg乙醇提取物。

抗癌活性筛选

本研究结果表明，伞鼻草乙醇提取物具有较好的提取效果。(EEPC)对EAC小鼠具有显著的抗癌活性。EEPC在100 mg/kg和200 mg/kg剂量下对各项参数的影响如下所示。

平均生存时间和肿瘤生长的影响

伞鼻草乙醇提取物的处理。与EAC对照组相比，100和200 mg/kg剂量的EEPC显著降低了肿瘤体积和活细胞计数，并呈剂量依赖性。此外，与EAC对照组相比，不同剂量EEPC的非存活肿瘤细胞数量增加，如图所示表1．

表1:枸杞叶乙醇提取物的作用Premna corymbosaRottl (Eepc)对EAC小鼠肿瘤生长的影响。

EEPC在100 mg/kg和200 mg/kg剂量下对EAC小鼠平均生存时间和寿命增加%的影响显示在表2而且图1．EAC对照组的平均生存时间为23.2±1.51天，而EEPC治疗组的平均生存时间分别增加到36.5±2.9 (100 mg/kg)和42.9±3.9 (200 mg/kg)天氟尿嘧啶(20 mg/kg)，治疗组平均生存期49.5±4.1 d。

表2:叶乙醇提取物的作用Premna corymbosaRottl。(eepc)对EAC小鼠平均生存时间的影响。

对血液参数的影响

如表3而且图2与正常小鼠相比，EAC对照组小鼠血红蛋白含量(9.65 g%)显著降低。EEPC剂量为100和200 mg/kg时，EAC处理小鼠血红蛋白含量增加(分别为10.15 g和11.70 g%)。在提取物处理的小鼠中观察到红细胞计数的中度变化。与正常小鼠相比，EAC小鼠的白细胞总数显著增加;然而，与对照组相比，EEPC处理小鼠的WBC计数显著降低。在白细胞计数差异中，EAC对照组淋巴细胞百分比降低，中性粒细胞百分比增加;与EAC对照相比，EEPC处理小鼠淋巴细胞明显增加，中性粒细胞明显减少。

表3:叶乙醇提取物的作用Premna corymbosaRottl.(eepc)对EAC处理小鼠血液参数的影响。

活细胞和非活细胞计数

活细胞和非活细胞计数:腹水细胞用0.4%生理盐水的特来芬蓝染色，在诺伯计数室进行不染试验和计数。没有吸收染料的细胞是可活的，而那些吸收染料的细胞是不可活的(图1）.

讨论

草药医学有时被称为草药学或植物医学，是使用草药进行治疗或药用价值。草本植物是因其药用、芳香或美味的特性而有价值的植物或植物部分。草本植物产生并含有多种作用于身体的化学物质。草药医生利用植物的叶子、花、茎、浆果和根来预防、缓解和治疗疾病。从“科学”的角度来看，许多草药疗法都是实验性的。然而，事实是草药有着悠久而受人尊敬的历史。20世纪许多人们熟悉的药物都是由古老的治疗传统发展而来的，这些传统用特定的植物来治疗健康问题。今天，科学已经分离出大量植物的药用特性，并提取和分析了它们的治疗成分。许多植物成分现在是在大型实验室合成的，用于药物制剂。例如，长春新碱(一种抗肿瘤药物)、洋地黄(一种心脏调节剂)和麻黄碱(一种用于减少呼吸充血的支气管扩张剂)最初都是通过对植物的研究发现的。 The leaf of Premna corymbosa Rottl was selected for our project, on the basis of ethanobotanical information which reveals its use against one of the most hazardous disease cancer. Literature survey showed that very less work has been performed on this plant and ethnobotanical information about the uses of the leaf part of the plant showing activities against various diseases. So we can validate scientifically for folk claim for its therapeutic activity.

本研究旨在评价EEPC对EAC荷瘤小鼠的抗癌作用。EEPC在100和200 mg/kg剂量下对小鼠的肿瘤体积和肿瘤细胞数量有显著抑制作用，并使血液参数恢复到正常水平。在EAC小鼠中，腹水肿瘤体积有规律地快速增加。腹水是肿瘤细胞的直接营养来源，随着肿瘤生长而迅速增加腹水是满足肿瘤细胞营养需求的一种手段。EEPC可抑制荷瘤小鼠的肿瘤体积、肿瘤细胞数量，并增加特来芬蓝阳性染色死亡细胞的百分比。判断任何抗癌药物价值的可靠标准是延长动物的寿命。EEPC降低腹水体积，活细胞计数和增加寿命百分比。在荷瘤小鼠中遇到的贫血主要是由于红细胞或血红蛋白百分比的减少，这可能是由于缺铁或溶血性或结核性疾病而发生的。经EEPC治疗后，血红蛋白含量、红细胞和白细胞计数或多或少恢复正常水平。

结论

根据OECD指南-423，固定剂量程序进行的急性口服毒性研究表明，高达2000 mg/kg的乙醇提取物是无毒和安全的。乙醇提取物的药理研究表明，其具有不同程度的抗癌活性。乙醇提取物中含有黄酮类化合物、三萜和甾体类化合物，具有上述活性。乙醇提取物(200 mg/kg)对红细胞、血红蛋白百分比等血液参数有显著影响，对延长动物寿命有显著作用，可作为其他抗癌药物的良好辅助剂，在肿瘤植物药物的开发中具有较好的应用前景。因此，目前的研究结果证明，使用植物治疗癌症的民间传说的偏方。进一步研究这种植物在不同模式下的不同生物活性，不仅可以验证阿育吠陀、悉达、民间和传统从业者所声称的活动类型，也将为药学领域带来创新。

确认

作者感谢印度钦奈植物解剖研究中心(PARC)主任P. Jayaraman博士对植物鉴定的帮助。

参考文献

1. 肠易激综合征辅助药物在治疗中的作用。奥地利内科医生。2009;38:966-968。
2. 唐杰，等。新型不依赖ph值的两亲性氨基酸共聚物胶束的合成、表征、载药能力及安全性。Pharmazie。2012;67:756 - 764。
3. Edeoga HO，等。尼日利亚一些药用植物的植物化学成分。生物技术学报。2005;4:685-688。
4. Nakamura S和Mashino T.水溶性富勒烯衍生物的药物发现。日本医学杂志2012;49:248-254。
5. Skrovánková S，等。常见药用植物的抗氧化活性和保健作用。Adv Food Nutr res 2012;67:75-139。
6. 拉达斯EJ，等。外用云南白药治疗青少年晚期癌症出血并发症的辅助治疗。支持护理癌症。2012;20:3379-3383。
7. 三叶草种源物质和提取物的生物活性及其药用前景。中华民族药典杂志，2012;143:14-23。
8. Balunas MJ和Kinghorn AD。从药用植物中发现药物。科学通报，2005;
9. Díaz-Riquelme J，等。葡萄(Vitis vinifera L.)芽发育过程中的转录组变异。BMC植物生物学2012;12:181。
10. [10]。库马尔美联社，等。天然产物:开发黄柏皮提取物治疗前列腺癌的潜力。医学化学。2010;10:388-397。
11. corymbosa (Burm.f.)的抗炎活性Rottl。&野生叶提取物在Wistar白化大鼠。亚洲热带医学杂志，2011;4:510-513。
12. carthikeyan M和Deepa K. corymbosa (Burm.f.)Rottl的抗感伤活性。& Willd。《基础临床物理药物学杂志》2010;(4): 347 - 356。
13. Ong CY，等。马来西亚半岛用于光动力疗法的陆生植物提取物体外光细胞毒活性的系统分析。中国生物工程学报(自然科学版);2009;
14. Brankovic S，等。铁铁醇提物解痉活性的研究。& Heldr。对离体大鼠回肠进行收缩。中国医药食品杂志。2011;14:495-498。
15. Tiwari P，等。根的抑菌活性及理化性质评价Butea monosperma．热带生物医学杂志，2012:S881-S883。
16. 辛格RP，等。水提醇提取物的抗抑郁活性生姜．IRJP。2012; 3:149 - 151
17. Sivakumar T，等。抗肿瘤和抗氧化活性Bryonia laciniosa对抗携带埃利希腹水癌的瑞士白化小鼠。东方医药，2005;5:32 -330。
18. Sivakumar T，等。抗肿瘤和抗氧化活性Bryonia laciniosa对抗携带埃利希腹水癌的瑞士白化小鼠。东方医药，2005;5:32 -330。
19. Woloch C等人。结直肠癌患者5-FU和5-FDHU的群体药代动力学分析:寻找与胃肠毒性相关的生物标志物。2012;12:1713-1719。
20. Collery P，等。用于治疗癌症的三种金属的组合:镓、铼和铂。1.确定最佳治疗方案。抗癌法案2012;32:2769-2781。
21. Accorsi P，等。影响自体移植造血祖细胞收集因素的多元回归分析。中国生物医学工程学报，2012;
22. Omatsu T，等。普通绒猴血液及血清生化指标的变化(Callithrix jacchus接种登革病毒后。中华医学杂志(英文版)2012;